用于治疗氧化应激相关皮肤病和皮肤衰老的组合物和氧化应激相关皮肤病的诊断

摘要

本申请涉及包含分泌RoxP(痤疮丙酸杆菌的自由基氧合酶)的活痤疮丙酸杆菌株的组合物和包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物用于治疗或预防氧化应激相关皮肤病或者用于预防或降低皮肤衰老的用途。本申请还涉及用于诊断受试者中的氧化应激相关皮肤病或者用于确定受试者将从RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用所接受到的益处的方法，该方法包括确定来自所述受试者的皮肤样品中的RoxP的量或者痤疮丙酸杆菌的量。

说明书

技术领域

本发明的方面广泛地处于医学和美容领域并且更具体地涉及用于氧化应激相关皮肤病的预防或治疗性治疗或者用于皮肤衰老的预防或降低的方法、用途和组合物。本发明还涉及用于诊断氧化应激相关皮肤病或者用于鉴别可能受益于本发明所公开的抗氧化组合物的施用的受试者的方法，以及相关个性化医学和相伴诊断方法。

背景技术

人的皮肤持续暴露于氧化应激和自由基，从而暴露于尤其是来源于常规代谢反应和连续暴露于空气、太阳或人工UV照射、环境污染物以及物理和/或化学试剂(例如，化妆品)的大量活性氧(ROS)。

在生理条件下，还原剂，如谷胱甘肽S-转移酶和谷胱甘肽还原酶的内源产生保护人的皮肤抵抗过量的氧化应激。然而，在病理学状况下，ROS的产生可能变得过大并因此有助于病理发生，例如，银屑病(Kadam等人2010Indian J Clin Biochem 25:388-392)或皮肤癌的病理发生(Sander等人2003Br J Dermatol 148:913-922)。非黑素瘤皮肤癌，包括鳞状细胞癌和基底细胞癌不仅显示出提高的氧化应激迹象，而且还显示出内源抗氧化功能受损(Sander等人2003)。

由自由基如ROS所引起的氧化损伤也是通常身体衰老，并且具体地皮肤衰老的主要原因。尽管皮肤具备保护它抵抗氧化伤害的精巧的抗氧化系统，但是天然抗氧化混合物可能随年龄而减弱，或者被氧化应激，例如，由于过量UV暴露所压制。自由基可以抵抗胶原蛋白和弹性蛋白，从而导致结构被破坏。随着年龄增加，积累的自由基影响开始减缓细胞功能，因此降低身体自我修复的能力。自由基的攻击最终导致产生了皱纹、皮肤下垂和“老年斑”。

在治疗和美容两者的背景中，仍不断需要提供预防或降低氧化应激及其对皮肤的有害影响的另外或改善的方法。

本发明人先前已鉴别了痤疮丙酸杆菌(C.acne)分离株大量表达的蛋白RoxP(痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acne)的自由基氧合酶)并且表明RoxP在某些体外条件下显示出抗氧化活性并且可以支持痤疮丙酸杆菌在体外好氧环境中的生长和人皮肤移植物的离体定殖(Allhom等人2016Sci Rep 6:36412)。

发明内容

本发明至少部分基于以下意外发现：在治疗和美容相关模型系统中RoxP保护人皮肤免受氧化损伤，并且皮肤RoxP的量的降低与人中氧化应激相关皮肤病相关。这些观察结果首次将RoxP或分泌RoxP的痤疮丙酸杆菌鉴别为用于针对解决皮肤中的病理或生理氧化应激过程的治疗或美容干预的可靠方法。

因此，一方面提供了组合物用于预防或降低受试者中的皮肤衰老的美容用途，所述组合物包含分泌RoxP(痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acne)的自由基氧合酶)的活痤疮丙酸杆菌(Cutibacterium acne)株。

相关方面提供了用于预防或降低受试者中的皮肤衰老的美容方法，该方法包括向受试者的皮肤施用美容有效量的包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的组合物。

另一个方面提供了用于在预防或治疗氧化应激相关皮肤病的方法中使用的组合物，其包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株。

相关方面提供了用于预防或治疗对其有需要的受试者中的氧化应激相关皮肤病的方法，所述方法包括向受试者的皮肤施用预防或治疗有效量的包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的组合物。另一个相关方面提供了包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的组合物用于生产用于在预防或治疗氧化应激相关皮肤病的方法中使用的药剂的用途。其它相关方面提供了包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的组合物用于预防或治疗氧化应激相关皮肤病的用途。

其它方面提供了包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物用于预防或降低受试者中的皮肤衰老的美容用途。

相关方面提供了用于预防或降低受试者中的皮肤衰老的美容方法，所述方法包括向受试者的皮肤施用美容有效量的包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物。

另一个方面提供了用于在预防或治疗氧化应激相关皮肤病的方法中使用的组合物，其包含RoxP或其生物活性变体或片段。

相关方面提供了用于预防或治疗对其有需要的受试者中的氧化应激相关皮肤病的方法，所述方法包括向受试者的皮肤施用预防或治疗有效量的包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物。另一个相关方面提供了包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物用于生产用于在预防或治疗氧化应激相关皮肤病的方法中使用的药剂的用途。其它相关方面提供了包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物用于预防或治疗氧化应激相关皮肤病的用途。

其它方面提供了用于诊断受试者中氧化应激相关皮肤病或者用于确定受试者是否会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的方法，所述方法包括确定来自所述受试者的皮肤样品中的RoxP的量或者痤疮丙酸杆菌的量。相关方面提供了一种方法，包括确定来自怀疑患有或者处于患氧化应激相关皮肤病的风险，或者怀疑会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的受试者的皮肤样品中的RoxP的量或者痤疮丙酸杆菌的量。

这些诊断方法还可以用于将受试者选择为患有或处于患氧化应激相关皮肤病的风险的受试者，或者会受益于分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用或者RoxP的施用的受试者。所选择的受试者可以经历本文所公开的预防或治疗干预，其包括分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用或者RoxP或其生物活性变体或片段的施用。所选择的受试者还可以经历对于治疗各个氧化应激相关皮肤病有用的其它预防或治疗干预。

在以下部分和所附权利要求中将描述本发明的这些和其它方面以及优选的实施方式。借此，具体地将所附权利要求的主题引入本说明书。

附图说明

通过以下附图说明了本申请的教导，其将被认为仅是说明性的而不以任何方式限制权利要求的范围。

图1：roxP在不同痤疮丙酸杆菌种系型中的表达。从I型(n＝6)、II型(n＝5)和III型(n＝2)株的代表性指数期和/或稳定期痤疮丙酸杆菌培养物中提取RNA。以生物和技术副本进行roxP mRNA的qPCR定量，对gapdh转录本归一化并使用双δCq分析评价。通过它们各自的种系型分组，随后通过学生t检验确定统计显著性。***p<0.001，****p<0.0001。

图2：在TSB中，在厌氧(实线)或好氧(短划线)条件下将15株不同的痤疮丙酸杆菌培养5-7天。某些株(A)显示在好氧和厌氧生长之间无显著性差异，(B)主要在指数期后期偏好好氧生长，或者(C)在好氧条件下具有提高的迟滞时间。黑色的线代表表达最常见的RoxP同源物的株，以及灰色的线代表表达不太常见的蛋白变体的株。Y轴描述了OD

图3：RoxP的活性。

图4：RoxP在不利条件下的抗氧化活性。在多种环境中测试了RoxP减少ABTS自由基阳离子的能力，其表示为在734nm的吸光度降低。将磷酸钠缓冲液(20mM，pH 7.4)中不同浓度的重组RoxP(rRoxP)(0.2-3.2μM)(A)，用盐溶液温育的rRoxP(2.7μM)(B)，在RT至98℃范围内的温度下温育20min并在活性测量之前冷却至环境温度的预热的rRoxP(2.7μM)(C)或者在室温下储存长达2周的rRoxP(2μM)(D)加入至预形成的ABTS

图5：通过添加百草枯将人单核细胞(A)或角化细胞(B)细胞系暴露于氧化应激，同时之后立即添加RoxP。在通过MTT测定分析细胞存活力之前，将细胞温育24h(角化细胞)或48h(单核细胞)。显示了在百草枯(C)或者百草枯+RoxP(D)之后的单核细胞的代表性显微镜显像。使用学生t检验计算统计信息。

图6：在患病(受影响)和健康(不受影响)的区域擦拭具有健康皮肤(对照，n＝18)、光化性角化病(AK，n＝18)或基底细胞癌(BCC，n＝18)的个体。通过RoxP-MIP电容性生物传感器测量确定RoxP的绝对量。在分析中包括了所有各个数据点。

图7：4组中丰度最高的5个属和丰度最高的4个种的相对丰度的箱形图(A)。胡须(whiskers)显示了5-95％的百分位，并且作为垂线显示了中值。用*标记出基于LefSe分析的丰度差异的分类单元。(B)AK和BCC中痤疮丙酸杆菌种系型的相对丰度的确定。与对照相比，在受AK影响的皮肤位点痤疮丙酸杆菌II型丰度升高(从15％升高至39％)，而IA型株降低(从70％降低至45％)。

图8：8种痤疮丙酸杆菌株的roxP上游区的比对。所述株代表8个主要roxP上游序列，其覆盖了整个痤疮丙酸杆菌群体(参见图9)。上游序列含有推定的roxP启动子(加下划线部分)。使用工具BPROM找到该启动子(Solovyev and Salamov 2011,AutomaticAnnotation of Microbial Genomes and Metagenomic Sequences.In Metagenomics andits Applications in Agriculture,Biomedicine and Environmental Studies(R.W.Li主编),Nova Science Publishers，61-78页)(在株名称之后的括号中给出了置信度(LDF(线性判别函数)得分)。另外，比较了Lin等人(2013BMC Genomics 14:620)鉴别的痤疮丙酸杆菌共有启动子序列(-10区域：T.A.n.n.n.T和-35区域：G/A.n.T/G.T/G.n.G)：以加粗斜体显示所有错配碱基。具有SLST A和C型的IA型株具有与共有启动子完全匹配的roxP上游序列。由株09-9和ATCC 11828所表示的II型株在-35区中具有错配。

图9：含有推定启动子的roxP上游区的分析。筛选了155个测序的痤疮丙酸杆菌基因组的roxP上游区(200nt)。所有痤疮丙酸杆菌基因组具有该区域。发现了8个主要序列；显示了分别具有各个roxP上游序列的代表性株。系统比较了各个上游区。大部分测序的基因组具有株PA_12.1.L1：81个基因组所表示的形式；其它株显示：PA_15.1.R1，24个基因组；09-109，8个基因组；KPA171202，11个基因组；PMH5，4个基因组；523，3个基因组；09-9，2个基因组；ATCC_11828，20个基因组。图中提供了株的各个类型名称IA、IB、II、III以及SLST A、C、G、H、K、L型。II型株可以存在于不同的簇中。

图10.来自痤疮丙酸杆菌的RoxP序列的系统发生树。使用ClustalW算法对来自所研究的痤疮丙酸杆菌株的RoxP的氨基酸序列进行比对，这将RoxP分成3个主要类型。第一种类型含有来自株PMH-7和PMH-5(两者属于种系型III)的RoxP，第二种类型含有来自株PA_12_1_R1、PA_21_1_L1、PA_12_1_L1、PA_15_1_R1、KPA171202、09-23和PA_30_2_L1(除一种外，均属于种系型I；株09-23属于种系型II)的RoxP，第三种类型含有来自株AD24、10-43、09-09、09-323和11-79(均属于种系型II)的RoxP。

图11.使用RoxP基分子印记晶胶基质将来自细菌上清液的RoxP亲合纯化至高纯度。(A)将来自痤疮丙酸杆菌II型株AD24的硫酸铵沉淀(80％)并再缓冲(100mM磷酸钠，pH7.0)的上清液流过RoxP基分子印记晶胶基质。收集流穿液并用500mM咪唑洗脱结合的蛋白。将PageRuler

图12：用于使用电容性生物传感器确定皮肤拭子样品中RoxP浓度的校准曲线。在补充有一定浓度范围的RoxP的10mM磷酸钠缓冲液(pH 7.0)中稀释通气的皮肤拭子(未应用于皮肤或其它固体表面)的内容物。将样品注入系统并将所产生的电容变化对对数蛋白浓度作图。

图13：患有BCC的患者中RoxP的发病普遍性。在患病(受影响)和健康(未受影响)皮肤区域擦拭患有基底细胞癌(灰色)或者光化性角化病(黑色)的个体。通过RoxP-MIP电容性生物传感器测量确定RoxP的绝对量。该分析仅包括可以从中成功计算两个匹配数据点的那些个体。

图14：4组：AKC(光化性角化病：健康皮肤位点)、AKS(光化性角化病：受影响的皮肤位点)、BCCC(基底细胞癌：健康皮肤位点)和BCCS(基底细胞癌：受影响的皮肤位点)中，丰度最高的属(将所有其它属聚类在“其它”组中)的相对丰度。

图15：暴露于UV应激的重建人表皮(RHE)的形态学评价。(A)阴性对照1-无RoxP-富集的痤疮丙酸杆菌上清液的非应激RHE，(B)阴性对照2-具有10％v/v的痤疮丙酸杆菌上清液的非应激RHE，(C)阳性对照1-通过UV应激的RHE，(D)测试1-在存在10％v/v的RoxP-富集的痤疮丙酸杆菌上清液的情况下通过UV应激的RHE。

