MicroRNA-210对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

摘要

第一部分、构建放射抗拒鼻咽癌细胞系
　　目的：建立鼻咽癌放射抗拒细胞系CNE-2R，检测其与原细胞系(CNE-2)表达差异的miRNAs,为进一步研究miRNAs与鼻咽癌放疗敏感性的关系奠定基础。
　　方法：用剂量梯度法建立鼻咽癌放射抗拒细胞系CNE-2R。然后，应用细胞周期实验、细胞增殖实验、克隆形成实验分析诱导的放射抗拒细胞系与原细胞系存在放射敏感性差异。最后，用microRNA基因芯片检测CNE-2和CNE-2R细胞表达差异的miRNAs。
　　结果：与原亲代细胞CNE-2相比，放射抗拒细胞CNE-2R阻滞于G2/M期的比例明显减少(P<0.05)。经过0、4、8和12Gy的照射后，CNE-2细胞的存活率较CNE-2R细胞降低(P<0.05)。经过0、4、8和12Gy剂量照射后，CNE-2R细胞的放射敏感性较CNE-2细胞降低。microRNA基因芯片显示诱导成功的CNE-2R与CNE-2细胞比较，有92个表达差异>2倍的miRNAs,并用RT-PCR验证miR-210的相对表达量(P<0.05)。
　　结论:CNE-2细胞与放射抵抗的CNE-2R细胞的miRNAs表达存在差异，其中miRNA-210的表达差异倍数最大。
　　第二部分、MicroRNA-210负性调节鼻咽癌细胞放射敏感性
　　目的：研究miR-210对鼻咽癌细胞的放射敏感性的影响,为治疗鼻咽癌放射抵抗提供新的靶点。
　　方法：用LV-hsa-miR-210慢病毒感染CNE-2细胞，用LV-hsa-miR-210-inhibition慢病毒感染CNE-2R细胞，RT-PCR检测miR-210在CNE-2-miR-210和CNE-2R-miR-210-inhibition细胞中的相对表达量。用细胞周期和凋亡实验、细胞增殖实验、克隆形成实验检测CNE-2,CNE-2R,CNE-2-miR-210和CNE-2R-miR-210-inhibition细胞的周期、凋亡、存活率和放射敏感性的差异。
　　结果：CNE-2和CNE-2R-miR-210-inhibition细胞处于G2/M期的比例明显高于CNE-2-miR-210和CNE-2R细胞(P<0.05)，而它们处于S期的比例明显低于CNE-2-miR-210和CNE-2R细胞(P<0.05)。经过4Gy的照射后，CNE-2和CNE-2R-miR-210-inhibition细胞的凋亡率较CNE-2-miR-210和CNE-2R细胞高(P<0.05)。经过4、8和12Gy的照射后，CNE-2和CNE-2R-miR-210-inhibition细胞的存活率和存活分数较CNE-2-miR-210和CNE-2R细胞降低(P<0.05)。
　　结论：MiR-210负性调节鼻咽癌细胞的放射敏感性，其可能作为治疗鼻咽癌放射抵抗的新靶点。