血管紧张素Ⅱ对肾小球足细胞葡萄糖转运蛋白1的表达及易位的影响

摘要

目的：糖尿病是引起终末期肾脏病（ESRD）主要原因之一，糖尿病肾病（DN）在慢性肾脏病或终末期肾病所占的比重越来越大。随着对糖尿病肾病研究的深入，足细胞在糖尿病肾病的发病机制中的作用逐渐受到重视，最新的研究显示足细胞是肾小球滤过屏障中唯一对胰岛素作用起反应的细胞，糖尿病患者中足细胞存在胰岛素抵抗，而血管紧张素Ⅱ在脂肪细胞和血管平滑肌细胞能通过阻止葡萄糖转运蛋白的易位引起胰岛素抵抗。目前尚未有研究表明血管紧张素Ⅱ能否引起足细胞的胰岛素抵抗并导致功能损伤。本研究观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ作用下小鼠足细胞GLUT1mRNA及蛋白的表达，和F-actin构象的变化，并同时应用氯沙坦进行干预，探讨足细胞损伤与AngⅡ的关系及其在DN发生发展中的可能机制以及AT1RA对足细胞的保护作用。 方法：①将体外培养的足细胞分为5组：对照组（C），AngⅡ10-10mol/L组，AngⅡ10-8mol/L组，AngⅡ10-6mol/L组，AngⅡ（10-6mol/L）+氯沙坦（LO，10-6mol/L）组。半定量RT-PCR检测GLUT1mRNA表达，Westernblot检测GLUT1蛋白的表达，②另外将细胞分为对照组（C），AngⅡ10-6mol/L，组，胰岛素（Ins）（10-6mol/L）组、AngⅡ（10-6mol/L）+Ins（10-6mol/L）组及LO（10-6mol/L）+AngⅡ（10-6mol/L）+Ins（10-6mol/L）组，间接免疫荧光观察各组GLUT1蛋白的表达和分布，细胞骨架染色观察细胞骨架纤维状肌动蛋白（F-actin）的构象变化，分析GLUT1mRNA的表达与蛋白表达有无相关性，GLUT1蛋白的分布与F-actin的构象的关系。③用IMAGE-J系统进行PCR及Westernblot半定量分析，观察AngⅡ对GLUT1基因及蛋白表达的影响；IPP图像分析系统对荧光强度进行分析，观察AngⅡ对GLUT1分布的影响。 结果： 1、GLUT1转录水平的变化 AngⅡ能显著增加GLUT1的转录，这种作用具有浓度依赖性，与对照组相比较，AngⅡ各组GLUT1的mRNA水平分别增加了5.89％、21.46％、30.95％，各组之间也有统计学意义（P<0.01），LO+AngⅡ组与AngⅡ10-6mol/L组相比下降了30.64％，具有显著的统计学意义（P<0.01）。 2、GLUT1蛋白表达的变化 AngⅡ刺激足细胞后，GLUT1的蛋白表达也呈上升趋势，10-1010-8、10-6mol/L组与对照组相比，分别增加了8.40％、11.79％、20.57％，差异有统计学意义，各组之间的差异也有统计学意义。与AngⅡ10-6mol/L组相比，LO+AngⅡ组GLUT1的蛋白表达显著下降14.10％，与对照组相比，差异无统计学意义。GLUT1mRNA与GLUT1蛋白表达呈正相关。 3、GLUT1蛋白分布的变化 AngⅡ组细胞胞膜GLUT1蛋白染色荧光强度减弱，与对照组相比减少了5.23％。Ins组细胞胞膜的荧光强度与对照组相比增加了16.33％；AngⅡ+Ins组的胞膜荧光强度与Ins组相比降低14.40％；CON组、AngⅡ+Ins组、LO+AngⅡ+Ins组三组间差异无统计学意义。 4、F-actin构象的变化 Ins组加强F-actin的空间构象，令actin蛋白纤维增厚；用AngⅡ预处理后使F-actin的空间构象由聚集态变成松弛态，加入Ins也不能逆转；用血管紧张素Ⅱ受体阻断剂氯沙坦作用足细胞，再依次加入AngⅡ、Ins，F-actin的空间构象能有部分恢复。 结论： ①AngⅡ能显著增加GLUT1的转录及蛋白的表达，这种作用具有浓度依赖性，且mRNA的表达与蛋白的表达呈正相关。 ②氯沙坦能够阻碍AngⅡ对足细胞GLUT1表达的影响。 ③Ins能够促进GLUT1向足细胞膜转运，AngⅡ能够阻断这种效应，氯沙坦可以阻断血管紧张素Ⅱ对足细胞的影响。 ④Ins能够加强F-actin的空间结构，从而引起GLUT1的易位，AngⅡ能使F-actin松弛，这种作用不能被胰岛素改善但能被氯沙坦阻断，且与GLUT1的易位有关联。

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参考文献

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综述 血管紧张素Ⅱ对足细胞的损伤在糖尿病肾病发生发展中的作用

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