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肺炎链球菌蛋白PepO联合ZmpB保守肽段作为蛋白疫苗的保护效果及机制研究

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目录

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分 肺炎链球菌ZmpB673-863和PepO单个蛋白及融合蛋白的表达纯化与分析鉴定

1 实验材料

1.1 菌株和质粒

1.2 实验动物

1.3 核酸构建系列

1.4 引物

1.5 蛋白表达纯化相关试剂

1.6 抗血清制备与鉴定试剂

1.7 免疫荧光试剂

1.8 主要仪器

1.9 主要溶液

2 实验方法

2.1 ZmpB673-863的生物信息学分析

2.2 重组质粒的构建

2.3 原核表达质粒pET28a(+)-ZmpB673-863、pET28a(+)-PepO、pET28a(+)-ZmpB673-863-PepO和pET28a(+)-PepO-ZmpB673-863在大肠杆菌中的表达及纯化

2.4 LPS去除、检测及蛋白浓度测定

2.5 Western blot检测ZmpB673-863蛋白抗血清对肺炎链球菌菌体蛋白的识别反应

2.6 ELISA检测ZmpB673-863蛋白抗血清对肺炎链球菌菌体蛋白的识别反应

2.7 PCR鉴定ZmpB673-863编码基因在肺炎链球菌不同血清型中的保守性

2.8 ZmpB673-863和正常人血清的反应性

2.9 PepO和ZmpB融合蛋白特异性抗血清的制备

2.10 Western blot 检测融合蛋白的抗原性

2.11 Western blot 检测融合蛋白抗血清的特异性

2.12 免疫荧光实验

3.实验结果

3.1 ZmpB的生物信息学分析

3.2 ZmpB673-863和PepO的基因扩增

3.3 pET28a(+)-ZmpB673-863、pET28a(+)-PepO、pET28a(+)-ZmpB673-863-PepO和pET28a(+)-PepO-ZmpB673-863重组质粒的筛选及鉴定

3.4 重组蛋白的表达

3.5 PCR鉴定ZmpB673-863编码基因在肺炎链球菌不同血清型中的保守性

3.6 Western blot分析ZmpB673-863的保守性

3.7 ELISA检测ZmpB673-863蛋白抗血清对肺炎链球菌菌体蛋白的识别反应

3.8 ZmpB673-863和正常人血清的反应性

3.9 融合蛋白抗血清的特异性分析

3.10 融合蛋白的抗原表位分析

3.11 免疫荧光检测融合蛋白与TLR2和TLR4的结合

4.讨论

第二部分 ZmpB673-863和PepO联合疫苗的保护效果评价

1 实验材料

1.1 实验动物

1.2 菌种及抗原

1.3 主要试剂

1.4 主要溶液

1.5 主要仪器

2.实验方法

2.1 ZmpB673-863蛋白抗血清的调理吞噬作用

2.2 ZmpB673-863蛋白抗血清的抗粘附作用

2.3 PepO作为皮下免疫佐剂的效果评价

2.4 定植实验

2.5 生存率实验

3. 实验结果

3.1 ZmpB673-863蛋白抗血清的调理吞噬作用

3.2 ZmpB673-863蛋白抗血清的抗粘附作用

3.3 PepO作为皮下免疫佐剂的效果评价

3.4 定植实验

3.5 生存率实验

4. 讨论

全文总结

参考文献

文献综述:TLR4配体佐剂的研究进展

致谢

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