图16：暴露于UV应激的RHE的DNA损伤/CPD评价。(A)阴性对照1-无RoxP-富集的痤疮丙酸杆菌上清液的非应激RHE，(B)阴性对照2-具有10％v/v的RoxP-富集的痤疮丙酸杆菌上清液的非应激RHE，(C)阳性对照1-通过UV应激的RHE，(D)测试1-在存在10％v/v的RoxP-富集的痤疮丙酸杆菌上清液的情况下通过UV应激的RHE，(E)(A)-(D)中所示结果的定量。

图17：暴露于UV应激的RHE的DNA损伤/8-OHdG评价。(A)阴性对照1-无RoxP-富集的痤疮丙酸杆菌上清液的非应激RHE，(B)阴性对照2-具有10％v/v的RoxP-富集的痤疮丙酸杆菌上清液的非应激RHE，(C)阳性对照1-通过UV应激的RHE，(D)测试1-在存在10％v/v的RoxP-富集的痤疮丙酸杆菌上清液的情况下通过UV应激的RHE，(E)(A)-(D)中所示结果的定量。

图18：暴露于UV或臭氧应激的RHE的系统解毒评价(GPx分析)。阴性对照1-无RoxP-富集的痤疮丙酸杆菌上清液的非应激RHE，阴性对照2-具有10％v/v的RoxP-富集的痤疮丙酸杆菌上清液的非应激RHE，阳性对照1-通过UV应激的RHE，测试1-在存在10％v/v的RoxP-富集的痤疮丙酸杆菌上清液的情况下通过UV应激的RHE，阳性对照2-通过臭氧应激的RHE，测试2-在存在10％v/v的RoxP-富集的痤疮丙酸杆菌上清液的情况下通过臭氧应激的RHE。

图19：暴露于UV应激的RHE的细胞凋亡评价(活性半胱天冬氨酸酶-3)评价。(A)阴性对照1-无RoxP-富集的痤疮丙酸杆菌上清液的非应激RHE，(B)阴性对照2-具有10％v/v的RoxP-富集的痤疮丙酸杆菌上清液的非应激RHE，(C)阳性对照1-通过UV应激的RHE，(D)测试1-在存在10％v/v的RoxP-富集的痤疮丙酸杆菌上清液的情况下通过UV应激的RHE，(E)(A)-(D)中所示结果的定量，#1柱：阴性对照1，#2柱：阴性对照2，#3柱：阳性对照1，#4柱：测试1。

图20：使用RoxP-肽1(点线曲线)或RoxP-肽2(短划线曲线)以及作为对照的水(短划加点线曲线)的ABTS自由基阳离子测定。(A)动力学分析，(B)浓度依赖性测定。

图21：使用RoxP-肽1(A)或者RoxP-肽2(B)的ORAC(氧自由基吸收能力)测定。

图22：RoxP减少了·OH自由基的产生，如通过在存在RoxP(右柱)的情况下在脱氧核糖(TBA-MDA)测定中532nm的吸光度降低所证明的。

图23：RoxP降低了UV辐照和非辐照血浆中的脂质氢过氧化物水平。

图24：RoxP将Fe

图25：在菲洛嗪测定中，RoxP将Fe

图26：RoxP与粪卟啉III的相互作用。

图27：ABTS还原测定中的黄素和RoxP活性。

图28：根据实施例19，在本研究中的处理区1至6和辐照区。

图29：在RoxP的体内研究中通过色度计的肤色a*(红斑)。

图30：在RoxP的体内研究中通过色度计的肤色a*(红斑)(与基线的差异)。

图31：在RoxP的体内研究中SQOOH含量(ng/mg)(原始数据)。

图32：RoxP降低了通过卟啉所形成的自由基的产生。

具体实施方式

除非上下文另外明确规定，否则如本文所使用的，单数形式的“一种”，“一个”和“所述”包括单数和复数对象。

如本文所使用的术语“包括了”、“包括”和“包括有”与“包含了”、“包含”或“含有了”、“含有”同义，并且是包含性的或开放性的，并且不排除其它未列举的成员、元素或方法步骤。术语还涵盖了“由……组成”和“基本由……组成”，其享有专利术语中公认的含义。

通过端点列举的数值范围包括归入相应范围内的所有数值和分数以及所列举的端点。不管是否通过表达“从……至……”或者表达“……和……之间”或者另一种表达引入它们，这适用于数值范围。

当表示可测量值，如参数、量和时距等时，如本文所使用的术语“约”或者“大约”表示涵盖了指定值的和距指定值的变化，如指定值的和距指定值的+/-10％或以下，优选地+/-5％或以下，更优选地+/-1％或以下，并且更优选地+/-0.1％或以下的变化，其仅在这些变化适合于在所公开的发明中实施的程度。应理解还具体且优选地公开了修饰词“约”或“大约”所指的值本身。

然而，通过进一步举例说明，术语“一个或多个”或“至少一个”，如一个或多个成员或者一组成员中的至少一个成员本身是清楚的，该术语尤其涵盖了对所述成员中的任一个的提及，或者对所述成员中的任何两个或更多个的提及，如，例如，所述成员的任何≥3，≥4，≥5，≥6或≥7个等，并且多至全部所述成员。在另一个实例中，“一个或多个”或“至少一个”可以表示1、2、3、4、5、6、7个或更多个。

在本文中包括了背景技术讨论以解释本发明的背景。这不应被视为对以下情况的承认：截止任何权利要求的优先日期，所提及的任何材料是在任何国家中公开、已知或常识的一部分。

在整个本发明公开中，通过标明引用参考了多个专利公开、专利和公开的专利说明书。在本发明的说明书中引用的所有文档以其全部内容作为参考并入本文。具体地，在本文中将这些文档的教导内容或部分具体地表示为作为参考并入。

除非另外定义，否则在公开本发明时所使用的所有术语，包括技术和科学术语，具有与本发明所属领域的技术人员通常理解的含义相同的含义。通过进一步指导，包括了术语定义以更好地理解本发明的教导内容。除非另外定义，否则当结合本发明的具体方面或本发明的具体实施方式定义具体术语时，这些内涵或含义表示在整个说明书中适用，即还在本发明的其它方面或实施方式的背景中适用。

在以下段落中，更详细地定义了本发明的不同方面或实施方式。除非明确相反指明，否则如此定义的每个方面或实施方式可以与任何其它方面或实施方式组合。具体地，指明为优选的或有利的任何特性可以与指明为优选的或有利的任何其它特性组合。

在整个说明书中对“一个实施方式”或“实施方式”的提及表示在本发明的至少一个实施方式中包括了结合所述实施方式所描述的具体特性、结构或特征。因此，短语“在一个实施方式中”或“在实施方式中”在整个说明书中的多个地方的出现不必需全部表示相同实施方式，但是可以。此外，在一个或多个实施方式中，具体特性、结构或特征可以以任何合适的方式组合，如根据本发明公开对本领域技术人员将显而易见的。此外，尽管本文所述的一些实施方式包括了在其它实施方式中所包括的一些但并非其它特性，但不同实施方式的特性的组合旨在包含在本发明的范围内，并且形成不同的实施方式，如本领域技术人员将理解的。例如，在所附权利要求中，任何所主张的实施方式可以以任何组合使用。

通过使用治疗结果的相关模型系统信息，如通过描述本发明的某些代表性实施方式的实验部分所证实的，本发明人首次鉴别并验证了作为预防或降低受试者中的皮肤衰老或者预防或治疗氧化应激相关皮肤病的美容、预防或治疗干预的有用活性剂的RoxP或分泌RoxP的痤疮丙酸杆菌。实验部分证明本文所述的组合物具有抗氧化性质。因此，不希望受理论束缚，本文所公开的美容、预防或治疗方法可以通过保护皮肤细胞和/或皮肤的细胞或胞外组分，如蛋白、脂质或核酸免受氧化应激，具体地通过经由分泌RoxP的痤疮丙酸杆菌向皮肤施用或向皮肤递送RoxP来淬灭或中和皮肤中的自由基，包括活性氧(ROS)起作用。

因此，本发明的一个方面提供了组合物用于预防或降低受试者中的皮肤衰老的美容用途，所述组合物包含分泌RoxP(痤疮丙酸杆菌的自由基氧合酶)的活痤疮丙酸杆菌株。相关方面提供了用于预防或降低受试者中的皮肤衰老的美容方法，所述方法包括向所述受试者的皮肤施用美容有效量的包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的组合物。

另一个方面提供了用于在预防或治疗氧化应激相关皮肤病的方法中使用的组合物，其包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株。相关方面提供了：用于预防或治疗对其有需要的受试者中的氧化应激相关皮肤病的方法，所述方法包括向所述受试者的皮肤施用预防或治疗有效量的包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的组合物；包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的组合物用于生产在预防或治疗氧化应激相关皮肤病的方法中使用的药剂的用途；或者包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的组合物用于预防或治疗氧化应激相关皮肤病的用途。

其它方面提供了包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物用于预防或降低受试者中的皮肤衰老的美容用途。相关方面提供了用于预防或降低受试者中的皮肤衰老的美容方法，所述方法包括向所述受试者的皮肤施用美容有效量的包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物。

另一个方面提供了用于在预防或治疗氧化应激相关皮肤病的方法中使用的组合物，其包含RoxP或其生物活性变体或片段。相关方面提供了：用于预防或治疗对其有需要的受试者中的氧化应激相关皮肤病的方法，所述方法包括向所述受试者的皮肤施用预防或治疗有效量的包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物；包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物用于生产在预防或治疗受试者中的氧化应激相关皮肤病的方法中使用的药剂的用途；或者包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物用于预防或治疗受试者中的氧化应激相关皮肤病的用途。

结合本文所公开的用途和方法，形容词“美容的”表示这些用途和方法旨在维持、恢复、改善或提高受试者的外貌，更具体地受试者的皮肤外貌，其无限制地包括受试者皮肤的色泽、颜色、肤色、纹理、光滑度或柔软性。如本文所设想的美容用途或方法针对正常、天然或生理学过程，并且可以不同于包括治愈和预防性治疗的疗法，所述疗法的目的是使受试者从病理状态恢复至其原始健康状况，或者至少减轻由病变所引起的疼痛和痛苦的症状，或者首先预防病变。因此，可以将如本文所预期的美容用途或方法表示为“非治疗性的”。如本文所预期的美容用途或方法通常使用配置用于局部施用至皮肤的美容组合物。

如本文所使用的术语“皮肤”一般地表示形成动物，具体地脊椎动物的身体的天然外复盖层的组织层。哺乳动物皮肤由两个主要的层组成：表皮，其构成了皮肤的最外层，包括复层鳞状上皮和下方的基膜，并且包含Merkel细胞、角化细胞、黑素细胞和郎格罕氏细胞；和真皮，其构成了表皮下方的皮肤层，并且包含结缔组织、机械感受器、毛囊、汗腺、皮脂腺、顶泌腺、淋巴管和血管。术语“皮肤”无限制地包括面部、颈部、胸部、腹部、背部、臂、手、腿和头皮上或中的皮肤。

尽管对于衰老构成天然生理过程还是它们本身就是最大的疾病存在几个竞争观点，但是如本文所使用的术语“衰老”一般地表示与任何年龄相关病变分开的变老的过程，从而受试者显示出年龄增长的正常、天然或生理学效果或特征。

在某些实施方式中，本发明的美容用途或方法可以预防或降低皮肤衰老的一个或多个外部征兆的出现。在某些实施方式中，皮肤衰老的一个或多个外部征兆可以是通过目视或触觉检查可感知的。在某些实施方式中，皮肤衰老的一个或多个外部征兆可以是通过肉眼可见的。在某些实施方式中，皮肤衰老的一个或多个外部征兆可以选自包括以下的组、基本由以下组成的组或由以下组成的组：皱纹、细纹、皮肤下垂、皮肤纤维弹性消失、皮肤松弛、皮肤变薄、皮肤色素改变、肤色暗淡、皮肤无光泽及其组合。可以具体地与氧化应激有关或由氧化应激所引起的皮肤衰老的征兆包括细纹、皱纹、皮肤色素改变和皮肤变薄。因此，在某些实施方式中，皮肤衰老的一个或多个外部征兆可以选自包括以下的组、基本由以下组成的组或由以下组成的组：细纹、皱纹、皮肤色素改变、皮肤变薄及其组合。

术语“要预防”或其替代形式，如“预防”通常表示具体地，通过一种或多种防范(预防性)措施，使某些事物不出现、不发生或不存在，或者延迟某些事物的出现或发生。例如，本发明的美容用途或方法可以应用于尚未显示出皮肤衰老的一种或多种外部征兆的受试者，并且可以预防皮肤衰老的所述一个或多个外部征兆的发生或出现，如预防给定持续时间(延迟)。

术语“要减小”或其替代形式，如“减小”通常表示，通常与应用所述措施之前的状态或情况或者与如果不实施所述措施将产生的状态或情况相比，具体地通过一种或多种措施，某些事物的尺寸、量、程度或数目的减少。例如，本发明的美容用途或方法可以应用于已显示出皮肤衰老的一种或多种外部征兆的受试者，并且可以减轻所述一种或多种外部征兆(恢复、改善)或者可以阻止或减缓所述一种或多种外部征兆的进一步发展或恶化(维持、控制)。术语“要减小”可以与术语，如“要减少”、“要抑制”、“要降低”、“要干扰”或者“要减缓”是可互换的。

