益肾汤对糖尿病大鼠肾脏细胞周期调节蛋白p27的影响

摘要

目的：使用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射诱发SD大鼠形成糖尿病模型；观察中药复方汤剂“益肾汤”对实验性糖尿病大鼠肾脏的保护作用以及其对细胞周期调节蛋白p27表达的影响，同时以血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（ARB）“缬沙坦”作为对照，以探讨“益肾汤”防治糖尿病肾病（DN）的作用机制。 方法：成年雄性SD大鼠41只，随机分成正常对照组（CON）及糖尿病建模组。糖尿病模型组大鼠禁食不禁水12小时后一次性腹腔注射2%STZ诱发糖尿病模型，正常组则注射相当剂量的柠檬酸缓冲液(0.1mol/l,PH4.3)，72小时后测定血糖，如血糖＞16.7mmol/L，并稳定2-3天则算建模成功。建模成功的大鼠再随机分为糖尿病益肾汤治疗组（YS），糖尿病缬沙坦治疗组（ARB）和糖尿病未治疗组（DMN）。YS组给予相当于生药6.5g/公斤体重/天的浓缩药液灌胃；ARB组给予缬沙坦（商品名：代文），按20mg/公斤体重/天灌胃；CON及DMN组则给予相应容量饮用水灌胃。实验开始3周大鼠每周测量体重，后5周每天测量体重，根据体重调整相应灌胃药量，持续治疗8周；实验结束前一天所有大鼠均禁食不禁水12小时，测量每只大鼠空腹体重，收集24小时尿液，记录尿量，测定24小时尿总蛋白、24小时尿白蛋白；以10%水合氯醛麻醉处死大鼠，心脏采血测定血糖、肌酐、尿素氮等指标。取左肾，生理盐水清洗擦干后称重，取右肾纵行切开一半放入10%中性福尔马林液固定，石蜡包埋，制作切片进行免疫组化检测p27的表达，并利用图像分析系统进行定量分析。 结果：所有糖尿病造模组大鼠均被诱发糖尿病。体重：实验开始时，各组无显著性差异；实验结束时DM各组均显著小于CON组（P<0.05），各DM组间差异无统计学意义。肾脏相对重量：DM各组均显著大于CON组（P<0.05），各DM组间差异无统计学意义。血糖：DM各组均显著高于CON组（P<0.05），各DM组间差异无统计学意义。血肌酐：各组间差异无统计学意义。血尿素氮：所有DM组均显著高于CON组（P＜0.05），DM组间差异无统计学意义。24h尿量：所有糖尿病组均显著高于CON组（P＜0.05），DM组间差异无统计学意义。24h尿总蛋白含量：CON组显著小于各DM组（P＜0.05），DM组间差异无统计学意义。24h尿白蛋白含量：所有DM组均显著高于CON组（P＜0.05），DMN组显著高于ARB组和YS组（P＜0.05），ARB组与YS组间差异无统计学意义。P27表达：各DM组均显著高于CON组（P＜0.05）；DMN组显著高于ARB与YS组（P＜0.05）；ARB与YS组差异无统计学意义。相关性分析：p27的表达与24h尿白蛋白呈显著正相关（γ=0.842，P＜0.05）、与24h尿总蛋白相关性无统计学意义（γ=0.162，P＞0.05）。 结论：⑴益肾汤可减少糖尿病大鼠尿白蛋白排出、抑制肾脏p27表达；益肾汤防治糖尿病肾病作用与降低肾脏p27的表达有关。⑵益肾汤减少糖尿病大鼠尿白蛋白含量、抑制肾脏p27表达的作用与缬沙坦相仿。

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结 论

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综 述 细胞周期调节蛋白与糖尿病肾病

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