莪术含药血清调节大鼠HSCs中Hh及Wnt途径相关因子表达的机制研究

摘要

目的：
　　研究莪术含药血清调节瘦素（leptin）活化的大鼠肝星状细胞（HSCs）中刺猬(hedgehog,Hh)信号途径和Wnt信号途径相关因子表达的机制。
　　方法：
　　将30只清洁级sprague-dawley(SD)大鼠，按随机数字表法，均分3组。分别给予莪术水煎剂、秋水仙碱、生理盐水灌胃取血制备含药血清。用高效液相色谱法(HPLC)，测定莪术含药血清中莪术的有效成分。体外培养大鼠HSCs，分为8组：空白组、模型（leptin）组、Hh通路抑制剂（Cyclopamine）组、莪术组、Cyclopamine+莪术组、Hh通路激动剂（Purmorphamine）组、Purmorphamine+莪术组、秋水仙碱组。除空白组外，其余各组均给予0.1μg/mL leptin诱导后，各组再给予相应药物干预24h，收集细胞。MTT法检测HSCs增殖情况，RT-PCR法检测Shh、Gli1、SFRP1、β-catenin的mRNA表达，Western blot检测Shh、Gli1、SFRP1、β-catenin蛋白表达，免疫荧光检测Gli1和β-catenin在不同组别HSCs中的表达。
　　结果：
　　同空白组相比，用leptin活化HSCs后，Shh、Gli1、β-catenin表达均显著上调(均P＜0.01)，SFRP1表达显著下调(P＜0.01)。同模型（leptin）组相比，Cyclopamine、莪术含药血清、秋水仙碱分别干预后，Shh、Gli1、β-catenin表达均显著下调(均P＜0.01)，SFRP1表达显著上调(P＜0.01)；莪术含药血清与Cyclopamine协同干预后，Shh、Gli1、β-catenin表达显著下调(均P＜0.01)，SFRP1表达显著上调(P＜0.01)；Purmorphamine干预后，Shh、Gli1、β-catenin表达显著上调(均P＜0.01),SFRP1表达显著下调(P＜0.01)。同Purmorphamine组相比，用莪术含药血清干预Purmorphamine组后，Shh、Gli1、β-catenin表达显著下调(均P＜0.01)，SFRP1表达显著上调(P＜0.01)。
　　结论：
　　莪术含药血清能调控leptin诱导活化的大鼠HSCs中Hh途径和Wnt途径相关因子的表达，而抑制HSCs的增殖。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1 材料

1.1 药物

1.2 实验细胞及动物

1.3 主要试剂

1.4 主要仪器

2 方法

2.1 药物制备

2.2 含药血清制备

2.3 HPLC对含药血清中姜黄素、莪术醇定性

2.4 细胞实验分组及干预

2.5 HSCs增殖抑制情况（MTT法）

2.6 HSCs内Shh、Gli1、SFRP1、β-catenin的mRNA表达（RT-PCR法）

2.7 HSCs中Shh、Gli1、SFRP1、β-catenin蛋白表达(Western-Blot法)

2.8 各组细胞Gli1、β-catenin的表达（免疫荧光法）

3 结果

3.1 HPLC定性分析结果

3.2 莪术含药血清对HSCs增殖抑制情况

3.3 莪术含药血清对HSCs中Shh、Gli1、SFRP1、β-catenin mRNA和蛋白表达的影响

3.4 不同组别HSCs中Gli1、β-catenin免疫荧光表达

4 讨论

结论

参考文献

文献综述:肝纤维化与信号转导途径

致谢

攻读硕士期间发表的论文