术语“组合物”一般地表示由两个或更多个组分所组成的事物，并且更具体地表示两种或更多种材料，如组分、分子或物质的组合或混合物，以及由所述组合物的材料所形成的反应产物和分解产物。考虑到它们的使用，可以将本发明的组合物配置为美容组合物或者药物组合物。美容组合物通常包含一种或多种美容活性成分(具有一种或多种美容效果的化学和/或生物活性物质)和一种或多种美容可用的载体。药物组合物通常包含一种或多种药理学活性成分(具有一种或多种药理学效果的化学和/或生物活性物质)和一种或多种药物可用的载体。如本文中通常所使用的组合物可以是液体或固体，并且可以包括溶液或分散体。在某些实施方式中，组合物可以由作为混合物提供给消费者或从业医生的组分组成，即所述组合物组分已混合。在某些实施方式中，组合物可以由组分组成，尽管通常作为相同产品包装或分散装置的一部分，但是将一种或多种所述组分(例如，在单独的容器或小瓶中)与所述组合物的一种或多种其它组分物理分离地提供给消费者或从业医生。通过实例且无限制地，所述组合物可以包含在一个容器，如多室装置(例如，双室分配系统)的一个室中提供的一种或多种组分，和在另一个容器，如多室装置的另一个室中提供的一种或多种组分。这种布置使得消费者或从业医生能够在使用前不久混合所述组合物的组分。例如，所述组合物可以包含在一个容器，如多室装置(例如，双室分配系统)的一个室中提供的如本文所教导的分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株，和在另一个容器，如多室装置的另一个室中提供的一种或多种美容或药物可用的载体，其在使用前由消费者或从业医生混合。多室(如两室或双室)分配器，如瓶、管、罐、泵等通常是已知的并且是可商购的。通过实例且无限制地，Bormioli Rocco SPA(Fidenza，意大利)的WO 2012/153206、WO 2017/168263和WO2018/060799描述了具体地作为New

在某些实施方式中，尽管组合物可以是混合物，但是所述组合物的一种或多种组分仍然可以是与所述组合物的一种或多种其它组分基本分离的(基本不接触)。这可以是(例如)包含在连续相中分散的分散颗粒的分散体，如胶体或混悬液的情况。因此，通过分散颗粒所包含的分散体的组分将基本与通过连续相所包含的分散体的组分分离。通过实例，可以将RoxP或其生物活性变体或片段与一种或多种赋形剂配制以形成处于由一种或多种其它赋形剂所组成的连续相中的分散颗粒，或者反之亦然。通过另一实例，可以将分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株与一种或多种赋形剂配制以形成处于由一种或多种其它赋形剂所组成的连续相中的分散颗粒，或者反之亦然。在某些实施方式中，如本文所预期的分散体可以是乳液(液体分散相，液体连续相)、溶胶或混悬液(固体分散相，液体连续相)、凝胶(液体分散相，固体连续相)或者固体溶胶(固体分散相，固体连续相)。另一种实例包括其中在与所述组合物的一种或多种其它组分混合前，将所述组合物的一种或多种组分混合并微包封的组合物。通过实例，可以将RoxP或其生物活性变体或片段与一种或多种赋形剂配制并微包封，并随后可以将所产生的微胶囊与一种或多种赋形剂一起配制(分散在一种或多种赋形剂中)。通过另一种实例，可以将分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株与一种或多种赋形剂配制并微包封，并随后可以将所产生的微胶囊与一种或多种赋形剂一起配制(分散在一种或多种赋形剂中)。在某些实施方式中，所述微包封的配制品可以是液体或固体，如液体或固体溶液或分散体。在某些实施方式中，所述微胶囊可以与液体或固体配制品，如液体或固体溶液或分散体混合。用于微包封的方法通常是已知的，并且微胶囊的壳体、涂层或膜通常可以由材料如乙基纤维素、聚乙烯醇、明胶或海藻酸钠制成。

有利地，在这些实施方式中，可以将活痤疮丙酸杆菌株或者RoxP或其生物活性变体或片段基本维持与所述组合物的组分分离，尽管在美容或药物组合物的背景中组合物通常是有用的，但这可能损害活性剂的存活力、稳定性或其它所期望的特征。

如先前所提及的，在某些实施方式中，分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株或者RoxP或其生物活性变体或片段可以处于冻干形式；可选地，包含在双室分配系统的一个室中，而另一个室含有适合的再混悬组合物。细菌，如痤疮丙酸杆菌的冻干方法通常是已知的(参见，例如，C Morgan&G Vesey:"Freeze-Drying of Microorganisms",In:Encyclopedia ofMicrobiology,第3版,2009,Academic Press,162-173)。通过实例，痤疮丙酸杆菌株可以在如本说明书其它处所述的适合的生长培养基中生长并在指数期或稳定期收获。通过离心或超滤从培养基分离细菌并在适合的缓冲液中清洗。清洗后，在稳定细菌的赋形剂的混合物中再混悬细菌。常用的赋形剂包括但不限于蔗糖、淀粉、甘露醇、脱脂乳、牛血清白蛋白(BSA)及其组合。赋形剂混合物通常含有外部冷冻保护剂(防止冰晶形成)和内部冻干保护剂(替换作为氢键供体的水)和储存稳定剂。对于每种赋形剂混合物，通过适当的方法，如冻干显微镜(lyostat)测量或者差示扫描量热法确定临界温度。将含有细菌和赋形剂的产品在冰冻干燥器中低于在临界温度下冷冻。选择冰冻干燥器的程序参数，使得产品在整个冷冻干燥循环期间保持在低于混合物的临界温度的温度。在从产品蒸发掉所有水分后，可以将其从冰冻干燥器除去并处理用于最终包装。

可以作为冻干粉末提供冻干细菌，其可选地与固体载体混合以增加体积，或者可以分散在适合的油或油组合中。适合的油的非限制性实例包括加州希蒙得木(SimmondsiaChinensis)(Jojoba)籽油、芝麻(Sesamum Indicum)(芝麻)籽油、牛油树(ButyrospermumParkii)(牛油树)脂、氢化植物油、月桂酸异戊酯、伯尔硬胡桃(Sclerocarya Birrea)(马鲁拉树)籽油、向日葵(Helianthus Annuus)(向日葵)籽油，及其组合。这些及其它油，具体地亲水油，防止水分到达细菌，借此防止细菌再水化并延长了产品的货架期。

蛋白的冻干是本领域中明确建立的程序并且通常使用要冻干的蛋白的水溶液，其可选地与一种或多种适合的冻干赋形剂，如海藻糖、蔗糖、棉子糖、麦芽糖糊精、甘露醇和/或葡聚糖混合。本发明人已通过实验确定溶于水中的RoxP的冻干令人满意地保持了RoxP的活性，即使是在不存在其它赋形剂的情况下，而赋形剂，包括以上分别每个所列举的那些的添加是良好耐受的并且就其稳定性和复原容易性而言，可以导致冻干饼的改善。本发明人已另外观察到，甘露醇，并且具体地2-6％w/v，优选地2-5％w/v，更优选地2-4％w/v，或者甚至更优选地2-3％w/v的甘露醇(相对于要冻干的溶液的体积)对于稳定的饼的产生和RoxP活性的维持是特别有利的。

在某些其它实施方式中，可以应用细菌而无中间冻干步骤。例如但无限制地，细菌可以生长并在指数生长期收获、成粒并以适合的最终细菌浓度，如约10

在某些实施方式中，所述组合物是包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株和美容可用的载体的美容组合物。在某些实施方式中，所述组合物是包含RoxP或其生物活性变体或片段和美容可用的载体的美容组合物。在某些实施方式中，所述组合物是包含i)分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株和ii)RoxP或其生物活性变体或片段两者和美容可用的载体的美容组合物。所述美容组合物还可以包含一种或多种其它美容活性成分。这些其它美容活性成分可以能够预防或降低皮肤衰老，或者可以具有与皮肤衰老无关的美容效果。

在某些实施方式中，所述组合物是包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株和药物可用的载体的药物组合物。在某些实施方式中，所述组合物是包含RoxP或其生物活性变体或片段和药物可用的载体的药物组合物。在某些实施方式中，所述组合物是包含i)分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株和ii)RoxP或其生物活性变体或片段两者和药物可用的载体的药物组合物。所述药物组合物还可以包含一种或多种其它药物活性成分。这些其它药物活性成分可以能够预防或治疗氧化应激相关皮肤病，或者可以具有与所述疾病无关的药物效果。

通过实例且无限制地，这些美容或药物活性剂可以包括皮肤适用的抗氧化剂，如不限于维生素C、维生素A、维生素E、白藜芦醇、辅酶Q10、烟酰胺、多酚、黄酮类或其组合。

通过实例且无限制地，这些美容或药物活性剂可以包括α-硫辛酸、叶酸、八氢番茄红素、生物素、α-葡糖基芦丁、卡尼汀、肌肽、天然和/合成的异黄酮、黄酮、肌酸、肌酐、牛磺酸、B-丙氨酸、二羟丙酮、8-十六碳烯-1,16-二羧酸、甘油葡糖苷、甘草提取物、芦荟、透明质酸、库拉索芦荟叶汁、(2-羟乙基)脲、烟酰胺、维生素A或其组合。

如本文所使用的术语“美容可用的”或“药物可用的”在本领域中是一致的并且表示与美容或药物组合物的其它成分相容且对其受体无害。

某些本发明的组合物包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株。在某些实施方式中，所述组合物可以仅包含一种分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株。在某些实施方式中，所述组合物可以包含两种或更多种分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株。例如，所述组合物可以包含正好两种分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株。在某些实施方式中，所述组合物可以正好包含3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种或者可以包含大于20种分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株。在某些实施方式中，所述组合物可以正好包含3、4或5种分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株。

痤疮丙酸杆菌(先前称为痤疮丙酸杆菌是一种兼性厌氧的革兰氏阳性棒状细菌。痤疮丙酸杆菌主要是共生的并且是在富含油脂的皮肤的营养环境中旺盛生长的人皮肤的大量定殖者。该细菌在大部分载体中不产生症状，但是某些株已表明在寻常痤疮中具有促炎作用。此外，由于其生物膜形成能力，该细菌经常分离自多种整形外科植入物相关感染。

Johnson和Cummins(1972J Bacteriol 109:1047-66)的研究首先揭示了被称为I型和II型的两种不同的痤疮丙酸杆菌表型，其可以基于血清凝集测试和细胞壁糖分析进行区分。后续研究，其中包括recA基因的序列分析显示痤疮丙酸杆菌包括4种明显不同的进化谱系，其被称为IA、IB、II和III型，它们在炎症性质、毒力决定因子的产生以及与多种状况的关系中显示出差异(McDowell等人，2005J Clin Microbiol 43:326-334；McDowell等人，2008J Med Microbiol 57:218-224；Valanne等人，2005Microbiology 151:1369-1379；Lodes等人，2006Microbiology 152:3667-3681)。IA型已进一步被再分成亚型IA1和IA2，并且已使用基于6个管家基因和2个推定毒力基因的多位点序列分型方案(eMLST)识别了IC型(McDowell等人，2012PLoS One 7:e41480)。Scholz等人(2014PLoS ONE 9:el04199)随后为痤疮丙酸杆菌株发展了单位点序列分型(SLST)方案，包括靶位点PPA2385的PCR扩增和DNA测序。Scholz等人描述的公开可用的痤疮丙酸杆菌数据库和与SLST方案有关的SLST分配工具在medbac.dk/slst/pacnes在线可用。痤疮丙酸杆菌株的示例性SLST型包括SLST A1至A24、B1、C1至C4、D1至D3、E1至E9、F1至F10、G1、H1至H5、K1至K14和L1至L6型。Scholz等人中，具体地图1中综述了其它痤疮丙酸杆菌株分型方案，其被称为MLST9、MLST8和核糖核酸型方案。当在本说明书中提及SLST型时，表示根据Scholz等人的SLST分型方案的类型。作为进一步指导但无限制地，WO 2018/073651第20-31页上的表1(作为参考并入本文)列出了Scholz等人的SLST中用于识别痤疮丙酸杆菌株的SLST型的靶位点PPA2385的几个等位序列。

在本文中有用的说明性但非限制性痤疮丙酸杆菌株可以得自例如由LeibnizInstitute DSMZ所维持的公共微生物保藏机构-德国微生物和细胞培养物保藏中心(Inhoffenstr.7B,D-38124Braunschweig，德国，https://www.dsmz.de/catalogues.html)，或美国模式培养物保藏所(ATCC)(10801University Blvd.Manassas,Virginia 20110-2209,USA)或者欧洲细胞培养物保藏中心(ECACC)(健康保护署-PortonDown Salisbury,Wiltshire SP4 0JG,英国)，包括痤疮丙酸杆菌株KPA171202(DSMZ登录号DSM-16379)、痤疮丙酸杆菌defendens亚种(C.acne subsp.defenden)株(登录号ATCC11828)、痤疮丙酸杆菌株(登录号ATCC 6919)、痤疮丙酸杆菌细长亚种(C.acnesubsp.elongatum)株(ECACC登录号NCTC 13655)等。

此外，可以容易地对在本文中有用的几乎任何类型或亚型的痤疮丙酸杆菌株采样并从成年人，优选地健康成年人皮肤，或者从感染的整形外科假体上的痤疮丙酸杆菌生物膜分离。可以采用痤疮丙酸杆菌分离、培养和扩增的任何可用规程。因此，在某些实施方式中，可以通过以下过程形成组合物：从供体受试者，具体地未患有氧化应激相关皮肤病的供体受试者并且优选地具有整体健康皮肤的供体受试者分离和培养一种或多种痤疮丙酸杆菌并将其与其它一种或多种载体混合以形成组合物。

