生物钟基因PER1对口腔鳞癌细胞中生物钟基因网络的调控作用

摘要

目的：
　　探讨口腔鳞癌细胞内生物钟基因PER1对生物钟基因网络中其它生物钟基因表达的影响。
　　方法：
　　通过RNA干扰技术沉默PER1并构建3组PER1短发夹(short hairpin)RNA慢病毒载体质粒，然后分别感染SCC15口腔鳞癌细胞株，经Western blot和实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR，qRT-PCR）筛选并确定PER1沉默效果最佳组定为实验组，以转染scramble质粒（不含任何干扰基因片段）的SCC15细胞为阴性对照组，以相同培养条件下不曾做处理的SCC15细胞为空白对照组。
　　分别在体外和体内应用qRT-PCR检测PER1沉默前后生物钟基因CLOCK、BMAL1、PER2、PER3、DEC1、DEC2、CRY1、CRY2、TIM、CKIε、RORα、NPAS2和REV-ERBα mRNA的表达情况，应用流式细胞仪检测口腔鳞癌细胞的增殖和凋亡水平的改变情况，并应用裸鼠体内成瘤实验观察SCC15癌细胞体内成瘤能力改变情况。
　　结果：
　　PER1基因沉默后，体内和体外癌细胞中生物钟基因PER2、DEC1、DEC2、CRY1、CRY2和NPAS2 mRNA的表达显著降低（P＜0.05），PER3、TIM、RORɑ和REV-ERBɑmRNA的表达显著升高（P＜0.05），而CLOCK、BMAL1和CKIεmRNA的表达无显著改变（P＞0.05）。PER1沉默之后，SCC15癌细胞的凋亡降低，增殖和体内成瘤加强。
　　结论：
　　生物钟基因PER1可以调控钟基因网络中众多其他钟基因如PER2、DEC1、DEC2、CRY1、CRY2、NPAS2、PER3、TIM、RORɑ和REV-ERBɑ的表达，PER1在机体的钟基因网络中具有十分重要的调控功能。PER1对癌症形成的作用并非单一通过对其下游基因的调控，而是同时通过对生物钟基因网络中诸多生物钟基因的异常调控所共同导致。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分 人PER1基因shRNA慢病毒载体质粒的构建与鉴定

1材料与方法

2结果

第二部分 沉默PER1基因对SCC15癌细胞体外增值、凋亡能力及生物钟基因网络的影响

1材料与方法

2结果

第三部分 沉默PER1基因对SCC15癌细胞体内增值、凋亡能力及生物钟基因网络的影响

1材料与方法

2结果

讨论

全文总结

参考文献

附图

文献综述:生物钟基因网络调控机制的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的文章