芍药苷抑制TLR4介导的炎症反应保护小鼠肝缺血再灌注损伤

摘要

目的：探讨芍药苷（paeoniflorin，PF）对肝缺血再灌注（ischemia reperfusion，IR）损伤的保护作用并探讨其作用机制。
　　方法：将C57BL/6小鼠随机分为：假手术组（Control组）、芍药苷对照组（PF组）、肝缺血再灌注损伤模型组（IR组）、芍药苷干预组（PF+IR组），共四组。其中芍药苷给予剂量为100mg/kg，分三次灌胃给药。模型组和药物干预组小鼠肝缺血1.5h再灌注6h，检测血清中丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、天门冬氨酸转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）的活性，酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）的水平。苏木素-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色后镜下观察组织损伤的形态学变化，末端脱氧核苷酸转移酶介导 dUTP缺口末端标记测定法（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick-end labeling，TUNEL）法结合Caspase-3试剂盒检测细胞凋亡情况和Caspase-3活性水平。组织免疫化学（immunohistochemistry，IHC）法测定高迁移率族蛋白1（high mobility group box-1 protein，HMGB1）的表达，定量逆转录聚合酶链反应（quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，qRT-PCR）法检测细胞膜上模式识别受体Toll样受体4（toll like receptor4，TLR4）和炎症因子TNF-α、IL-1βmRNA的水平。免疫荧光法（immunofluorescence，IF）和流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测中性粒细胞的数量和表达变化。Western blot进一步检测TLR4及下游信号分子：磷酸化的c-Jun氨基末端激酶（p-c-Jun N-terminal kinase，p-JNK）、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶（phosphorylated extracellular signal-regulated kinase，p-ERK）、磷酸化的 p38（phosphorylated p38，p-p38）以及磷酸化的转录因子NF-κB（phosphorylated NF-κB，p-NF-κB）蛋白表达的变化。
　　结果：与Control组相比，IR组血清中转氨酶活性明显升高，芍药苷干预后血清中ALT、AST降低，HE染色和TUNEL结果显示芍药苷抑制了肝细胞凋亡，减轻了肝缺血再灌注诱导的损伤。芍药苷可下调炎症因子TNF-α、IL-1β的mRNA水平以及蛋白表达水平，而且抑制了中性粒细胞的活化和募集。芍药苷下调HMGB1和TLR4，也降低了p-JNK、p-ERK、p-p38以及p-NF-κB的蛋白表达水平。
　　结论：芍药苷对小鼠肝缺血再灌注诱导的损伤确实具有保护作用，可能是通过作用于HMGB1及TLR4-MAPKs信号通路减少了炎症因子TNF-α、IL-1β的释放减少了细胞凋亡，同时抑制中性粒细胞浸润阻止炎症反应放大以达到保护肝脏的作用。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1材料和方法

1.1材料

1.2 实验方法

2结果

2.1芍药苷对血清中转氨酶活性的影响

2.2芍药苷减轻肝损伤

2.3芍药苷抑制Caspase-3活性减轻肝细胞凋亡

2.4芍药苷抑制炎症因子 TNF-α和 IL-1β的 mRNA转录水平和血清中蛋白的表达

2.5芍药苷对中性粒细胞的影响

2.6芍药苷下调 HMGB1、p-JNK、p-ERK、p-p38 蛋白表达以及TLR4mRNA的转录和蛋白表达水平

3讨论

4结论

参考文献

文献综述：芍药苷的药理作用研究进展

致谢

硕士期间发表的论文