肽修饰的甲氨蝶呤合成及体外抗肿瘤作用初步研究

摘要

目的：合成LH-RH肽修饰的甲氨蝶呤(LH-RH-MTX)并对其体外抗肿瘤作用进行初步研究。
　　 方法：以APA为原料,与[D-Lys6]LH-RH共价连接合成LH-RH-MTX,采用ESI-MS、IR及1H-NMR进行结构确证。以LH-RH受体高表达的人乳腺癌MCF-7细胞及低表达的人红白血病K562细胞作为受试细胞,分别采用MTT比色法检测LH-RH-MTX对细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测LH-RH-MTX对细胞周期和细胞凋亡的影响,免疫细胞化学法检测LH-RH-MTX对细胞LHRHR表达的影响,RT-PCR技术检测LH-RH-MTX对细胞LHRHR mRNA表达量的影响。
　　 结果：合成产物LH-RH-MTX为淡黄色结晶性粉末,产率为64.98％,熔点为165～166℃。采用ESI-MS、IR及1H-NMR进行了结构确证,产物分子量为1268.57,与理论值相符。MTT实验结果表明,LH-RH-MTX对MCF-7细胞的增殖抑制作用明显高于K562细胞;相同浓度的LH-RH-MTX对MCF-7细胞的增殖抑制作用明显高于游离MTX。LH-RH-MTX对鼠骨髓单核细胞的抑制作用明显小于游离MTX。流式细胞仪检测细胞周期结果显示,经LH-RH-MTX作用后,MCF-7细胞周期动力学发生了变化,G0/G1期细胞明显减少,S期细胞明显增加。流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,LH-RH-MTX组细胞凋亡率与对照组相比明显升高,而MTX组细胞凋亡率与对照组相比无显著性差异。免疫细胞化学结果显示,LH-RH-MTX组细胞阳性率明显低于对照组和MTX组。RT-PCR检测结果显示,LH-RH-MTX组LHRHR mRNA的相对表达量与对照组相比明显下降,而MTX组与对照组相比无显著性差异。
　　 结论：MTX经过LH-RH肽修饰之后,对LHRHR高表达的人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用明显增强,且对鼠骨髓单核细胞的抑制作用明显降低;LH-RH-MTX对MCF-7细胞周期进程有影响,主要作用于S期,并可诱导细胞发生凋亡;LH-RH-MTX可以显著下调MCF-7细胞中LHRHR的表达。提示LH-RH可作为导向分子,将抗恶性肿瘤药物靶向递送到LHRHR高表达的肿瘤细胞,通过LH-RH与其受体的特异性结合而发挥抗肿瘤作用,降低药物的毒副作用,提高治疗指数,实现肿瘤的靶向治疗。