双歧杆菌对坏死性小肠结肠炎新生大鼠模型肠道损伤的保护作用

摘要

目的：
　　探讨双歧杆菌对坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis, NEC)新生大鼠模型肠道损伤的保护作用，并分析双歧杆菌保护NEC肠道损伤可能的机制。
　　方法：
　　120只新生1日龄Sprague-Dawley(SD)大鼠按随机数字表法分为3组：对照组、坏死性小肠结肠炎新生大鼠组（NEC组）及双歧杆菌干预坏死性小肠结肠炎新生大鼠组（NEC+BIF组），每组40只。3组分别于第1、2、3天固定时间点行体质量测量；实验过程中观察大鼠一般情况变化，并统计死亡率；于第4天断头处死大鼠，HE染色观察回盲部肠组织病理学变化并行双盲法病理学评分，并统计NEC发生率；异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-Dextran)示踪法检测肠黏膜通透性；ELISA检测血清Zonulin的水平；Western bloting及免疫组化检测肠组织紧密连接蛋白的表达及分布；将3组大鼠血清Zonulin水平与肠道通透性及紧密连接蛋白表达量行相关性分析。应用SPSS19.0统计软件，所有计量资料均以x?s表示，各组间比较行单因素方差分析法。分类资料行卡方检验法。相关性分析行皮尔森检验法。P＜0.05为差异具有统计学意义。
　　结果：
　　与NEC组相比，双歧杆菌干预后大鼠死亡率及NEC发生率均明显降低，肠上皮损伤明显改善，而与对照组相比，NEC组肠道通透性增高(P＜0.05)，血清Zonulin表达明显增加(P＜0.05)，肠上皮紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin、ZO-1的表达明显减少(P＜0.05)，且分布不连续；与NEC组相比，NEC+BIF组肠道通透性降低(P＜0.05)，血清Zonulin表达降低(P＜0.05)，肠上皮紧密连接蛋白的表达增加(P＜0.05)。相关性分析显示，3组大鼠血清Zonulin水平与肠道通透性呈正相关 r=0.923， P＜0.01，而血清 Zonulin水平与肠组织紧密连接Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达量均呈负相关，分别为r=-0.779， P＜0.01；r=-0.920，P＜0.01；r=-0.619，P＜0.01。
　　结论：
　　1.建立稳定的坏死性小肠结肠炎新生大鼠模型；
　　2.坏死性小肠结肠炎新生大鼠模型肠损伤明显，肠道通透性增高，血清Zonulin蛋白释放升高；
　　3.双歧杆菌可明显改善坏死性小肠结肠炎新生大鼠的肠损伤；
　　4.双歧杆菌改善坏死性小肠结肠炎新生大鼠肠道损伤的可能机制包括降低血清Zonulin蛋白释放，改善紧密连接蛋白的表达及分布，降低肠道屏障通透性。