体外研究化学发光法筛选人血清PON的激动剂和抑制剂

摘要

对氧磷酶(PON)是一种定位在高密度脂蛋白(HDL)上的内酯酶,可以保护低密度脂蛋白(LDL)过氧化,人体内 PON的活性水平涉及很多疾病的发病机制,因而研究药物对PON的作用有重要的意义。吖啶酯类化合物9-(4-甲基苯基)氧羰基-10甲基吖啶酯三氟磺酸盐(CPOCMA)已经被证实是人血清对氧磷酶的特异性水解底物,具有良好的化学发光性能,因此本课题以CPOCMA为底物,体外研究化学发光法从不同金属离子和中药中筛选血清PON激动剂和抑制剂,为临床用药提供一定的指导意义。
　　本课题以已知的PON激动剂Ca2+作为研究对象,首先将本课题创新的化学发光法和常规的以乙酰苯酚为底物的紫外分光光度法进行方法学对照,显示结果一致,证实了以CPOCMA为底物的化学发光法在测定血清PON活性应用中的可行性。
　　为研究不同金属离子对血清PON的影响,本课题从离子半径、电荷及重金属毒性等方面考虑,有规律的选择了Li+, Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Al3+, Fe3+, Zn2+, Cu2+, Pb2+等10种金属离子作为研究对象,在血药浓度下测定各金属离子对血清PON的作用,结果显示:①Li+, Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Zn2+, Fe3+等金属离子对血清PON具有激动作用,且激动作用大小依次为:Ca2+>Fe3+>Na+>K+>Li+>Zn2+>Mg2+;②Cu2+, Pb2+, Al3+等金属离子对血清PON有抑制作用,且抑制作用大小依次为:Al3+>Pb2+>Cu2+。
　　为进一步研究金属离子浓度变化对血清PON的影响,选取了一系列浓度范围的上述金属离子,测定其对血清PON作用的影响,结果发现:①对于常见的Li+, Na+, K+, Ca2+, Mg2+等金属离子(0.1-10.0mmol/L),不管浓度变化,均为PON激动剂,在浓度大于6mmol/L时,Mg2+的激动作用大于Ca2+;②Fe3+(1.0-80.0μmol/L)随浓度增大,对PON的激动作用也增大,大于20μmol/L时激动作用有所减小,最大激动作用介于二价和一价金属离子之间;③ Zn2+(1.0-80.0μmol/L)在10-20μmol/L之间,对血清PON有激动作用,其余浓度下对血清PON的作用不明显;④对于一些微量金属离子(1.0-80.0μmol/L): Cu2+, Pb2+, Al3+等,大于20μmol/L时,Pb2+的抑制作用最大;⑤主族金属离子在低浓度时(<6.0mmol/L)对血清 PON的激动作用与离子电荷和半径呈正相关,浓度>6.0mmol/L时,对血清PON的激动作用与离子电荷和浓度相关,与半径无关。
　　由于化学发光法能测定许多紫外分光光度法所不能测定的有较强紫外吸收干扰的药物,本课题还运用以CPOCMA为底物的化学发光法对丹参、虎杖、生姜和红花四种中药的粗提液对PON的活性影响进行了测定,初步筛选出 PON激动剂生姜和红花;进一步从红花中分离并筛选出了PON激动组分红花水提液和挥发油,并试从红花中分离羟基红花黄色素 A和红花红色素,为化学发光法从红花中快速筛选PON激动组分的新型方法奠定研究基础。