过氧化物酶体及其ROS氧化应激途径与青蒿琥酯抗胰腺癌敏感性相关研究

摘要

[目的]
　　 探讨过氧化物酶体及其ROS氧化应激途径与青蒿琥酯抗肿瘤敏感性的相关性，筛选出与青蒿琥酯抗肿瘤敏感性密切相关的可能关键调控基因，并在胰腺癌细胞中进行初步验证，为阐明青蒿琥酯抗胰腺癌作用及其敏感性差异的分子机制提供实验依据，并为临床指导胰腺癌的个体化治疗及抗肿瘤药物研制提供新思路。
　　 [方法]
　　 1.利用全基因组及代谢途径数据库(KEGG)内的通路数据库(PATHWAYdatabase)查阅过氧化物酶体通路信息，获得过氧化物酶体通路图谱;利用美国国立癌症研究所(NCI)公共数据库(http:∥dtp.nci.nih.gov)检索获得55株肿瘤细胞表达谱基因芯片数据。
　　 2.采用Kendall's相关分析方法，对55株肿瘤细胞过氧化物酶体通路基因mRNA表达水平与青蒿琥酯抗肿瘤细胞作用的IC50进行相关分析，筛选出相关性有统计学意义的基因。采用Ward分析法，依据所筛选出的基因表达对肿瘤细胞株进行层次聚类分析，通过卡方检验比较聚类后的对青蒿琥酯敏感与耐药细胞株的分布差异。
　　 3.采用荧光实时定量PCR技术验证上述基因在不同敏感性胰腺癌细胞的mRNA表达差异、及其在青蒿琥酯作用前后部分抗氧化基因的mRNA表达变化，并通过DAB染色观察胰腺癌细胞内过氧化物酶体含量。
　　 [结果]
　　 1.过氧化物酶体通路相关主要表达基因共76个，从中筛选出mRNA表达水平与青蒿琥酯抗肿瘤细胞作用的IC50显著相关的基因14个，包括PEX11B、PEX12、PEX16 CAT、PRDX1、SOD1等主要涉及过氧化物酶体形成、增殖及ROS氧化应激代谢的基因;经层次聚类分析后的对青蒿琥酯敏感与耐药细胞株的分布差异有显著意义。
　　 2.与正常肝细胞HL-7702相比较，胰腺癌Panc-1细胞株的PEX11B、PEX12、PEX16、CRAT的mRNA表达水平明显增高(P＜0.05)，以CRAT的表达升高最为明显。胰腺癌Panc-1细胞的CAT、SOD1、SOD2的mRNA表达水平明显高于胰腺癌Bxpc-3细胞及正常肝细胞HL-7702(P＜0.05)。
　　 3.以药理浓度50umol/L的青蒿琥酯作用后，三株细胞CAT的mRNA表达水平均明显降低(P＜0.05)，其中以正常肝细胞HL-7702的CAT表达降低最为明显，胰腺癌Panc-1 CAT表达水平比其它两株细胞降低程度小。青蒿琥酯作用后胰腺癌Panc-1、胰腺癌Bxpc-3抗氧化基因PRDX1、SOD1表达水平明显增高(P＜0.05)，以Panc-1细胞变化程度最高;正常肝细胞HL-7702中其表达水平则降低(P＜0.05)。
　　 4.DAB染色结果显示胰腺癌Panc-1过氧化物酶体含量明显较胰腺癌Bxpc-3高，胰腺癌Bxpc-3的含量与肝细胞HL-7702大致相当。
　　 [结论]
　　 1.过氧化物酶体及其ROS氧化应激途径与青蒿琥酯抗肿瘤敏感性具有密切的相关性，筛选出可能关键调控基因，主要包括PEX11B、PEX12、CAT、SOD1等，这些基因均主要涉及过氧化物酶体装配合成、ROS氧化应激代谢等方面;
　　 2.青蒿琥酯对胰腺癌细胞表现出的抗肿瘤敏感性差异可能与胰腺癌细胞内过氧化氢酶(CAT) mRNA表达水平及其过氧化物酶体含量有关，胰腺癌细胞内过氧化物酶体及过氧化氢酶表达水平越高，青蒿琥酯对其细胞毒性作用就越明显。

目录

声明

摘要

前言

1．1 研究背景

1．2 研究目的

1．3 研究内容

1．4 研究方案与技术路线

第一部分 基于生物信息学方法的过氧化物酶体通路与青蒿琥酯抗肿瘤敏感性关键基因的筛选研究

1．材料和方法

2．实验结果

3．讨论

第二部分 过氧化物酶体及其ROS氧化应激关键基因表达与青蒿琥酯抗胰腺癌作用敏感性的相关性研究

1．材料与方法

2 实验结果

3．讨论

全文小结

参考文献

综述

致谢

附录一 英文缩略语

附录二 青蒿素作用于55株肿瘤细胞的IC50值

附录三：在读硕士期间发表的文章