RASSF1A基因去甲基化对人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其机理研究

摘要

[目的]
　　 RASSF1A基因是一种重要的肿瘤抑制基因，在人类许多实体肿瘤中，其启动子CpG岛区域常常会发生高甲基化而导致其转录沉默。5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine，5-Aza-CdR)能使因甲基化而失活的肿瘤抑制基因重新激活，进而抑制肿瘤的生长。本实验通过观察5-Aza-CdR对体外培养的人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)和体内裸鼠移植瘤的生长抑制作用与影响，进一步探索RASSF1A基因是否在人低分化鼻咽癌的发生发展中起着重要作用。同时，探讨该药物的抗肿瘤效应，为临床治疗鼻咽癌提供新的作用靶点。
　　 [方法]
　　 1.利用MSP、RT-PCR和免疫细胞化学等方法检测CNE-2Z细胞RASSF1A基因的甲基化水平及转录表达情况。
　　 2.建立鼻咽癌裸鼠移植瘤模型，观察5-Aza-CdR处理组和对照组裸鼠体内肿瘤的生长、侵袭和转移等情况。
　　 3.利用MSP、RT-PCR和免疫组织化学等方法进一步检测裸鼠移植瘤组织内RASSF1A基因的甲基化水平及转录表达情况。
　　 [结果]
　　 1.体外细胞培养实验：
　　 对照组CNE-2Z细胞内RASSF1A基因启动子CpG岛区域呈高甲基化，用5-Aza-CdR处理CNE-2Z细胞后RASSF1A基因的高甲基化水平降低，RASSF1A基因蛋白表达增加。
　　 2.裸鼠移植瘤实验
　　 1)用药组平均瘤重为1.237±0.809g，比对照组平均瘤重2.512±1.566g明显降低(P<0.05)。
　　 2)用药组侵袭转移率为15.00％；对照组侵袭转移率为15.38％。两组结果无明显差别。
　　 3)对照组瘤组织的RASSF1A基因启动子CpG岛区域均存在高甲基化，应用5-Aza-CdR后，RASSF1A基因的高甲基化水平降低，RASSF1A基因蛋白表达水平增加。
　　 [结论]
　　 1.RASSF1A基因在体外CNE-2Z细胞内和CNE-2Z裸鼠移植瘤内并未完全失活，呈低水平表达。
　　 2.去甲基化药物5-Aza-CdR可使RASSF1A蛋白表达水平增加，并明显抑制裸鼠移植瘤的生长，但不能降低移植瘤的侵袭转移率。
　　 3.RASSF1A基因去甲基化对CNE-2Z裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用，但不影响其侵袭转移。