高糖和胰岛素对肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响及易位的时间效应

摘要

目的：糖尿病(DM)是严重危害人类健康的疾病，糖尿病肾病(DN)则是糖尿病危害性最大的慢性并发症之一。已有研究证实，胰岛素抵抗是2型糖尿病发病机制中的一个重要环节，而葡萄糖转运机制障碍是胰岛素抵抗的一个重要方面。胰岛素通过与细胞膜上的胰岛素受体结合后，经由PI3K和CAP/Cbl两条信号传导途径使葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)易位至胞膜，以促进组织摄取葡萄糖从而维持血糖稳态。本实验拟探讨高糖和胰岛素对体外培养的肾小球系膜细胞(GMC)GLUT4表达的影响以及胰岛素引起GLUT4易位的时间过程，研究糖尿病肾病发生发展机制中GLUT4的作用，为糖尿病肾病防治寻求新的途径。 方法： 将体外培养的鼠1097系膜细胞分为8组：①正常对照组，②生理浓度胰岛素组(10<'-9>mol/L Ins)，③低浓度胰岛素组(10<'8>mol/L Ins)，④高浓度胰岛素组(10<'-6>mol/L Ins)，⑤高糖组(30 mmol/L Glu)，⑥甘露醇组，⑦高糖加高浓度胰岛素组(30 mmol/L Glu+10<'-6> mol/L Ins)，⑧高糖加生理浓度胰岛素组(30 mmol/L Glu+10<'-9>mol/L Ins)。②③④组均作用5，15，30，45，60分钟共5个时间点，其余各组作用15分钟后，GLUT4免疫荧光染色，激光共聚焦显微镜观察各组系膜细胞GLUT4分布，测定其荧光强度同时用RT-PCR检测GLUT4 mRNA表达。 结果： 1．正常肾小球系膜细胞可观察到GLUT4表达。 2．胰岛素增加GLUT4的表达，高糖组GLUT4表达明显下降。 3．胰岛素可引起系膜细胞GLUT4易位。 4．低浓度胰岛素组、高浓度胰岛素组细胞GLUT4均在加入胰岛素15分钟后达到最大易位，且以后的45分钟胞膜上的GUJT4的荧光强度与15分钟时无差异(P>0.05)。 结论： 1．正常肾小球系膜细胞有GLUT4表达，胰岛素可刺激系膜细胞GLUT4易位。 2．高糖明显抑制GLUT4在系膜细胞上的表达。 3．胰岛素可部分拮抗高糖导致的GLUT4下调，且呈剂量依赖性。 4．不同浓度的胰岛素诱导GLUT4易位的时间过程是相似的，均在加入胰岛素后15分钟达到最大易位且一直维持到后来测定的45分钟。 5．GLUT4在糖尿病肾病的发生发展机制中起重要作用。

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摘要

前 言

材料和方法

实验结果

讨 论

结 论

参考文献

综述：胰岛素促GLUT4易位的信号转导机制

致谢