通过实例且无限制地，Holmberg等人2009Clin Microbiol Infect 15:787-95描述了用于从皮肤获得痤疮丙酸杆菌分离株的一个适合的规程。其中，用棉花尖头拭子擦拭人受试者前额的3×3cm区域，用无菌生理盐水润湿并在含有马血(4％)的血液琼脂上(LabMLtd,Heywood,Bury,英国)铺板。将所述板在厌氧条件下(10％H

可以进一步培养痤疮丙酸杆菌细胞并在多种培养基中扩增，包括富营养或基础培养基，优选地富营养培养基，如上述那些。如本领域普通技术人员将理解的，常规优化将允许使用多种类型的培养基。培养基可以补充有多种其它组分，包括糖源。补充组分的一些非限制性实例包括葡萄糖、氨基酸、维生素、脂质、甘油和ATCC微量矿物质补充剂。类似地，可以通过常规实验优化本发明的培养基的其它方面和细胞生长条件。例如，组合物内的pH、温度和组分浓度是可以优化的因素的非限制性实例。可以将用于生长痤疮丙酸杆菌细胞的液体和/或固体培养物放置在本领域中已知和使用的任何培养容器中。在一些实施方式中，分批生长痤疮丙酸杆菌株。在一些实施方式中，在发酵罐中生长菌株。在一些实施方式中，将包含菌株的组合物包装。在某些实施方式中，将包含菌株的组合物包装在肠内注射器或小袋中。在某些实施方式中，可以将菌株冻干。

据先前报道一些痤疮丙酸杆菌株与痤疮有关，有助于痤疮或者是痤疮的病因，而其它株未显示出与痤疮的这种关系(Fitz-Gibbon等人，2013J Invest Dermatol 133:2152-2160；Lomholt等人，2010PLoS ONE 5:el2277)。这些作者还鉴定了痤疮丙酸杆菌导致痤疮的能力的某些遗传和代谢决定因子。类似地，WO 2018/073651描述了可以识别并基于它们的活性亚油酸异构酶(其将顺式-9、顺式-12亚油酸特异性转化为反式-10、顺式-12亚油酸)的表达选择致病性和非致病性痤疮丙酸杆菌株的代谢测定。因此，在某些实施方式中，如本文所预期的痤疮丙酸杆菌株与痤疮无关，不导致痤疮并且不是痤疮的病因。这些痤疮丙酸杆菌株可以容易地分离自健康人皮肤(与受痤疮影响的人皮肤相反)。

将术语“株”很好地理解为种内所使用的低水平分类级别。在微生物学中，通常可以有效地定义株——株由纯培养中的单一分离株的后代组成并且通常由最终来源于初始单一集落的培养物的后代组成；或者作为另外一种选择，通过表型特征或基因型特征或两者，分离株或分离株的组可以不同于相同属或种的其它分离株。如在本发明的实践中所使用的，术语“株”可以与有效术语“分离株”或“克隆”同义。

如本文所使用的术语“活的”与“存活的”同义，并且表示微生物的任何活的完整状态，如有活力地生长或休眠，从该状态它可以在能够支持微生物生长的培养基中增殖和/或自体繁殖。通常，通过本文所预期的组合物所包含的基本所有的痤疮丙酸杆菌细菌可以是活的或存活的。例如，所述组合物中至少50％，优选地至少60％，更优选地至少75％，更优选地至少90％，如至少95％、96％、97％、98％、99％或100％的细菌是存活的，如当在适合的固体培养基上铺板时，能够形成集落。

痤疮丙酸杆菌株能够分泌RoxP。术语“要分泌”或其替代形式，如“分泌”通常是指材料从细胞内部向周质间隙或胞外环境的移动。该术语可以更具体地表示多肽或蛋白从细胞内部穿过质膜的移位，从而可以作为可溶性蛋白将所述蛋白释放到胞外环境(细胞上清液)中。

Holland等人2010(BMC Microbiol 10:230)报道对应于痤疮丙酸杆菌基因IDPPA1939(仅注释为“假想蛋白，对痤疮丙酸杆菌特异”)的蛋白存在于痤疮丙酸杆菌的分泌蛋白质组学中。根据Holland等人，痤疮丙酸杆菌种系型IA、IB、II和III分泌该蛋白，其通过考马斯亮蓝染色凝胶的半定量评价表现出高表达，并且含有信号序列。以Genbank(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)登录号AAT83657.1注释该蛋白。在后续研究中，Allhorn等人(2016Sci Rep 6:36412)显示PPA1939蛋白是分泌酶，其在某些体外条件中显示出抗氧化活性，并且将该蛋白改名为RoxP，代表痤疮丙酸杆菌的自由基

通过实例而非限制地，来自痤疮丙酸杆菌株KPA171202的天然RoxP多肽的氨基酸序列是：

通过实例而非限制地，来自痤疮丙酸杆菌株266的天然RoxP多肽的氨基酸序列(对来自KPA171202的RoxP显示出99.4％的序列同一性)是：

通过实例而非限制地，来自痤疮丙酸杆菌株PMH-7的天然RoxP多肽的氨基酸序列(对来自KPA171202的RoxP显示出97.5％的序列同一性)是：

通过实例而非限制，来自痤疮丙酸杆菌株09-09的天然RoxP多肽的氨基酸序列(对来自KPA171202的RoxP显示出83.2％的序列同一性)是：

通过实例而非限制地，来自痤疮丙酸杆菌株AD24的天然RoxP多肽的氨基酸序列(对来自KPA171202的RoxP显示83％的序列同一性)是：

通过实例而非限制地，来自痤疮丙酸杆菌株09-109的天然RoxP多肽的氨基酸序列与来自KPA171202(SEQ ID NO：1)的RoxP是相同的(即100％的序列同一性)。

因此，提及RoxP表示如在本领域中的这种命名下通常已知的任何痤疮丙酸杆菌株或分离株的RoxP多肽或蛋白。技术人员可以理解上述RoxP序列或在序列数据库中保藏的RoxP序列，或者通过对其它痤疮丙酸杆菌株测序获得的RoxP序列可以是RoxP前体的，其包括在分泌的RoxP蛋白中可以或可以不蛋白水解除去的信号肽。例如，蛋白序列分析工具预测上述SEQ ID NO：1至4中所示的RoxP的氨基酸1至22构成了各个信号肽。技术人员可以进一步理解RoxP的N末端Met残基可以从分泌的RoxP蛋白翻译后除去并因此在所述蛋白中是不存在。技术人员还将理解，某些翻译后修饰如磷酸化、S-巯基化、羟基化、瓜氨酸化或N-糖基化可以发生在细菌细胞中并且本公开涵盖了所有RoxP蛋白，不管它们是否含有任何翻译后修饰。

在其中施用分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株可以内源分泌RoxP。术语“内源的”或“内源地”通常表示细胞天然或自身的并且不来源于细胞以外，如具体地，非通过人的作用引入所述细胞或引入细胞前身的材料，如多肽、蛋白或核酸。例如，内源核酸或基因可以存在于细胞的天然基因组内，并且可以通过细胞的天然基因组编码内源多肽或蛋白。因此，在这些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株天然分泌RoxP，并且不需要且未基因工程化以分泌RoxP。

在其中施用分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的其它实施方式中，痤疮丙酸杆菌株未基因工程化。术语“基因工程的”广泛地表示已经受重组DNA操纵的细胞，从而例如导致其基因组的随机或定向变化或者导致外源核酸分子的暂时或稳定引入。基因工程细胞显示出最初在自然界中未发现的基因组成。因此，优选地，在这些实施方式中，所述细胞不仅未基因工程化以分泌RoxP，而且还不含任何其它人工基因改变。

在某些实施方式中，本发明的美容或药物组合物所包含的痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株单独或一起可以分泌至少1μg RoxP/mL培养基(当在稳定期中测量时)，如例如至少2μg/mL，优选地至少5μg/mL，更优选地至少8μg/mL并且最优选地至少10μg/mL，如至少15μg/mL、至少20μg/mL、至少25μg/mL或至少30μg/mL(当在稳定期中测量时，μg RoxP/mL培养基)。

为了测量分泌到培养基中的RoxP的量，可以在富营养复合培养基如胰蛋白胨大豆肉汤(TSB，例如，可得自Beckton Dickinson,Franklin Lakes,New Jersey)或者脑心浸液肉汤(BHI，例如，可得自Sigma-Aldrich)中，在37℃，无氧条件(如10％H

任何分离、检测和定量方法可以用于测量上清液/培养基中的RoxP的量。这些方法可以包括密度法，包括SDS-PAGE加银或考马斯亮蓝染色、生物化学测定法，包括尤其是酶活力测定、免疫学测定法，如酶联免疫吸附测定(ELISA)和ELISPOT基技术、放射免疫测定(RIA)、免疫印迹等、质谱(MS)分析法，如基质辅助激光解吸/电离飞行时间(MALDI-TOF)MS、色谱法，如高效液相色谱(HPLC)、阳离子或阴离子交换色谱、尺寸排阻色谱(SEC)等。

本发明人还广泛鉴定了天然存在的痤疮丙酸杆菌的RoxP上游序列，包括RoxP启动子，并且鉴别了图8中SEQ ID NO：5至12所示的RoxP上游区的至少8个优势序列的存在。本发明人进一步鉴定了对于实现通过痤疮丙酸杆菌的RoxP的高内源分泌可能是有利的并且因此还可以用于选择潜在高表达痤疮丙酸杆菌株的天然-10和-35盒序列。

因此，在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种的内源RoxP启动子可以包括SEQ ID NO：5至12中的任一项所示的核酸序列。在某些其它实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种的内源RoxP启动子可以包括与SEQ ID NO：5至12中的任一项所示的核酸序列至少约80％，优选地至少约85％，更优选地至少约90％，如至少约91％，至少约92％，至少约93％，或至少约94％，并且甚至更优选地至少约95％，如至少约96％，至少约97％，至少约98％或至少约99％同一的(优选地整体序列同一性)核酸序列。

在某些实施方式中，作为内源RoxP的相对高表达物，I型痤疮丙酸杆菌株可以是优选的。因此，在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种的内源RoxP启动子(具体地，其中所述痤疮丙酸杆菌株是I型株)可以包括如SEQ IDNO：8所示的核酸序列或者与SEQ ID NO：8所示的核酸序列至少约80％，优选地至少约85％，更优选地至少约90％，如至少约91％，至少约92％，至少约93％，或至少约94％，并且甚至更优选地至少约95％，如至少约96％，至少约97％，至少约98％或至少约99％同一的(优选地整体序列同一性)核酸序列。在某些其它实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种的内源RoxP启动子(具体地，其中所述痤疮丙酸杆菌株是I型株)可以包括如SEQ ID NO：9所示的核酸序列或者与SEQ ID NO：9所示的核酸序列至少约80％，优选地至少约85％，更优选地至少约90％，如至少约91％，至少约92％，至少约93％，或至少约94％，并且甚至更优选地至少约95％，如至少约96％，至少约97％，至少约98％或至少约99％同一的(优选地整体序列同一性)核酸序列。在某些其它实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种的内源RoxP启动子(具体地，其中所述痤疮丙酸杆菌株是I型株)可以包括如SEQ ID NO：10所示的核酸序列或者与SEQ ID NO：10所示的核酸序列至少约80％，优选地至少约85％，更优选地至少约90％，如至少约91％，至少约92％，至少约93％，或至少约94％，并且甚至更优选地至少约95％，如至少约96％，至少约97％，至少约98％或至少约99％同一的(优选地整体序列同一性)核酸序列。在某些其它实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种的内源RoxP启动子(具体地，其中所述痤疮丙酸杆菌株是I型株)可以包括如SEQ ID NO：12所示的核酸序列或者与SEQ ID NO：12所示的核酸序列至少约80％，优选地至少约85％，更优选地至少约90％，如至少约91％，至少约92％，至少约93％，或至少约94％，并且甚至更优选地至少约95％，如至少约96％，至少约97％，至少约98％或至少约99％同一的(优选地整体序列同一性)核酸序列。

在某些实施方式中，作为内源RoxP的相对高表达物，III型痤疮丙酸杆菌株可以是优选的。因此，在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种的内源RoxP启动子(具体地，其中所述痤疮丙酸杆菌株是III型株)可以包括如SEQID NO：7所示的核酸序列或者与SEQ ID NO：7所示的核酸序列至少约80％，优选地至少约85％，更优选地至少约90％，如至少约91％，至少约92％，至少约93％，或至少约94％，并且更优选地至少约95％，如至少约96％，至少约97％，至少约98％或至少约99％同一的(优选地整体序列同一性)核酸序列。

在某些实施方式中，作为内源RoxP的相对高表达物，某些II型痤疮丙酸杆菌株可以是优选的。因此，在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种的内源RoxP启动子(具体地，其中所述痤疮丙酸杆菌株是II型株)可以包括如SEQ ID NO：11所示的核酸序列或者与SEQ ID NO：11所示的核酸序列至少约80％，优选地至少约85％，更优选地至少约90％，如至少约91％，至少约92％，至少约93％，或至少约94％，并且甚至更优选地至少约95％，如至少约96％，至少约97％，至少约98％或至少约99％同一的(优选地整体序列同一性)核酸序列。

