人参皂甙Rg3联合三氧化二砷对肝癌裸鼠抗肿瘤作用与机制

摘要

研究背景与目的:肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，随着科技的发展，小肝癌的发现日益增多，但临床上发现的肝癌大部分仍是中晚期，非手术治疗成为重要的治疗手段，中药抗肿瘤的作用与机制正逐渐被现代医学研究所揭示。任何抗癌药单独应用，疗效总是有限的，通过过分提高剂量，可提高一定疗效，但明显增强药物毒性，因此临床多主张联合用药，其目的在于提高疗效，减弱毒性，延缓或防止耐药。三氧化二砷对肝癌细胞诱导凋亡的作用在实验室已得到证实，也有用于中晚期肝癌的报道。人参皂甙Rg3抗肿瘤作用主要为其具有抑制肿瘤新生血管形成，从而抑制肿瘤的生长和转移。人参皂甙Rg3动物实验进一步证实，能明显提高正常小鼠和荷瘤小鼠的免疫功能，与化疗药合用有明显的减毒增效作用，可延长荷瘤小鼠的生存期。本实验研究人参皂甙Rg3联合三氧化二砷对肝癌裸鼠移植瘤模型的抗肿瘤作用，并深入探讨其抗肿瘤的机制，为将人参皂甙Rg3联合三氧化二砷联合应用于临床治疗肝癌，提供更坚实的实验基础和理论依据，为控制肝癌的复发、转移、延长生存时间，探索新的治疗途径。 方法(1)采用人肝癌Bel-7402细胞株，种植于32只雄性裸鼠皮下，随机均分成8组：Rg3(5mg/kg，10mg/kg，20mg/kg)联合三氧化二砷组，Rg3组(5mg/kg，10mg/kg，20mg/kg)，三氧化二砷组及对照组。实验自肿瘤接种第3天开始，人参皂甙Rg3，隔日灌胃，共20次，三氧化二砷，每日腹腔内注射，连续28天，停药一周后，脱颈处死，分别观察裸鼠的生存质量及毒副反应，有无远处转移，检测肿瘤的重量，计算抑瘤率。 (2)采用羊抗兔免疫球蛋白-过氧化物酶二步法免疫组织化学法(PowerVisionTMTwo-StepHistostaining)，结合计算机图像分析，检测联合用药组，Rg3组，三氧化二砷组及对照组中，Bax，Bcl-2，PCNA，血管第Ⅷ因子在裸鼠肝癌移植瘤组织中的表达情况，并计数微血管密度(MVD)。 结果(1)观察人参皂甙Rg3与三氧化二砷对荷瘤裸鼠生存质量及毒副反应的作用，本研究发现，Rg3组裸鼠未见明显的药物毒副反应，生存质量最好，其次为联合治疗组，再次为对照组，而三氧化二砷组有药物反应，生存质量较差，三氧化二砷组有1只死亡。本实验中较为突出的表现是联合治疗组的毒副反应和生存质量明显优于三氧化二砷治疗组，随着人参皂甙Rg3浓度的增加，及作用时间的延长，联合治疗组裸鼠的生存质量显著提高。 (2)形态学观察发现：Rg3组，联合用药组肿瘤表面呈苍白色，仅有少数几条肉眼可见血管，而对照组及三氧化二砷组瘤体表面的血管较多，在我们对肿瘤进行剥离时，可见Rg3组及联合用药组血供明显减少，出血量少，并且随着Rg3用药浓度的增加，血供的减少更为明显。对照组血供最为丰富，出血量多。 在光学显微镜下观察，联合治疗组的裸鼠肿瘤具有多灶性大面积坏死区，而三氧化二砷组肿瘤仅有小面积坏死区，联合治疗组的肿瘤坏死情况明显高于三氧化二砷组。 HE染色光镜下观察肝、肺，淋巴结等器官，各组均未见明显远处转移。 (3)Rg3组抑瘤率随着浓度的升高，呈现一个逐渐升高的趋势。Rg3组，三氧化二砷组，联合组，平均瘤重明显较对照组轻，差异有显著性(P＜0.001)。三氧化二砷组抑瘤率高于Rg3组，但随着Rg3浓度的升高，二者之间的差异明显减小；联合组平均瘤重最低，抑瘤率最高，其抑瘤作用高于三氧化二砷组，差异有显著性(P＜0.05)。 (4)微血管密度(MVD)在裸鼠肝癌移植瘤组织中的表达，Rg3组，三氧化二砷组，联合组明显低于对照组，差异有显著性(P＜0.001)。Rg3组高于三氧化二砷组，差异有显著性(P＜0.05)，Rg3组与联合组无显著差异(P＞0.05)。联合组抑制新生血管生成的作用最强，联合组作用高于三氧化二砷组，差异有显著性(P＜0.05)。 (5)PCNA阳性细胞指数(PI)在裸鼠肝癌移植瘤组织中的表达，Rg3组PI低于对照组，差异有显著性(P＜0.05)，随着药物浓度的升高，差异更加明显。三氧化二砷组和联合用药组明显低于对照组(P＜0.001)。三氧化二砷组PI低于Rg3组，差异有显著性(P＜0.05)，随着Rg3药物浓度的升高，差异逐渐减小。联合组PI值最低，且与三氧化二砷组差异有显著性(P＜0.05)。 (6)通过免疫组化监测肿瘤组织中Bax，Bcl-2蛋白表达，来研究二者对移植瘤肝癌细胞凋亡的影响。本实验显示，对照组bax蛋白的表达强度最低，Bcl-2蛋白的表达强度最高，肿瘤处于一种不断生长的趋势。三氧化二砷组上调Bax，下调Bcl-2蛋白的表达，作用高于Rg3组，联合组Bcl-2值最低，Bax值最高，随着Rg3药物浓度的升高，联合组的效果更为明显。 结论1.本实验结果显示，人参皂甙Rg3具有显著的抑制肿瘤新生血管形成的作用，其抑制肿瘤生长可能主要是通过抑制肿瘤血管生成来实现的，而三氧化二砷对肿瘤血管生成抑制作用较Rg3弱，作为抗肿瘤药，主要通过诱导肝癌细胞的凋亡，抑制肝癌细胞的增殖，来抑制肿瘤生长。 2.本实验证明，在裸鼠体内实验中，人参皂甙Rg3与三氧化二砷联合应用，可以显著的抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长，其主要作用机制与抑制新生血管的形成，抑制肝癌细胞的增殖，诱导肝癌细胞的凋亡有关。其具体机理可能与下调血管内皮生长因子，下调增殖核抗原PCNA及下调抑凋亡基因Bcl-2的表达，增强促凋亡基因Bax的表达有关。 -3-3.人参皂甙Rg3与三氧化二砷联合应用治疗肝癌具有明显的协同作用，减轻了三氧化二砷的毒副作用，改善了荷瘤裸鼠的生存质量，且这种作用与人参皂甙Rg3的作用浓度和时间呈相关性。

目录

论文说明：中英文名词缩写与对照

前 言

实验材料与方法

结 果

讨论

结论

参考文献

附录

附图（1）

附图（2）

综述人参皂甙Rg3抗肿瘤作用的实验研究概况

致谢

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