PSA与人前列腺癌细胞LNCaP生长相关性研究

摘要

目的:
　　研究运用RNA干扰技术沉默PSA基因后对人前列腺癌细胞系LNCaP细胞产生的影响,并对其机制进行一定的探讨。
　　材料和方法:
　　1、构建针对PSA基因的小分子干扰RNA(PSA-siRNA),将前列腺癌LNCaP细胞进行分组,设PSA-siRNA转染组、阴性对照组、转染液组(只由转染试剂进行转染实验)和对照组(不添加任何转染试剂)进行实验。应用蛋白印迹法检测PSA的变化,并通过MTT法和流式细胞技术检测LNCaP细胞的调亡和细胞增殖方面的变化。
　　2、将针对PSA基因的特异性干扰RNA转入雄激素依赖性前列腺癌细胞LNCaP,同时设有相应的阴性对照组。Western Blot法检测PSA及AR蛋白的表达;Alamar Blue法和流式细胞术分别检测细胞的增殖和调亡;划痕实验检测细胞迁移能力。
　　结果:
　　1、蛋白印迹法检测结果显示,与阴性对照组、转染液组和对照组相比,应用PSA-siRNA处理48h后的LNCaP细胞株,PSA的表达明显降低,组间比较具均有明显差异性(P<0.05)。MTT法和流式细胞仪检测示,转染组的细胞生长抑制率为27.5％,且观察到更强的细胞调亡(19.3%)。
　　2、Western Blot结果显示,与阴性对照组相比,转染干扰组的PSA和AR表达明显下降,组间比较有明显差异性;Alarmar Blue法和流式细胞术结果分别显示,转染干扰组的细胞生长受到明显抑制,且观察到更强的细胞调亡;划痕实验结果显示转染干扰组细胞迁移能力明显减弱。
　　结论:
　　1、运用RNA干扰技术沉默PSA基因可以有效抑制LNCaP细胞中PSA基因的表达,进而抑制LNCaP细胞的生长与增殖,并可有效诱导细胞调亡。
　　2、PSA可能通过调节AR表达而调节雄激素依赖性前列腺癌细胞LNCaP的生长、增殖、凋亡及迁移能力。

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中英文对照词汇表

前 言

第一部分RNAi沉默PSA基因对人前列腺癌细胞LNCaP生长的影响

材料与方法

一 、实验材料

1. 细胞培养材料

2. 特异性干扰RNA构建材料

3.细胞转染材料

4.western blot材料

5.MTT实验材料

6.流式细胞实验材料

7.溶液配制：

8.使用仪器

二、实验方法

1.实验分组

2.冻存细胞复苏

3.人前列腺癌细胞LNCaP的培养

4.人前列腺癌细胞LNCaP的传代

5.细胞转染及观察

6.Western blot 法检测蛋白表达

7.MTT实验

8.流式细胞实验

结 果

1.干扰RNA的构建与转染

2.western blot检测干扰效果

3.MTT实验结果

3.流式细胞仪检测形态学分析

讨 论

结 论

第二部分PSA调节人前列腺癌细胞LNCaP生长可能机制的探讨

材料与方法

一 、实验材料

二、实验方法

1.实验分组

2.冻存细胞复苏

3.人前列腺癌细胞LNCaP的培养及传代

4.细胞转染

5.Western blot 法检测蛋白表达

7.流式细胞实验

8.划痕实验

9.统计方法

结 果

1.Western blot法检测PSA和AR在LNCaP细胞中的表达

2.Alarmar Blue法检测LNCaP细胞的活力

3.流式细胞仪检测形态学分析

4.划痕实验结果

讨 论

结 论

参考文献

综 述

致谢

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