在其它实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种的内源RoxP启动子可以包含具有选自TGCTATACT或者TGCTACACT，优选地TGCTATACT的序列的-10盒。这种-10盒通常可以存在于相对高RoxP表达的I型(包括IA或IB型)痤疮丙酸杆菌株中，如(例如)图8中举例说明的株。这种-10盒还可以存在于一些II型痤疮丙酸杆菌株中，其因此可以预期以比其它II型痤疮丙酸杆菌株相对更高的水平表达内源RoxP(参见，例如，表2中具有SEQ ID NO：11的RoxP启动子的II型株09-23)。这种-10盒还可以通常存在于相对高RoxP表达SLST A、C、H或K型(包括K5和K1)痤疮丙酸杆菌株中，如例如图8和表2中所示的株(参见II/K1型株09-23)。

因此，在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是I型痤疮丙酸杆菌株，如IA型或IB型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒，所述-10盒具有选自TGCTATACT或TGCTACACT，优选地TGCTATACT的序列。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是IA型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒，所述-10盒具有序列TGCTATACT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是IB型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒，所述-10盒具有序列TGCTACACT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是II型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒，所述-10盒具有序列TGCTACACT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是SLST A、C、H或K型(如K5或K1)痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒，所述-10盒具有选自TGCTATACT或TGCTACACT的序列。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是SLST A型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒，所述-10盒具有序列TGCTATACT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是SLST C型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒，所述-10盒具有序列TGCTATACT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是SLST H型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒，所述-10盒具有序列TGCTACACT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是SLST K5或K1型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒，所述-10盒具有序列TGCTACACT。

在其它实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种的内源RoxP启动子可以包含具有序列TGCTACGCT的-10盒。这种-10盒通常可以存在于相对高RoxP-表达的I型(优选地IA型)痤疮丙酸杆菌株中，如例如图8中举例说明的株523。这种-10盒还可以存在于一些III型痤疮丙酸杆菌株中，其因此可以预期以比其它III型痤疮丙酸杆菌株相对更高的水平表达内源RoxP。这种-10盒通常还可以存在于相对高RoxP表达的SLST G或L型痤疮丙酸杆菌株中，如例如图8中所示的株。

因此，在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是I型痤疮丙酸杆菌株，优选地IA型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒，所述-10盒具有序列TGCTACGCT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是III型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒，所述-10盒具有序列TGCTACGCT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是SLST L或G型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒，所述-10盒具有序列TGCTACGCT。

在其它实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种的内源RoxP启动子可以包含具有选自ACTTCGAT或者ACTTCAAT的序列的-35盒。

这种-35盒通常可以存在于相对高RoxP-表达的I型(包括IA或IB型)痤疮丙酸杆菌株中，如例如图8中举例说明的株。这种-35盒还可以存在于一些II型痤疮丙酸杆菌株中，其因此可以预期以比其它II型痤疮丙酸杆菌株相对更高的水平表达内源RoxP。这种-35盒还可以通常存在于相对高RoxP表达的SLST A、C、G、H或K型(包括K5和K1)痤疮丙酸杆菌株中，如例如图8和表2中所示的株(参见株9-23)。

因此，在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是I型痤疮丙酸杆菌株，如IA型或IB型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-35盒，所述-35盒具有选自ACTTCGAT或ACTTCAAT的序列。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是IA型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-35盒，所述-35盒具有选自ACTTCGAT或ACTTCAAT的序列。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是IB型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-35盒，所述-35盒具有序列ACTTCGAT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是II型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-35盒，所述-35盒具有序列ACTTCGAT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是SLST A、C、G、H或K型(如K5或K1)痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-35盒，所述-35盒具有选自ACTTCGAT或ACTTCAAT的序列。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是SLST A、C、H、K5或K1型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-35盒，所述-35盒具有序列ACTTCGAT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是SLST G型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-35盒，所述-35盒具有序列ACTTCAAT。

在其它实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种的内源RoxP启动子可以包含具有选自TGCTATACT或者TGCTACACT，优选地TGCTATACT的序列的-10盒和具有选自ACTTCGAT或ACTTCAAT的序列的-35盒。由于它们可以提供高内源RoxP表达和分泌，因此这些构造可能是特别有利的。

因此，在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是I型痤疮丙酸杆菌株，如IA型或IB型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒和-35盒，所述-10盒具有选自TGCTATACT或TGCTACACT，优选地TGCTATACT的序列并且所述-35盒具有选自ACTTCGAT或ACTTCAAT的序列。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是IA型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒和-35盒，所述-10盒具有序列TGCTATACT并且所述-35盒具有选自ACTTCGAT或ACTTCAAT的序列。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是IB型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒和-35盒，所述-10盒具有序列TGCTACACT并且所述-35盒具有序列ACTTCGAT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是II型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒和-35盒，所述-10盒具有序列TGCTACACT并且所述-35盒具有序列ACTTCGAT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是SLST A、C、H或K型(如K5或K1)痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒和-35盒，所述-10盒具有选自TGCTATACT或TGCTACACT的序列并且所述-35盒具有选自ACTTCGAT或ACTTCAAT的序列。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是SLST G型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒和-35盒，所述-10盒具有序列TGCTACGCT并且所述-35盒具有序列ACTTCAAT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是SLST A型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒和-35盒，所述-10盒具有序列TGCTATACT并且所述-35盒具有序列ACTTCGAT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是SLST C型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒和-35盒，所述-10盒具有序列TGCTATACT并且所述-35盒具有序列ACTTCGAT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是SLST H型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒和-35盒，所述-10盒具有序列TGCTACACT并且所述-35盒具有序列ACTTCGAT。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种是SLST K5或K1型痤疮丙酸杆菌株，其在内源RoxP启动子中包含-10盒和-35盒，所述-10盒具有序列TGCTACACT并且所述-35盒具有序列ACTTCGAT。

本发明的美容或药物组合物所包含的痤疮丙酸杆菌株可以是任何类型的。在某些实施方式中，本发明的美容或药物组合物分别独立地所包含的痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种可以是I、II或III型痤疮丙酸杆菌。本发明人揭示I型，包括IA和IB子型痤疮丙酸杆菌株显示出RoxP的有利地高内源分泌。因此，在某些优选的实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种可以分别独立地为I型，如IA型或IB型。IA型株可以是特别优选的。III型株的RoxP分泌也是比较高的。因此，在某些优选的实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种可以各自独立地为III型。在某些优选的实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种可以各自独立地为I或III型。在某些优选的实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种可以各自独立地为IA、IB或III型。一些II型株也显示出足够高的RoxP分泌，而多数II型株显示出低于I和III型的RoxP分泌。通过实例，实施例1中的表2显示II型株09-23以与多种I和III型株相当或甚至更高的水平表达RoxP。因此，在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种可以各自独立地为II型。在本文中，高RoxP-表达的II型痤疮丙酸杆菌株可以是特别有利的，因为II型株通常已报道与痤疮无关，即与正常或健康皮肤有关。因此，在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种可以各自独立地为SLST K1型，具体地包含如SEQ ID NO：11所示的内源RoxP启动子的K1型。在某些其它实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种可以分别独立地为IA、IB、II或III型。

本发明的美容或药物组合物所包含的痤疮丙酸杆菌株可以是任何SLST型。本发明人还认识到一些SLST型可以是优选的，例如，由于它们的高RoxP分泌和/或其它特征(例如，与痤疮无关)。因此，在某些实施方式中，本发明的美容或药物组合物所包含的痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种各自独立地可以是SLST A、C、G、H、L或K型(如K5或K1)。SLST A或C型，包括IA型株可以是特别优选的。

在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株可以选自包含附图中所示的株中的任一个，基本由其组成或由其组成的组，如PM H5、09-09、ATCC11828、523、PM H7、12.1.R1、12.1.L1、KPA171202、15.1.R1、09-23、266、21.1.L1、09-323、09-109、11-79、30.2.L1、10-43、AD24，及其组合。

在某些实施方式中，本发明的美容或药物组合物所包含的痤疮丙酸杆菌株可以在好氧和厌氧条件下同等生长。

本发明的美容或药物组合物所包含的痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株单独或一起可以以与所述组合物所期望的美容、预防或治疗效果相容的任意量存在于所述组合物中。在某些实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株单独或一起以每克所述组合物至少100个菌落形成单位(CFU)的量存在于所述组合物中。在其它实施方式中，痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株单独或一起以每克所述组合物至少200，至少500，至少1000，至少5000，至少1×10

在其中施用RoxP或其生物活性变体或片段的某些实施方式中，可以从天然存在的RoxP来源，如从表达RoxP的痤疮丙酸杆菌株分离或纯化所述蛋白或多肽，或者可以通过适合的宿主细胞或者宿主生物表达系统重组生产并从中分离，或者可以通过无细胞转录或翻译重组生产或通过非生物肽合成生产。因此，提及的RoxP或其生物活性变体或片段涵盖了天然、重组、半合成或合成产生的蛋白。

在上下文中，术语“纯化的”不要求绝对纯度。作为替代，它表示蛋白或多肽处于其中其丰度(方便地以质量或重量或浓度表示)相对于其它组分大于原始材料的单独的环境中。单独的环境表示单一媒介，如例如单一溶液、凝胶、沉淀、冻干物等。纯化的蛋白或多肽可以优选地占所述单独环境的蛋白质含量的按重量计≥10％，更优选地≥50％，如≥60％，更优选地≥70％，如≥80％，并且更优选地≥90％，如≥95％，≥96％，≥97％，≥98％，≥99％或甚至100％。例如，可以通过Lowry法(Lowry等人，1951J Biol Chem 193:265)确定蛋白质含量，可选地如Hartree 1972Anal Biochem 48:422-427所述。可以通过SDS-PAGE，在还原或非还原条件下，使用考马斯亮蓝染色或优选地银染来确定肽、多肽或蛋白的纯度。

在实施例部分中给出了分离或纯化痤疮丙酸杆菌分泌的天然RoxP的说明性但非限制性方式。例如，可以采用Allhorm等人2016(如上)的方法。其中，使用硫酸铵沉淀、两步离子交换色谱(阴离子和阳离子)和尺寸排阻的组合将RoxP从痤疮丙酸杆菌上清液纯化至约95％的均一性。更具体地，在这种纯化方法的一个实施方式中，通过以3600g离心10min收集生长至稳定期的痤疮丙酸杆菌；将培养上清液无菌过滤(0.22μm)并利用50％硫酸铵沉淀；将颗粒在10mM Tris-HCl pH 8.8中溶解并透析过夜(MWCO 3,500)；将样品加载到平衡的HiTrap Q FF柱(GE Healthcare，Uppsala，瑞典)上并用50mM NaCl(10mM Tris-HCl pH8.8)洗脱；进行第二次透析(50mM NaOAc-HOAc pH 5.0)；将样品在HiTrap SP FF柱(GEHealthcare)上运行并用100mM NaCl(50mM NaOAc-HOAc pH 5.0)洗脱。最终，使馏分通过50kDa MWCO-过滤器(Amicon Ultra，Ultracel-50K)。在另一个实例中，可以使用痤疮丙酸杆菌上清液的硫酸铵沉淀和晶胶柱上的纯化的组合。在另一个实例中，可以在第一步中使用30kDa的截留分子量并且在第二步中使用3kDa的截留分子量，通过切向流过滤浓缩痤疮丙酸杆菌上清液。

因此，在某些实施方式中，所述组合物可以包含分泌RoxP，优选地内源分泌RoxP的培养的活痤疮丙酸杆菌株的上清液，基本由其组成或由其组成。在某些其它实施方式中，所述组合物可以包含分泌RoxP，优选地内源分泌RoxP的培养的活痤疮丙酸杆菌株的上清液的RoxP富集馏分，基本由其组成或由其组成。术语上清液的“Rox-P富集馏分”表示通过处理上清液所获得的馏分或单独的环境，其中与上清液中RoxP的丰度相比，RoxP的丰度提高。例如，RoxP可以占富集馏分的蛋白质含量的≥50％，如≥60％，更优选地≥70％，如≥80％，并且更优选地≥90％，如≥95％，≥96％，≥97％，≥98％，≥9％或甚至100％。

在某些实施方式中，可以通过适合的宿主细胞或宿主生物表达系统重组产生并从中分离RoxP或其生物活性变体或片段。为此，构建了表达盒或表达载体，其包含含有编码RoxP或其生物活性变体或片段的核酸序列(可选地对于特定宿主中的表达密码子优化的)的核酸分子和可操作地连接至所述核酸分子的启动子。然后，将所述表达盒或表达载体引入适合的宿主细胞或宿主生物，这使得RoxP或其生物活性变体或片段能够被表达并且优选地分泌。编码RoxP的核酸序列是容易获得的。例如，以Genbank登录号JN051668.1注释了编码来自痤疮丙酸杆菌分离株AD26的RoxP的核酸，其在氨基酸水平显示与如SEQ ID NO：1中所示的来自痤疮丙酸杆菌株KPA171202的天然RoxP多肽仅有一个错配。此外，Allhorn等人(2016Sci Rep 6:36412)教导了PCR扩增和分离广泛来自多种痤疮丙酸杆菌分离株的roxP基因的核酸序列的引物。

