肺炎链球菌疫苗候选蛋白质谷氨酰胺tRNA合成酶的保守性与抗原性分析

摘要

目的 分析作为肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)疫苗候选靶点的谷氨酰胺tRNA合成酶(glutamyl tRNA synthetase,Gts)的保守性和抗原性,并评价Gts抗原诱导产生的抗体在体内是否存在年龄依赖性.方法 PCR扩增S.pn D39标准菌株的Gts基因,构建pET32a(+ )-Gts原核表达质粒并测序.扩增S.pn不同血清型的Gts基因,测序后比对分析其保守性.表达Gts重组蛋白质,并进行纯化和western blot鉴定.用Gts重组蛋白质免疫BALB/c小鼠制备抗Gts的多克隆抗体并测定其效价.western bot分析Gts在不同血清型S.pn中的表达情况.ELISA法测定本地区不同年龄段的健康人及患者血清中抗Gts抗体的效价.结果 构建了以D39血清型S.pn为DNA模版的pET32a(+ )-Gts表达质粒,其测序结果与预期相符.8株不同血清型S.pn的Gts基因编码区大小与D39菌株一致,约为1 461 bp;经测序后序列比对,其基因一致性＞99.0％.经Ni柱纯化得到纯度＞95％的Gts重组蛋白质,且能与抗His tag标签抗体特异性结合.采用Gts蛋白质经腹腔免疫小鼠后,其血清抗Gts抗体滴度高达1.024×106(5.12×105,4.096×106),与对照组比较有显著差异(P＜0.01).western blot分析证实,8种不同血清型S.pn全菌裂解物均在Mr约55.9×103处出现特异性反应条带.在不同年龄段的健康人群及患者血清中,均产生高滴度的抗Gts抗体,且随着年龄增加而递增.结论 Gts重组蛋白质免疫原性好,在不同血清型的S.pn中均高度保守,且诱导产生的抗体反应存在年龄依赖性,是一个良好的候选疫苗靶点.