生物钟基因Per1对人口腔鳞癌细胞生物学行为的影响和调控机制

摘要

目的：研究生物钟基因Per1对人口腔鳞癌SCC15细胞生长、增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及调控机制。
　　方法：应用RNA干扰技术构建3组靶向Per1基因的短发夹RNA慢病毒质粒，感染人口腔鳞癌SCC15细胞；经测序、实时荧光PCR及Western blot鉴定并筛选沉默效果最佳组为实验组，对照组为不含Per1片段的scramble质粒病毒，空白组为未做任何处理的SCC15细胞。利用CCK-8试剂盒和克隆形成实验检测癌细胞SCC15体外的生长能力，流式细胞仪检测SCC15细胞的增殖和凋亡水平变化，Transwell细胞小室检测SCC15细胞的迁移和侵袭能力，裸鼠体内成瘤实验检测SCC15细胞体内成瘤能力改变。实时荧光定量PCR检测Ki-67、MDM2、c-Myc、P53、Bax、Bcl-2、MMP2、MMP9、TIMP-2和VEGF mRNA的表达。
　　结果：成功的构建了3组靶向Per1基因的Per1-shRNA慢病毒质粒，其中Per1-shRNA-I组沉默效果最佳，可作为实验组。沉默Per1基因后促进了SCC15癌细胞的生长和增殖能力，抑制了细胞凋亡水平，增强了SCC15细胞的迁移和侵袭能力，同时，促进了裸鼠体内SCC15细胞的成瘤能力(P均<0.05)。Per1基因沉默后显著提高了Ki-67、MDM2、Bcl-2、MMP2和MMP9 mRNA的表达(P均<0.05)，降低了c-Myc、p53、Bax和TIMP-2 mRNA的表达(P均<0.05）,而VEGF mRNA的表达无显著改变(P>0.05）。
　　结论：生物钟基因Perl能调控下游重要的肿瘤相关基因，如Ki-67、MDM2、c-Myc、p53、Bax、Bcl-2、MMP2、MMP9和TIMP-2，其表达变化影响癌细胞的生长、增殖、凋亡、迁移和侵袭，对Per1基因的深入研究可以进一步明确癌症的发生和发展机制，提供癌症的治疗的新方法。

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前言

第一部分 Per1-shRNA慢病毒质粒的构建和鉴定

1材料和方法

2 结果

3 讨论

第二部分 沉默Per1基因对人口腔鳞癌细胞生物学行为的影响及其机制

1材料和方法

2结果

3 讨论

参考文献

全文总结

文献综述: 生物钟基因Per1与肿瘤

致谢

攻读硕士学位期间发表的文章