如本文所使用的，术语“启动子”是指使得基因能够转录的DNA序列。通过RNA聚合酶识别启动子，其随后使转录开始。因此，启动子含有直接结合RNA聚合酶或参与RNA聚合酶招募的DNA序列。启动子序列还可以包括“增强子区”，它是可以与蛋白(即反式作用因子)结合以提高基因簇中的基因转录水平的一个或多个DNA区。增强子尽管通常处于编码区的5’端，但是也可以与启动子序列分开，例如，可以在基因的内含子区内或者在基因编码区的3’端。

“可操作的连接”是其中调控序列和想要表达的序列以允许所述表达的方式连接的连接。例如，如果所述序列之间的连接的性质不：(1)导致引入移码突变，(2)干扰启动子指导ORF转录的能力，(3)干扰ORF从启动子序列转录的能力，则可以称序列如例如启动子和ORF是可操作性连接的。因此，“可操作地连接的”可以表示引入基因构建体，使得表达控制序列如启动子有效控制所关心的编码序列的表达。

启动子可以是组成型或诱导型(条件性)启动子。应理解，组成型启动子是其表达在标准培养条件下恒定的启动子。诱导型启动子是响应于一个或多个诱导信号(inductioncue)的启动子。例如，可以对诱导型启动子进行化学调节(例如，其转录活性受到化学诱导剂的存在或不存在调节的启动子，所述化学诱导剂如醇、四环素、类固醇、金属或其它小分子)或物理调节(例如，其转录活性受到物理诱导剂的存在或不存在调节的启动子，所述物理诱导剂如光或高温或低温)。诱导型启动子也可以间接通过一种或多种转录因子调节，所述转录因子本身直接受化学或物理信号的调节。

所述宿主细胞可以是细菌细胞、真菌细胞，包括酵母细胞、动物细胞或哺乳动物细胞，包括人细胞和非人哺乳动物细胞。例如，所述宿主生物可以是植物有机体，从而RoxP或其生物活性变体或片段的分泌涉及作为整体的植物，或者涉及植物的特定部分，如叶；或者可以是泌乳非人哺乳动物，从而RoxP或其生物活性变体或片段的分泌涉及哺乳动物乳腺产品。

可以用于多肽的小或大规模生产的表达系统(宿主细胞)包括但不限于微生物如细菌(例如，大肠杆菌(Escherichia coli)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersiniaenterocolitica)、布鲁氏菌种(Brucella sp.)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatymphimurium)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)或枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis))，例如，其用重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化；或者真菌细胞(例如，解脂耶罗威亚酵母(Yarrowia lipolytica)、Arxula adeninivorans、甲醇营养型酵母(例如，假丝酵母属(Candida)、汉逊酵母属(Hansenula)、Oogataea、毕赤氏酵母属(Pichia)或球拟酵母属(Torulopsis)的甲醇营养型酵母，例如，巴斯德毕赤氏酵母(Pichiapastoris)、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、Ogataea minuta或甲醇毕赤氏酵母(Pichia methanolica))或者曲霉属(Aspergillus)、木霉属(Trichoderma)、脉孢菌属(Neurospora)、镰刀菌属(Fusarium)或金孢子菌属(Chrysosporium)的丝状真菌，例如，黑曲霉(Aspergillus niger)、里氏木霉(Trichoderma reesei)，或者酵母菌属(Saccharomyces)或裂殖酵母(Schizosaccharomyces)的酵母，例如，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe))，例如，其用重组真菌表达载体转化。有用的表达系统还包括用含有核酸分子的重组病毒表达载体(例如，杆状病毒)感染的昆虫细胞系统(例如，来源于果蝇(Drosophila melanogaster)的细胞，如Schneider 2细胞，来源于粘虫草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)的细胞系，如Sf9和Sf21细胞，或者来源于甘蓝银纹夜蛾粉纹夜蛾(trichoplusia ni)的细胞，如HighFive细胞)，和用重组病毒表达载体(例如，烟草花叶病毒)感染或者用重组质粒表达载体(例如，Ti质粒)转化的植物细胞系统。哺乳动物表达系统包括人和非人哺乳动物细胞，如啮齿类细胞、灵长类细胞或人细胞。哺乳动物细胞，如人或非人哺乳动物细胞，可以包括原代细胞、第二代、第三代等细胞，或者可以包括永生细胞系，包括克隆细胞系。可以在组织培养中容易地维持和转化优选的动物细胞。人细胞的非限制性实例包括人HeLa(宫颈癌)细胞系。在组织培养实践中常见的其它人细胞系尤其包括人胚肾293细胞(HEK细胞)、DU145(前列腺癌)、Lncap(前列腺癌)、MCF-7(乳腺癌)、MDA-MB-438(乳腺癌)、PC3(前列腺癌)、T47D(乳腺癌)、THP-1(急性髓细胞性白血病)、U87(成胶质细胞瘤)、SHSY5Y(成神经细胞瘤)或者Saos-2细胞(骨癌)。灵长类细胞的非限制性实例是Vero(非洲绿猴Chlorocebus肾上皮细胞系)细胞和COS细胞。啮齿类细胞的非限制性实例是大鼠GH3(垂体瘤)、CHO(中国仓鼠卵巢)、PC12(嗜铬细胞瘤)细胞系或者小鼠MC3T3(胚胎颅盖细胞)细胞系。在如本文所指明的基因工程之前，这些细胞可以获得自多种商品化来源和研究资源结构，如例如美国模式培养物保藏所(Rockville，MD)。多种启动子可以适合于哺乳动物细胞中的表达，例如，金属硫蛋白启动子、腺病毒晚期启动子或巨细胞病毒启动子。用于异源蛋白质表达的这些工具和方法是本领域中通常熟知的。可以优选细菌宿主表达系统，如大肠杆菌或酵母表达系统，如巴斯德毕赤氏酵母。根据表达系统或者化学或酶促表达后调控，RoxP或其生物活性变体或片段可以具有一个或多个多肽链的共表达或表达后型修饰，如但不限于糖基化、乙酰化、磷酸化、磺化、甲基化、泛素化、信号肽去除、N末端Met去除等。还预见了非天然存在的翻译后修饰。

术语RoxP的“变体”涵盖了其氨基酸序列与RoxP的氨基酸序列，如与天然或野生型痤疮丙酸杆菌RoxP的氨基酸序列基本相同(即，基本上但非全部相同)的蛋白或多肽，例如，至少约80％相同，或者至少约83％相同，或者至少约85％相同，例如，优选地至少约90％相同，例如，至少91％相同，至少92％相同，更优选地至少约93％相同，例如，至少94％相同，甚至更优选地至少约95％相同，例如，至少96％相同，更优选地至少约97％相同，例如，至少98％相同并且最优选地至少99％相同。优选地，当在序列对比中查询变体和RoxP的完整序列时，变体可以显示这种与RoxP的同一性程度(即整体序列同一性)。更优选地，所述变体可以显示出与以上SEQ ID NO：1中所示的痤疮丙酸杆菌株KPA171202的RoxP或者与缺少N末端信号肽的SEQ ID NO：1的所述RoxP的一部分的至少约80％，或者至少约83％，或者至少约85％，或者至少约90％，或者至少约91％，或者至少约92％，或者至少约93％，或者至少约94％，或者至少约95％，或者至少约96％，或者至少约97％，或者至少约98％，或者至少约99％的序列同一性。

可以使用适合于进行序列对比的算法和本身已知的序列同一性确定来确定如本文所设想的蛋白或多肽或核酸之间的序列同一性。示例性但非限制性的算法包括基于基本局部比对搜索工具(BLAST)的那些，其最初由Altschul等人，1990(J Mol Biol 215:403-10)所述，如Tatusova and Madden 1999所述的“Blast 2序列”算法(FEMS Microbiol Lett174:247-250)，例如，使用公开的缺省设置或其它适合的设置(如，例如，对于BLASTN算法：空位开放罚分(cost to open a gap)＝5，空位扩展罚分(Cost to extend a gap)＝2，错配罚分(penalty for a mismatch)＝-2，匹配奖分(reward for a match)＝1，gap x_dropoff＝50，期望值＝10.0，字长＝28；或者对于BLASTP算法：基质＝Blosum62(Henikoff等人，1992,Proc.Natl.Acad.Sci.,89:10915-10919)，空位开放罚分＝11，空位扩展罚分＝1，期望值＝10.0，字长＝3)。如本文所设想的序列同一性可以优选地表示整体序列同一性，即由所比较的蛋白、多肽或核酸的完整序列比对所计算的序列同一性。确定特定氨基酸序列和所查询的多肽的氨基酸序列之间的同一性百分比的实例程序将需要使用Blast 2序列(B12seq)算法，使用适合的算法参数比对两条氨基酸序列，所述算法作为网络应用或者作为独立可执行的程序(BLAST 2.2.31+版)在NCBI网址(www.ncbi.nlm.nih.gov)上可得。适合的算法参数的实例包括：基质＝Blosum62，空位开放罚分＝11，空位扩展罚分＝1，期望值＝10.0，字长＝3)。如果两条所比较的序列共有同源性，则输出将作为比对序列显示出具有同源性的那些区域。如果两条所比较的序列不共有同源性，则输出将不会出现比对序列。一旦比对，则通过对其中在两条序列中存在的相同氨基酸残基的位置数计数来确定匹配数。通过将匹配数除以所查询的多肽的长度，然后将所得值乘以100来确定同一性百分比。同一性百分比值可以但不需要圆整至最接近的十分位。例如，78.11、78.12、78.13和78.14可以向下圆整至78.1，而78.15、78.16、78.17、78.18和78.19可以向上圆整至78.2。还将注意，如通过B12seq所输出的，每个比对节段的详细视图已方便地包括了同一性百分比。

RoxP的变体可以但不需要是RoxP的同源物(例如，直系同源或旁系同源)。如本文所使用的，术语“同源性”通常表示来自相同或不同分类单元的两个大分子之间的结构相似性，其中所述相似性是由于共有祖先所造成的。

RoxP的变体可以相对于(即相比于)相应RoxP蛋白或多肽包含一个或多个氨基酸添加、缺失或替换。

例如，RoxP的变体(替换变体)可以相对于(即相比于)相应RoxP蛋白或多肽包含多至30(例如，不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25或30)个保守氨基酸替换；或者RoxP的变体(替换变体)可以相对于相应RoxP蛋白或多肽包含多至30(例如，不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25或30)个非保守氨基酸替换；或者RoxP的变体(替换变体)可以相对于相应RoxP蛋白或多肽包含多至30(例如，不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25或30)个组合的保守和非保守氨基酸替换。保守氨基酸替换是一种氨基酸对具有类似特征的另一种氨基酸的替换。保守氨基酸替换包括下列组中的替换：缬氨酸、丙氨酸和甘氨酸；亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸；天冬氨酸和谷氨酸；天门冬酰胺和谷氨酰胺；丝氨酸、半胱氨酸和苏氨酸；赖氨酸和精氨酸；和苯丙氨酸和酪氨酸。非极性疏水性氨基酸包括丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和甲硫氨酸。极性中性氨基酸包括甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天门冬酰胺和谷氨酰胺。带正电荷(即碱性)氨基酸包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸。带负电荷(即酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。上述极性、碱性或酸性基团的一个成员被同组另一个成员的任何替换可以认为是保守替换。相反，非保守替换是一种氨基酸对具有不同特征的另一种氨基酸的替换。

作为另外一种选择或者另外，RoxP的变体(缺失变体)可以相对于相应RoxP蛋白或多肽缺少多至30(例如，不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25或30)个氨基酸。当缺失两个或更多个氨基酸时，这些可以是非邻接的或者两个或更多个或者全部缺失的氨基酸可以在相应RoxP蛋白或多肽中是邻接的。

术语RoxP的“片段”通常是指RoxP蛋白或多肽的N-末端和/或C-末端缺失或截短形式。该术语涵盖了通过任何机制所产生的片段，如但不限于通过全长RoxP蛋白或多肽的截短形式的异源表达，或者通过全长RoxP蛋白或多肽的体内或体外物理、化学或酶促蛋白水解。无限制地，RoxP的片段可以代表所述RoxP蛋白或多肽的至少约50％(按氨基酸数计)，例如，至少约60％，或至少约70％，或至少约80％，或至少约90％，或至少约91％，或至少约92％，或至少约93％，或至少约94％，或至少约95％，或至少约96％，或至少约97％，或至少约98％，或至少约99％的邻接氨基酸序列。例如，RoxP的片段可以包括相应全长RoxP蛋白或多肽的至少约80，或至少约90，或至少约100，或至少约110，或至少约120，或至少约130，或至少约140，或至少约150，或至少约155个连续氨基酸的序列。在某些实施方式中，RoxP片段可以是与相应全长RoxP蛋白或多肽相比，N-末端和/或C-末端截短1至约20个氨基酸，如1至约15个氨基酸，或者1至约10个氨基酸，或者1至约5个氨基酸。

在某些实施方式中，RoxP的片段可以包含对应于SEQ ID NO：1所示的天然RoxP蛋白的位置66-83的氨基酸邻接延伸，基本由其组成或由其组成。例如，RoxP的片段可以包括对应于SEQ ID NO：1中所示的天然RoxP蛋白的位置66-83的氨基酸邻接延伸，并且还可以包括：a)在RoxP蛋白中N-末端紧邻所述延伸的1-5或6-10或11-15或16-20或21-30或31-50个邻接氨基酸，和/或b)在RoxP蛋白中C-末端紧邻所述延伸的1-5或6-10或11-15或16-20或21-30或31-50个邻接氨基酸。例如，RoxP的片段可以包含氨基酸VRADGYQESMVTRVLDDK(SEQID NO：20)的邻接延伸，基本由其组成或由其组成。例如，RoxP的片段可以是在本文中表示为“RoxP-肽1”的肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：20中所示。值得注意地，表明RoxP-肽1显示出抗氧化活性。

