反胶束纯化胰蛋白酶及含膦二肽的微水合成验证

摘要

反胶束萃取具有使用条件温和,萃取效率高,成本低,溶剂可重复利用,不引起蛋白质和酶变性等许多优点,用于分离和纯化蛋白质等生物大分子具有巨大的应用前景.本论文运用该技术进行了从粗胰酶中分离纯化胰蛋白酶的研究,对反胶束中胰蛋白酶STM图像进行了探讨,验证了在AOT反胶束中用胰凝乳蛋白酶催化合成乙酰氨基苯丙酰基-丁膦酸酰胺的反应.观察AOT/异辛烷反胶束中胰蛋白酶的STM形貌,发现该酶的构象发生了变化,卷曲程度增加,空间结构更紧密,相对于水中

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1绪论

1.1分离纯化蛋白质的方法和特点

1.2反胶束及其特点

1.2.1表面活性剂类型和HLB、HLB值

1.2.2反胶束的特点

1.3反胶束的应用

1.3.1在生物工程中的应用

1.3.2在材料科学中的应用

1.4反胶束萃取蛋白质的研究现状

1.4.1制备含有蛋白质的反胶束的方法

1.4.2影响反胶束萃取蛋白质的主要因素

1.5反胶束酶催化反应研究现状

1.5.1反胶束酶的活性和稳定性

1.5.2反胶束酶催化反应的研究

1.6本论文研究的主要内容

2反胶束萃取原理及研究方法

2.1反胶束萃取原理

2.1.1反胶束自发形成的理论

2.1.2萃取原理

2.2研究方法

3仪器、试剂和实验方法

3.1仪器

3.2试剂

3.3试验方法

4结果与讨论

4.1反胶束对胰蛋白酶构象的影响

4.1.1 STM观察形貌

4.1.2紫外光谱

4.1.3荧光光谱

4.2反胶束萃取胰蛋白酶初步试验

4.2.1pH值和表面活性剂浓度对胰蛋白酶萃取率的影响

4.2.2离子种类和浓度对胰蛋白酶萃取率影响

4.2.3离子种类和浓度对W0的影响

4.3粗胰酶中胰蛋白酶的反胶束提纯

4.3.1萃取时间对萃取率和胰蛋白酶比活力的影响

4.3.2其它影响因素的影响

4.3.3萃取前后胰蛋白酶、胰脂肪酶、胰淀粉酶的比活力比较

4.3.4SDS-PAGE检测分离效果

4.3.5混合反胶束与单一反胶束萃取效果比较

4.3.6回收反胶束的再利用

4.4反胶束中含膦二肽的合成验证

5结论

致谢

参考文献

附录 攻读硕士学位期间发表的论文

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