EMMPRIN基因表达对胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响

摘要

研究背景：胶质瘤是最常见的中枢神经系统原发恶性肿瘤，约占颅内肿瘤的44%。由于肿瘤的浸润性生长特性，因此术中很难准确的判定肿瘤组织与正常脑组织的边界。这样一方面因手术区域无谓的扩大而大大增加病人残、死的几率；另一方面，即使在先进的手术显微镜辅助下将肿瘤组织在肉眼下全部切除，但仍有大约104～105个的具有较强的增殖能力的肿瘤细胞残余，这也是神经胶质瘤复发的基础。由于血脑屏障的存在，致使现有的抗肿瘤药物作用有限以及对正常脑组织不可逆的毒副作用等亦收效甚微。有相关统计表明恶性胶质母细胞瘤经综合治疗后的平均生存期仍不足12个月，2年生存率尚不足10%。目前在全世界神经胶质瘤的治疗都是公认的难题。目前认为神经胶质瘤病因不明确是其难以根治的最主要原因。目前研究证实，神经胶质瘤的发生发展是一个涉及多种基因、多阶段的复杂过程，其中包括癌基因的激活和抑癌基因失活。因此，揭示胶质瘤的分子遗传机制对于阐明胶质瘤的发病原因及指导在基因基础治疗胶质瘤具有重要的意义。人类的EMMPRIN基因位于19q13.3，长约60kb，包含7个外显子和6个内含子，编码产生一个由248个氨基酸组成的蛋白质。Sameshima等研究发现，正常脑组织细胞中EMMPRIN　mＲＮＡ的表达明显低于胶质瘤细胞中，并且mRNA及其蛋白的表达水平与胶质瘤恶性程度成正相关。但是，抑制EMMPRIN基因在胶质瘤细胞中的表达,对胶质瘤细胞的增殖和凋亡有何影响，目前尚未见报道.本课题着重研究EMMPRIN基因对胶质瘤细胞的增殖和凋亡的影响，旨在为胶质瘤的基因治疗提供依据。 目的：研究抑制EMMPRIN基因在胶质瘤细胞中的表达，对胶质瘤细胞的增殖和凋亡的影响。 方法：胶质瘤U251细胞在37℃、5%(v／v)CO2、饱和湿度的条件下，在含10%的FBS、100U／ml 青霉素和0.1mg／ml 链霉素的DMEM培养液中培养。EMMPRIN-siRNA干扰片段由上海吉玛制药技术有限公司完成的设计和合成。采用RT-PCR检测EMMPRIN mRNA的表达，GAPDH作为内参。采用Western blot检测EMMPRIN的表达，Tubulin作为内参。MTT实验检测EMMPRIN-siRNA干扰片段转染抑制EMMPRIN表达对U251细胞增殖的影响。流式细胞仪检测EMMPRIN-siRNA干扰片段转染抑制EMMPRIN表达对U251细胞凋亡和细胞周期分布的改变。采用SPSS13.0统计软件包进行统计学分析。 结果：EMMPRIN-siRNA干扰片段转染胶质瘤U251细胞后，显著抑制U251细胞EMMPRIN基因在mRNA和蛋白水平的表达。MTT实验检测EMMPRIN-siRNA干扰片段转染胶质瘤U251细胞后，U251细胞的增殖受到明显抑制。EMMPRIN-siRNA干扰片段转染胶质瘤U251细胞后，U251细胞的凋亡显著增加。EMMPRIN-siRNA干扰片段转染胶质瘤U251细胞后，U251细胞的周期分布发生显著变化，增殖期细胞显著减少。 结论：EMMPRIN基因的特异性siRNA能抑制胶质瘤U251细胞株的增殖，促进细胞凋亡。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

声明

引 言

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

研究的意义及展望

参考文献

综 述 细胞外基质金属蛋白酶诱导因子与脑胶质瘤的关系

致 谢