在某些实施方式中，RoxP的片段可以包含对应于SEQ ID NO：1所示的天然RoxP蛋白的位置128-140的氨基酸邻接延伸，基本由其组成或由其组成。例如，RoxP的片段可以包括对应于SEQ ID NO：1中所示的天然RoxP蛋白的位置128-140的氨基酸邻接延伸，并且还可以包括：a)在RoxP蛋白中N-末端紧邻所述延伸的1-5或6-10或11-15或16-20或21-30或31-50个邻接氨基酸，和/或b)在RoxP蛋白中C-末端紧邻所述延伸的1-5或6-10或11-15或16-20或21个邻接氨基酸。例如，RoxP的片段可以包含氨基酸RTLSYCAYPHYVN(SEQ ID NO：21)的邻接延伸，基本由其组成或由其组成。例如，RoxP的片段可以是在本文中表示为“RoxP-肽2”的肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：21中所示。值得注意地，表明RoxP-肽2显示出抗氧化活性。

对任何蛋白或多肽的“片段或变体”或者“变体或片段”的提及涵盖了这些蛋白或多肽的变体的片段和这些蛋白或多肽的片段的变体。

术语“生物活性的”与术语如“功能活性的”或“功能性的”是可互换的，其表示片段和/或变体至少部分保留了相应RoxP蛋白或多肽的生物活性或预期功能。对蛋白或多肽或肽的“活性”的提及通常可以涵盖所述蛋白或多肽的生物活性的任何一个或多个方面，如但不限于例如细胞、组织、器官或生物内的其生化活性、酶活力、信号转导活性、相互作用活性、配体活性和/或结构活性中的任何一个或多个方面。通过优选实例，RoxP的生物活性片段或变体应至少部分保留相应RoxP蛋白或多肽的抗氧化活性。

优选地，与相应RoxP蛋白或多肽相比，RoxP的功能活性片段或变体可以保留至少约20％，例如，至少约25％，或者至少30％，或者至少约40％，或者至少约50％，例如，至少60％，更优选地至少约70％，例如，至少80％，然而更优选地至少约85％，更优选地至少约90％，并且最优选地至少约95％或甚至约100％的抗氧化活性或功能性。在某些实施方式中，与相应RoxP蛋白或多肽相比，RoxP的功能活性片段或变体甚至可以显示出更高的抗氧化活性或功能性，例如，与相应RoxP蛋白或多肽相比，可以显示出至少约100％，或者至少约150％，或者至少约200％，或者至少约300％，或者至少约400％，或者至少约500％的抗氧化活性或功能性。通过其中可以在测定中以定量输出或信号容易地测量抗氧化活性的实例，RoxP的功能活性片段或变体可以产生通过相应RoxP蛋白或多肽所产生的信号的至少约20％，或者至少约25％，或者至少30％，或者至少约40％，或者至少约50％，或者至少60％，更优选地至少约70％，或者至少80％，或者至少约85％，或者至少约90％，或者至少约95％，或者至少约100％，或者至少约150％，或者至少约200％，或者至少约300％，或者至少约400％，或者至少约500％的信号。在实施例，如实施例2和3(ABTS自由基阳离子测定)、实施例4(对人细胞中对体外百草枯所引起的氧化伤害的保护)和实施例7-11(对重建人表皮对UV或臭氧所引起的氧化伤害的保护)中描述了抗氧化活性的代表性但非限制性定量测试并且可以在该背景中使用所述测试。ABTS自由基阳离子测定可以是特别直接的并且可以是优选的。

本发明的美容或药物组合物可以以与所述组合物所期望的美容、预防或治疗效果相容的任意的量或数量包含RoxP或其生物活性变体或片段。在一些实施方式中，具体地，所述药物组合物可以包含至少1×10

在某些实施方式中，包含一种或多种如本文所教导的分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的美容或药物组合物还可以包含如本文所教导的RoxP或其生物活性变体或片段。这些组合物将允许如本文所公开的两种活性剂的共施用。在某些实施方式中，可以作为混合产品或组分的试剂盒提供包含一种或多种如本文所教导的分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的美容或药物组合物和包含RoxP或其生物活性变体或片段的美容或药物组合物，以用于各个活性剂的同时、单独或连续(以任何顺序)施用。

如在整个说明书中所使用的，术语“疗法”或“治疗”表示病理状况，如疾病或病症的一种或多种症状或可测量标志物的减轻或可测量的减轻。可测量的减轻包括可测量的症状或标志物的任何统计学显著的减少。通常，所述术语涵盖了治愈性治疗和针对减少所述疾病的症状和/或减缓所述疾病的发展的治疗两者。所述术语涵盖了已出现的病理状况的治疗性治疗以及预防性或预防措施两者，其中目标是预防或降低病理状况的发病概率。有益或所期望的临床结果包括(但不限于)疾病的预防、发病率的降低、与疾病有关的症状的减轻、疾病程度的降低、疾病的稳定、疾病发展的延迟或减缓、疾病的改善或减轻或其组合。在某些实施方式中，所述术语可以与治疗性治疗有关。在某些其它实施方式中，所述术语可以与预防性治疗有关。症状缓解期间，慢性病理状况的治疗还可以被认为构成了治疗性治疗。根据情况，在本发明的背景中，该术语可以涵盖离体或体内治疗。

术语“受试者”通常并且优选地表示人，但是还可以涵盖对非人动物的提及，优选地，恒温动物，更优选地哺乳动物，如(例如)非人灵长类、啮齿类、犬、猫、马、羊、猪等。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如，哺乳动物，如非人灵长类，具体地高等灵长类、绵羊、狗、啮齿类(例如，小鼠或大鼠)、豚鼠、山羊、猪、猫、兔、牛和非哺乳动物，如鸡、两栖动物、爬行动物等。在某些实施方式中，所述受试者是非人动物。在某些实施方式中，所述受试者是非人哺乳动物。在某些实施方式中，所述受试者是转基因非人动物或非人哺乳动物。在优选的实施方式中，所述受试者是人。在其它实施方式中，所述受试者是实验动物或动物疾病模型。该术语不表示具体的年龄或性别，并且具体地包括新生儿、儿童、青年和成年，包括老年，无论是雄性或雌性。

在与治疗或预防干预有关的方面和实施方式中，术语“受试者”和“患者”可以可互换地使用。如本文所教导的需要预防或治疗疾病的适合的受试者或患者包括会受益于疾病治疗的那些或者其中将预防所述疾病的那些。这些受试者或患者无限制地包括向医师提供的用于筛选所述疾病的患者，向医师提供的具有指示所述疾病的症状和病征的患者，诊断患有所述疾病的患者，倾向于感染或出现所述疾病的患者，已接受或正在经历所述疾病的治疗的患者和如本文所教导的疾病处于缓解的患者。在与美容治疗有关的方面和实施方式中，不表示受试者中病理状况存在的术语“受试者”可以比术语“患者”优选。短语，如“需要”某种干预(如给定状况的治疗)的“受试者”包括会受益于所述状况的治疗的受试者。可以通过多种诊断或益处-评价方法，包括说明书其它处所描述的方法和用途推断受试者接受给定干预，如治疗的需要的存在或不存在。

如本文所使用的“氧化应激相关皮肤病”广泛地表示与有利于皮肤组织或细胞中的促氧化剂，从而导致皮肤中的组织或细胞损坏的自由基，如具体地活性氧(ROS)或者活性氮(RNS)的产生和去除之间的失调有关，对其有帮助或由其所造成或所产生的疾病或疾病症状。ROS的非限制性实例包括超氧化物阴离子、氢过氧化物阴离子、羟基自由基、单线态氧、次氯酸根阴离子、叔丁基过氧化氢等。RNS的非限制性实例包括一氧化氮(NO)、过氧亚硝基(ONOO

在某些实施方式中，氧化应激相关皮肤病选自包含光化性角化病(AK)、基底细胞癌(BCC)、鳞状细胞癌(SCC)、头皮屑、皮脂溢性皮炎、痤疮、炎症、皮炎、银屑病、湿疹、红斑痤疮、荨麻疹和白癜风的组，基本由其组成的组或由其组成的组。在某些优选的实施方式中，氧化应激相关皮肤病是AK。在其它优选实施方式中，氧化应激相关皮肤病是BCC。在其它优选实施方式中，氧化应激相关皮肤病是SCC。在其它优选实施方式中，氧化应激相关皮肤病是头皮屑。在其它优选实施方式中，氧化应激相关皮肤病是皮脂溢性皮炎。

任何这些疾病可以包括除与氧化应激有关的那些以外的要素、方面或过程。在某些实施方式中，本发明的预防用途或方法治疗、解决了任何这些疾病的氧化应激要素、方面或过程或者对它们起作用，例如，它们改善或恢复了皮肤组织或细胞中的氧化还原平衡。

如本文所教导的美容用途或方法通常包括以单一或多个剂量向受试者皮肤施用美容有效量的如本文所教导的美容组合物，即足以引起与受试者中皮肤衰老的预防或降低有关的美容效果的量，即通过化妆师或美容师所探求的。如本文所教导的预防或治疗性用途或方法通常包括向受试者皮肤施用预防或治疗有效量的如本文所教导的药物组合物。术语“治疗有效量”通常表示通过从业医生，如医生、临床医师、外科医生、兽医或研究人员所探求的，以单一或多个剂量，足以在受试者中引起药理学效果或药物反应的量，其尤其可以包括治疗疾病的症状的减轻。术语“预防有效量”通常表示通过从业医生所探求的，以单一或多个剂量，足以在受试者中引起预防效果，如疾病发病的抑制或延迟的量。可以通过化妆师，适当考虑患者的年龄和皮肤状况来确定本发明的组合物的适当的美容有效剂量。可以通过有资格的医师，适当考虑疾病的性质和严重程度以及患者的年龄和状况来确定本发明的组合物的适当的预防或治疗有效剂量。要施用的本文所述的组合物的有效量可以基于多种不同因素并且可以通过常规实验，由本领域的技术人员确定。可以考虑的几个非限制性因素包括活性成分的生物活性、活性成分的性质、要治疗的受试者的特征等。

术语“要施用”通常表示分配或应用，并且通常包括向组织的体内施用和离体施用两者，优选地体内施用。通常，可以全身或局部施用组合物。考虑到本发明的美容、预防或治疗性治疗的性质以及活性成分的性质，本发明的组合物可以优选地配置用于向受试者皮肤的局部施用。

如通常在美容和医学领域中使用的术语“局部施用”表示组合物直接应用于身体部分。具体地，在本发明的情况下，该术语表示对受试者皮肤，更具体地，对受试者皮肤表面，并且更具体地，对其中探求美容或药理学效果的受试者皮肤表面的部分、区或区域的局部施用。局部施用通常不意欲且不引起任何全身性作用。

除一种或多种活性剂之外，本文所公开的美容或药物组合物通常包含一种或多种美容或药物可用的载体。

如本文所使用的，术语“载体”或“赋形剂”是可互换使用的并且广泛地包括任何和所有溶剂、稀释剂、缓冲剂(如，例如，中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水或可选地Tris-HCl、乙酸盐或磷酸盐缓冲剂)、增溶剂(如，例如，

含水的、粉末或油基础成分或增稠剂还可以用于向皮肤局部施用的制剂。这些成分的实例包括多种羟基化化合物，如单体二醇，例如，丙二醇、乙醇、甘油和丁二醇、聚合物保湿剂，如聚甘油甲基丙烯酸酯、棕榈酸酯和硬脂酸酯的衍生物、脂肪酸的甘油三酯、羊毛脂、植物或矿物油和蜡。

在某些实施方式中，包含活痤疮丙酸杆菌株的组合物还可以包含用于稳定细菌的介质。这些介质可以包括例如纯水、磷酸盐缓冲盐水(PBS)、蛋白胨(例如，来自酪蛋白或肉的胰蛋白酶酶解或酸解蛋白胨)、适合的生长培养基的稀释或未稀释的形式或它们的任意组合。在一些实施方式中，细菌组合物中蛋白胨的百分比为约0.05％w/v或约0.1％w/v，并且可以在0.005％w/v至1％w/v或者0.05％w/v至1％w/v的范围内。在一些实施方式中，蛋白胨的百分比小于0.005％w/v或者大于1％w/v或者为约0.25％w/v。在其它实施方式中，除蛋白胨以外或者替代蛋白胨使用适合的生长培养基。

