siRNA沉默B7-H4表达对人肺腺癌A549增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

摘要

目的：探讨靶向B7-H4基因的小干扰RNA(small interferenceRNA，siRNA)转染人肺腺癌细胞A549后，观察其增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响并初步研究其可能的分子机制。
　　方法：体外化学合成B7-H4特异性siRNA(B7-H4-siRNA)序列，在EntransterTM-R的介导下转染A549细胞，细胞免疫化学、Westernblotting分别检测siRNA-B7-H4转染前后B7-H4蛋白及CyclinD1蛋白的表达；RT-PCR检测转染前后B7-H4 mRNA的表达；MTT法、倍增时间、流式细胞技术(FCM)检测siRNA前后细胞的增殖、细胞凋亡率和细胞周期的变化，A549细胞的侵袭、迁移能力通过Transwell方法来测定，之后综合分析其统计学上有无差异，以P<0.05为判断标准。
　　结果：细胞免疫化学显示B7-H4蛋白在人肺腺癌细胞A549中呈阳性表达。B7-H4-siRNA成功转染人肺腺癌A549细胞，RT-PCR结果表明siRNA转染48h后B7-H4 mRNA表达水平降低，与未转染组、Ctr1-siRNA组和转染试剂对照组相比，有显著性差异(P<0.05)；Westernblotting结果显示B7-H4-siRNA组(转染72h)转染抑制A549细胞中B7-H4蛋白及CyclinD1蛋白的表达；B7-H4-siRNA转染后A549细胞增殖活性明显下降，B7-H4-siRNA组A549细胞的倍增时间明显长于未转染组、Ctr1-siRNA组和转染试剂对照组[(33.78±0.26)vs(28.69±0.18)(27.32±0.13)vs(26.93±0.19)h，P<0.05]。B7-H4-siRNA转染使A549细胞阻滞在G1期。B7-H4-siRNA组A549细胞的侵袭细胞数明显少于未转染组[(89.80±0.99)个vs(186.20±1.33)个，P<0.05]。B7-H4-siRNA组A549细胞的迁移细胞数明显少于未转染组、Ctr1-siRNA组和转染试剂对照组[(60.20±0.37)个vs(102.57±0.52)、(100.72±0.31)、(98.65±0.21)个，P<0.05]。
　　结论：B7-H4蛋白在人肺腺癌A549细胞中阳性表达，B7－H4－siRNA能有效沉默A549细胞B7－H4 mRNA与蛋白的表达，使A549细胞的增殖被抑制、凋亡增加，侵袭、迁移受到限制。因此，B7－H4可能作为为肺癌基因治疗的一个候选靶点。