重庆特有植物荷叶铁线蕨Adiantum reniforme var.sinense多糖和黄酮的提取、抗氧化及抑菌特性研究

摘要

荷叶铁线蕨(Adiantum reniforme var. sinense Y. X. Lin)隶属于铁线蕨科、铁线蕨属、单叶铁线蕨系,具有重要的药用价值,能清热解毒,利尿通淋,对黄疸型肝炎、泌尿系统感染、尿路结石、中耳炎等症有较好的疗效。
　　本文以荷叶铁线蕨为原料,研究了荷叶铁线蕨粗多糖和总黄酮的三种提取工艺,在提取和初步纯化的基础上分别进行了抗氧化以及抑菌活性研究,为荷叶铁线蕨的综合开发利用提供理论依据。
　　研究内容和结果如下:(1)本文采用蒽酮-硫酸法测定荷叶铁线蕨多糖的含量,并优化了测定条件。结果表明,蒽酮-硫酸法测定荷叶铁线蕨多糖含量具有精密度高、稳定性好、回收率高的特点,是一种可靠的测定荷叶铁线蕨多糖的方法。(2)以荷叶铁线蕨为原料,研究了热水浸提法、微波辅助热水浸提法和超声波辅助提取法提取荷叶铁线蕨粗多糖的工艺,在单因素试验基础上,设计正交试验优化了荷叶铁线蕨多糖的提取工艺。试验结果表明,热水浸提法提取荷叶铁线蕨多糖的最佳工艺条件为:料液比1:30,提取温度80℃,提取时间3.0h,90％的乙醇醇析,在此工艺条件下,荷叶铁线蕨粗多糖的得率为3.16%;微波辅助-热水浸提法的最优提取工艺条件为:料液比为1:25,纯醇析浓度85%乙醇,80℃下提取2.0h,荷叶铁线蕨多糖的得率为3.42%;超声波辅助提取法提取荷叶铁线蕨多糖的最佳提取工艺条件为:提取温度80℃、提取30min、超声波功率450W、料液比为1:20,此工艺条件下多糖的得率达3.54%。(3)以乙醇为提取溶剂,在单因素试验基础上,通过正交试验确定了超声波辅助提取法、乙醇热浸提法及微波辅助-乙醇热浸提法提取荷叶铁线蕨总黄酮的最佳提取条件。结果表明,超声波辅助提取荷叶铁线蕨黄酮类化合物的最佳提取工艺为温度为80℃,乙醇的浓度为80%,超声波提取时间为1.0h,超声波功率为350W,在此工艺条件下,荷叶铁线蕨总黄酮的得率达5.88%;乙醇热浸提法提取荷叶铁线蕨总黄酮的最佳提取工艺条件为:乙醇浓度40%,料液比1:20,提取温度80℃,提取时间3.0h,此条件下荷叶铁线蕨总黄酮的得率为3.34%;微波辅助-乙醇热浸提法的最佳提取工艺条件:料液比1:30,提取温度80℃,提取时间3.0h,乙醇浓度60%,此条件下荷叶铁线蕨总黄酮的得率为5.45%。(4)以采自7个样地的荷叶铁线蕨为实验材料,采用超声波法最佳提取工艺分别进行多糖和总黄酮的提取,比较了不同样地多糖及黄酮含量的差异。结果发现,各样地间多糖含量差异显著(P<0.05),以猫耳坪样地多糖含量最高;不同样地荷叶铁线蕨总黄酮的含量,除猫耳坪与鹰咀崖样地之间差异不显著(P<0.05)外,其它各样地间黄酮含量差异极显著,7个样地中以火山沟样地黄酮的含量最高。(5)采用Feton体系和邻苯三酚自氧化体系测定了不同提取方法所得荷叶铁线蕨粗多糖和总黄酮的体外抗氧化能力。结果表明,荷叶铁线蕨多糖和总黄酮对羟基自由基和超氧阴离子自由基均有一定的清除作用,且清除能力随着多糖和黄酮浓度的增加而增大,呈现一定的量效关系。相同浓度条件下条件下,荷叶铁线蕨黄酮对自由基的清除能力优于多糖。(6)以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母为供试菌,采用圆纸片扩散法测定了不同提取方法所得荷叶铁线蕨多糖和总黄酮对不同菌种的抑制作用。
　　结果表明:三种提取方法得到的荷叶铁线蕨粗多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和啤酒酵母都有较好的抑菌作用,但对三种供试菌的最小抑菌浓度无明显差异;不同提取方法得到的荷叶铁线蕨总黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌都有较好的抑菌效果,但对啤酒酵母的抑菌作用不明显。

目录

摘要

ABSTRACT

第1章 文献综述

1.1 荷叶铁线蕨的分类地位

1.2 荷叶铁线蕨的形态特征

1.3 荷叶铁线蕨的分布及原生境情况

1.4 荷叶铁线蕨的研究进展

1.5 研究方法的评述

1.5.1 多糖的研究进展

1.5.2 黄酮的研究进展

1.6 引言

1.6.1 本课题的研究意义及内容

1.6.2 本课题的研究内容

第2章 荷叶铁线蕨多糖的提取、抗氧化及抑菌活性的研究

2.1 材料与仪器

2.1.1 实验材料

2.1.2 药品与试剂

2.1.3 主要仪器与设备

2.1.4 实验菌种

2.1.5 荷叶铁线蕨多糖的样液的制备

2.2 试验内容

2.2.1 荷叶铁线蕨多糖含量测定条件的筛选(蒽酮-硫酸法)

2.2.2 标准曲线的绘制及荷叶铁线蕨多糖含量的测定

2.2.3 荷叶铁线蕨多糖提取工艺的研究

2.2.4 荷叶铁线蕨多糖抗氧化活性的研究

2.2.5 荷叶铁线蕨多糖的抑菌试验

2.3 结果与分析

2.3.1 荷叶铁线蕨多糖含量测定条件的筛选(蒽酮-硫酸法)

2.3.2 标准曲线的绘制及荷叶铁线蕨多糖含量的测定

2.3.3 荷叶铁线蕨多糖提取工艺的研究

2.3.4 荷叶铁线蕨多糖抗氧化活性的研究

2.3.5 荷叶铁线蕨多糖的抑菌试验

2.4 小结

第3章 荷叶铁线蕨黄酮化合物的提取、抗氧化及抑菌活性的研究

3.1 材料与仪器

3.1.1 实验材料

3.1.2 药品与试剂

3.1.3 主要仪器与设备

3.1.4 实验菌种

3.2 实验内容

3.2.1 荷叶铁线蕨总黄酮含量的测定

3.2.2 荷叶铁线蕨中总黄酮提取工艺的研究

3.2.3 荷叶铁线蕨总黄酮抗氧化活性研究

3.2.4 荷叶铁线蕨黄酮的抑菌试验

3.3 结果与分析

3.3.1 荷叶铁线蕨总黄酮含量测定标准曲线的绘制及定性检测

3.3.2 荷叶铁线蕨中总黄酮提取工艺的研究

3.3.3 荷叶铁线蕨总黄酮抗氧化活性研究

3.3.4 荷叶铁线蕨黄酮的抑菌试验

3.4 小结

第4章 结论

4.1 结论

4.2 后续研究设想

参考文献

致谢

发表论文和参加课题