基于重组慢病毒的新型HBV表型分析系统

摘要

目的:以慢病毒系统为基础，结合HBV聚合酶反式互补技术建立一种全新的HBV体外表型分析系统。
　　方法:
　　1.将HBV pol克隆到慢病毒载体pLenti-mcs，得到重组质粒pLenti-pol，重组质粒pLenti-pol与三种慢病毒包装质粒共转染293FT细胞，产生HBV pol重组慢病毒，命名为Lenti-pol;
　　2.构建pol基因表达缺失的HBV1.1倍体质粒，将其转染至HEK293细胞中，经过两个月的G418筛选，获得pol基因表达缺失的HBV1.1倍体稳定细胞系，命名为HBV P-293;
　　3.利用反式互补，将重组慢病毒Lenti-pol导入到稳定细胞系HBVP-293中，经过10天杀稻瘟菌素(blasticidin)筛选之后，对获得的细胞293HBV P-+P进行HBV复制鉴定;
　　4.利用293HBV P-+P细胞，进行野生型HBV药物敏感性分析实验;
　　5.构建系列含有RT典型耐药的HBV pol重组慢病毒，通过反式互补，获得可复制这些突变病毒的细胞系。
　　结果:
　　1.HBV pol重组慢病毒构建成功;
　　2.成功构建pol基因表达缺失的HBV1.1倍体稳定细胞系;
　　3.将重组慢病毒Lenti-pol导入到稳定细胞系HBV P-293中，HBVP-293能够复制HBV DNA;
　　4.成功构建一系列含有RT典型耐药突变的HBV pol重组慢病毒，分别导入HBV P-293中，获得相应突变病毒复制细胞系。
　　结论:成功构建了一种基于重组慢病毒的新型HBV表型分析系统，该系统将有助于更有效地进行HBV体外表型分析。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

全文总结

本课题创新点

参考文献

文献综述 耐药HBV突变株适应性和感染性的研究方法

致谢

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