锌对尿毒症血清诱导的内皮细胞氧化应激的保护作用及其机制

摘要

目的:探讨锌对尿毒症血清诱导的血管内皮细胞氧化应激的保护作用及可能机制。
　　方法:收集尿毒症患者及健康正常人血清，以15％的血清浓度作用于血管内皮细胞。分为4组进行实验:15%正常人血清组（N）、15%尿毒症血清组(U)、15%尿毒症血清+10μmo l/L硫酸锌组(U+10)、15%尿毒症血清+30μmo l/L硫酸锌组(U＋30)。荧光素DCF H-DA探针法测定细胞内活性氧含量，采用总抗氧化能力检测试剂盒检测细胞总抗氧化能力，实时荧光定量PCR检测细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸：醌氧化还原酶1（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate: quinine oxidoreductase1,NQO-1)及Ⅰ型血红素氧合酶(heme oxygenase,HO-1)mRNA的表达，蛋白印迹法检测细胞NQO-1、HO-1及核因子E2相关因子2(nuc leus factor-E2 related factor2,Nrf2)的表达。
　　结果:与N组比较，U组内皮细胞的总抗氧化能力显著降低(N vs. U:452.8±19.5 vs.321.4±27.8,P<0.001)，活性氧水平升高(22.9±2.7 vs.75.1±11.2,P<0.001)；而锌干预处理(U+10和U+30)则增加了细胞总抗氧化能力(U vs. U+10 vs. U+30:321.4±27.8 vs.455.7±16.0 vs.462.9±18.6,均有P<0.001)，减少了活性氧产生(75.1±11.2 vs.45.2±7.6 vs.49.3±8.3,P<0.001)；同时，尿毒症血清组及锌干预组NQO-1、HO-1 mRNA及蛋白表达增高(NQO-1蛋白：N vs. U vs. U+10:0.40±0.05 vs.0.65±0.07 vs.1.09±0.08;HO-1蛋白：0.21±0.07 vs.0.47±0.08 vs.1.09±0.11,P<0.05)，且锌干预组较尿毒症血清组增加更显著(P<0.05)；锌干预组细胞核Nrf-2表达较正常血清组及尿毒症血清组增加(N vs. U vs. U+10 vs. U+30:0.23±0.07 vs.0.25±0.07 vs.0.65±0.07 vs.0.69±0.06,均有P＜0.001)；但上述指标在不同浓度的锌处理组间均无显著差异。
　　结论:锌可能通过促进Nrf-2核转位，增加抗氧化酶NQO-1及HO-1表达，进而增加血管内皮细胞的总抗氧化能力和削弱尿毒症血清诱导的氧化应激反应。

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前言

1 材料与方法

1.1研究对象

1.2主要试剂与仪器

1.3主要试剂配制

2 实验方法和步骤

2.1内皮细胞培养

2 .2用cck-8试剂盒检测细胞生长活力

2.3不同锌离子浓度对细胞生长影响

2.4细胞总抗氧化能力检测

2.5细胞内活性氧检测

2 .6 qRT-PCR检测内皮细胞N QO-1及HO-1的m RNA的表达

2.7 Western-Blot 检测内皮细胞HO-1 、NQO-1及细胞核蛋白Nrf-2蛋白表达

2. 8 统计学分析

3 结果

3. 1 不同浓度尿毒症血清及正常人血清对内皮细胞生长活力影响

3 .2 不同浓度锌离子对内皮细胞增殖活力影响

3.3锌对尿毒症血清作用的内皮细胞总抗氧化能力（TAOC）的影响

3 .4锌对尿毒症血清诱导内皮细胞活性氧ROS的影响

3 .5 RNA质量分析

3.6 qRT-PCR检测内皮细胞NQO-1及HO-1的mRNA表达

3. 7 Western blot检测内皮细胞NQO-1、HO-1蛋白表达及细胞核Nrf-2表达情况

4 讨论

全文小结

参考文献

文献综述:血液透析与钙、磷、镁、铁、锌代谢紊乱研究进展

致谢

攻读学位期间撰写的文章