在某些实施方式中，组合物可以包含缓冲液。缓冲液可以帮助稳定组合物的pH。在实施方式中，pH在4.5至8之间。例如，pH可以为约4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0，包括中间的任何值。在一些实施方式中，pH为约7.0。缓冲剂的非限制性实例包括ACES、乙酸盐、ADA、氢氧化铵、AMP(2-氨基-2-甲基-1-丙醇)、AMPD(2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇)、AMPSO、BES、BICINE、bis-tris、BIS-TRIS丙烷、硼酸盐、CABS、二甲基胂酸盐、CAPS、CAPSO、碳酸盐(pK1)、碳酸盐(pK2)、CHES、柠檬酸盐(pK1)、柠檬酸盐(pK2)、柠檬酸盐(pK3)、DIPSO、EPPS、HEPPS、乙醇胺、甲酸盐、甘氨酸(pK1)、甘氨酸(pK2)、甘氨酰甘氨酸(pK1)、甘氨酰甘氨酸(pK2)、HEPBS、HEPES、HEPPSO、组氨酸、肼、咪唑、苹果酸盐(pK1)、苹果酸盐(pK2)、马来酸盐(pK1)、马来酸盐(pK2)、MES、甲胺、MOBS、MOPS、MOPSO、磷酸盐(pK1)、磷酸盐(pK2)、磷酸盐(pK3)、哌嗪(pK1)、哌嗪(pK2)、哌啶、PIPES、POPSO、丙酸盐、吡啶、焦磷酸盐、琥珀酸盐(pK1)、琥珀酸盐(pK2)、TABS、TAPS、TAPSO、牛磺酸(AES)、TES、三甲基甘氨酸(tricine)、三乙醇胺(TEA)和Trizma(tris)。

在一些实施方式中，组合物可以包含增稠剂。增稠剂的非限制性实例包括羟乙基纤维素(例如，

在一些实施方式中，组合物可以包含溶剂或表面活性剂。溶剂的非限制性实例包括水、乙醇、甲苯、二氯甲烷、异丙醇、正丁醇、蓖麻油、乙二醇单乙醚、二甘醇一丁醚、二甘醇单乙醚、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺和四氢呋喃。i)阴离子表面活性剂，如脂肪酸的金属或链烷醇胺盐，例如月桂酸钠和油酸三乙醇胺；烷基苯砜，例如三乙醇胺十二烷基苯磺酸盐；烷基硫酸盐，例如月桂基硫酸钠；烷基醚硫酸盐，例如月桂基醚硫酸钠(2至8EO)；磺基丁二酸盐，例如磺基琥珀酸二辛酯钠；单酸甘油酯硫酸盐，例如单硬脂酸甘油酯单硫酸钠；异硫代硫酸盐，例如异硫代硫酸钠；甲基牛磺酸盐，例如胰加漂T(Igepon T)；酰基肌氨酸盐，例如十四烷基肌氨酸钠；酰基肽，例如Maypon和lamepon；酰基乳酸盐、聚烷氧基化醚乙醇酸盐，例如十三烷醇聚醚-7羧酸；磷酸盐，例如，二月桂基磷酸钠；阳离子表面活性剂，如胺盐，例如，sapamin盐酸盐；季铵盐，例如，Quaternium 5、Quaternium 31和Quaternium 18；两性表面活性剂，如咪唑化合物，例如Miranol；N-烷基氨基酸，如椰油氨基丙酸钠和天冬酰胺衍生物；甜菜碱，例如，椰油酰氨基丙基甜菜碱；非离子表面活性剂，如脂肪酸链烷醇酰胺，例如油酸乙醇酰胺；酯类或多元醇类，例如Span；聚甘油酯，例如，用脂肪酸和一个或几个OH基团酯化的聚甘油酯；聚烷氧基化衍生物，例如，聚氧：聚氧乙烯硬脂酸酯；醚，例如，聚氧乙烯十二烷基醚；酯醚，例如，

在某些实施方式中，组合物可以包含润肤剂。润肤剂的非限制性实例包括十八烷醇、甘油单蓖麻油酸酯、单硬脂酸甘油酯、丙-1,2-二醇、丁-1,3-二醇、貂油、鲸蜡醇、异丙基异硬脂酸酯、硬脂酸、棕榈酸异丁酯、异鲸蜡基硬脂酸酯、油醇、异丙基月桂酸酯、己基月桂酸酯、癸基油酸酯、十八-2-醇、异鲸蜡醇、鲸蜡醇十六酸酯、二甲基聚硅氧烷、二正丁基癸二酸酯、豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、异丙基硬脂酸酯、硬脂酸丁酯、聚乙二醇(polthyleneglycol)、三甘醇、羊毛脂、芝麻油、椰子油、花生油、蓖麻油、乙酰化羊毛脂醇、石油、矿物油、豆蔻酸丁酯、异硬脂酸、棕榈酸、异丙基亚油酸酯、月桂基乳酸酯、十四烷基乳酸酯、癸基油酸酯、十四烷基豆蔻酸酯。

在某些实施方式中，组合物可以包含保湿剂。保湿剂的非限制性实例包括甘油、山梨糖醇、2-吡咯烷酮-5-羧酸钠、可溶性胶原、邻苯二甲酸二丁酯或明胶。

在一些实施方式中，组合物可以包含收敛剂。收敛剂的非限制性实例包括山金车花或其提取物、低级烷基醇、金缕梅、硼酸、乳酸、甲醇(methol)、樟脑、苯酚磺酸锌、醋酸铝、硫酸铝和氯化锌或硫酸锌。

在一些实施方式中，组合物可以包含颜料。颜料的非限制性实例包括二氧化钛、云母、铁氧化物、钡湖(barium lake)、钙湖(calcium lake)、铝湖(aluminum lake)、氯氧化铋、锆湖(zirconium lake)和氧化钙。

在一些实施方式中，组合物包含着色剂。着色剂的非限制性实例包括紫草素、β-胡萝卜素、红辣椒、红曲霉、红花红、红花黄、红甘蓝色素、紫薯色素、番茄红素、可可豆色素、葡萄色素、胭脂红、紫胶色素、甜菜红、氧化苏木精、Red.No.215、Red.No.218、Red.No.223、Red.No.225、Orange No.201、Orange No.206、Yellow No.201、Green No.202和PurpleNo.201、Red.No.2、Red.No.3、Red.No.102、Red.No.104(1)、Red.No.105(1)、Red.No.106、Yellow No.4、Yellow No.5、Green No.3、Blue No.1、Blue No.2、Red.No.201、Red.No.213、Red.No.214、Red.No.227、Red.No.230(1)、Red.No.230(2)、Red.No.231、Red.No.232、Orange No.205、Orange No.207、Yellow No.202(1)、Yellow No.202(2)、Yellow No.203、Green No.201、Green No.204、Green No.205、Blue No.202、Blue No.203、Blue No.205和Brown No.201。

在一些实施方式中，组合物可以包含UV-A和UV-B辐照过滤剂、遮光剂、自由基阻断剂、维生素提取物或抗氧化剂中的任何一个或多个。

在一些实施方式中，组合物可以包含香料。

本文进一步描述了可以包含在本文所公开的组合物中的赋形剂。

在某些优选的实施方式中，一种或多种增稠剂可以选自由以下组成的组：卡波姆、丙烯酸酯/C 10-30烷基丙烯酸酯交联聚合物、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、黄原胶、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素醋酸丁酸酯、羧甲基羟乙基纤维素、纤维素胶、醋酸丙酸纤维素羧酸酯、十六基羟乙基纤维素、乙基纤维素、水解的纤维素胶、羟丁基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、甲基乙基纤维素、甲基羟乙基纤维素、微晶纤维素、纤维素硫酸钠、丙烯酸聚合物、丙烯酸酯交联聚合物-4、聚丙烯酸酯-1交联聚合物、丙烯酸酯/steareth-20甲基丙烯酸酯共聚物、丙烯酸酯/beheneth-25甲基丙烯酸酯共聚物及其组合。

在某些优选的实施方式中，一种或多种UV过滤剂可以选自由以下组成的组中：2-苯基-3H-苯并咪唑-5-磺酸和/或其盐；亚苯基-1,4-双-(2-苯并咪唑基)-3,3’-5,5’-四磺酸及其盐(例如(CTFA)：苯基二苯并咪唑四磺酸二钠)；1,4-二(2-氧-10-磺基-3-冰片烯(bornyliden)-甲基)苯及其盐；4-羟基-2-甲氧基-5-(氧-苯甲基)苯磺酸及其盐(例如(CTFA)：苯甲酮-4、苯甲酮-5)；4-(2-氧-3-冰片烯甲基)苯磺酸及其盐；2-甲基-5-(2-氧-3-冰片烯甲基)磺酸及其盐；对苯二亚甲基二樟脑磺酸；和其组合。

也适合于保护免受UV辐照的是UVA过滤剂物质和/或至少一种UVB过滤剂物质、无机颜料、双间苯二酚基三嗪衍生物、2,4-双-{[4-(2-乙基己基氧基)-2-羟基]苯基}-6-(4-甲氧基苯基)-1,3,5-三嗪二辛基丁酰胺基三嗪酮、辛基三嗪酮、双间苯二酚基三嗪衍生物、2,4-双-{[4-(3-磺酸基)-2-羟基-丙氧基)-2-羟基]苯基}-6-(4-甲氧基苯基)-1,3,5-三嗪钠盐、2,4-双-{[4-(3-(2-丙氧基)-2-羟基-丙氧基)-2-羟基]苯基}-6-(4-甲氧基苯基)-1,3,5-三嗪、2,4-双-{[4-(2-乙基-己氧基)-2-羟基]苯基}-6-[4-(2-甲氧基乙基-羧基)-苯氨基]-1,3,5-三嗪、2,4-双-{[4-(3-(2-丙氧基)-2-羟基丙氧基)-2-羟基]苯基}-6-[4-(2-乙基-羧基)-苯氨基]-1,3,5-三嗪、2,4-双-({[4-(2-乙基-己氧基)-2-羟基]苯基}-6-1-甲基-吡咯-2-基)-1,3,5-三嗪、2,4-双-{[4-三(三甲基硅氧烷基-甲硅烷基丙氧基)-2-羟基]苯基}-6-(4-甲氧基苯基)-1,3,5-三嗪、2,4-双-{[(-甲基丙烯基氧基2”)-2-羟基4-]苯基}-6-(4-甲氧基苯基)-1,3,5-三嗪和2,4-双-{[4-(1’,1’,1’,3’,5’,5’,5’-七甲基甲硅烷氧基-2”-甲基丙氧基)-2-羟基]苯基}-6-(4-甲氧基苯基)-1,3,5-三嗪、双咪唑化物、苯基苯并咪唑磺酸、对苯二亚甲基二樟脑磺酸、4-(2-氧-3-冰片烯甲基)苯磺酸、2-甲基-5-(2-氧-3-冰片烯甲基)磺酸、1,4-二(2-氧-10-磺基-3-冰片烯甲基)苯、3-苯亚甲基樟脑衍生物、4-氨苯甲酸衍生物、苯甲酮衍生物、水杨酸高薄荷酯、2-乙基己基-2-氰基-3,3-二苯基丙烯酸酯、2-乙基己基-2-羟基苯甲酸酯、4-甲氧基肉桂酸(2-乙基己基)酯、胡莫柳酯、氰双苯丙烯酸辛酯、水杨酸辛酯、甲氧基肉桂酸辛酯、对甲氧基肉桂酸异戊酯、(3-(4-(2,2-双-乙氧基羰基乙烯基)苯氧基)丙烯基)-甲基硅氧烷/二甲基硅氧烷共聚物、二苯甲酰甲烷衍生物、4-(叔丁基)-4’-甲氧基二苯甲酰甲烷、4-异丙基-二苯甲酰甲烷、Tinosorb

在某些优选的实施方式中，组合物可以包含极性油，例如，来自卵磷脂和脂肪酸甘油三酯的那些，即链长为8至24，具体地12至18个C-原子的饱和和/或不饱和、支链和/或非支链烷烃羧酸的三酸甘油酯。脂肪酸甘油三酯可以例如有利地选自由以下组成的组：合成、半合成和天然油，如橄榄油、向日葵油、豆油、花生油、菜籽油、杏仁油、棕榈油、椰子油、蓖麻油、麦胚芽油、葡萄籽油、红花油、月见草油、澳洲坚果等，极性油的特别优选的实例是三异硬脂精、辛酸/癸酸甘油三酯或碳酸酯，如二正辛基碳酸酯及其组合。

极性更强的油组分可以选自链长为3至30个碳原子的饱和和/或不饱和、支链和/或非支链烷烃羧酸和链长为3至30个碳原子的饱和和/或不饱和、支链和/或非支链醇的酯的组，和选自芳香族羧酸和链长为3至30个碳原子的饱和和/或不饱和、支链和/或非支链醇的酯的组，及其组合。然后，这些酯可以有利地选自由以下组成的组：豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、油酸异丙酯、硬脂酸正丁酯、月桂酸正己酯、油酸正癸酯、硬脂酸异辛酯、异辛基壬酸酯、硬脂酸异壬酯、异壬酸异壬酯、新戊酸异癸酯、异壬酸鲸蜡酯、椰油酸辛酯、十三烷基六癸酸酯、十三烷基异壬酸鲸蜡酯、六辛酸酯、二癸酸酯、二辛酸酯、2-乙基己基棕榈酸酯、2-乙基己基月桂酸酯、2-己基癸基硬脂酸酯、2-辛基十二烷基棕榈酸酯、油醇油酸酯、油醇芥酸酯、瓢儿菜醇油酸酯、瓢儿菜醇芥酸酯和这些酯的合成、半合成和天然混合物，如荷荷巴油。

对于水/油乳剂，油相可以有利地选自二烷基醚的组、饱和或不饱和的、支链或非支链的醇的组，如辛基十二烷醇。例如，W/O乳剂的油相可以具有一定量的C

格尔伯特醇在美容剂中的使用本身是已知的。然后，大多数情况下，通过以下结构表征这些物质：

通常，R

例如，格尔伯特醇可以选自其中R

优选的格尔伯特醇可以是2-丁基辛醇：

或者2-己基癸醇：

或其可商购的混合物。

最终的美容或皮肤科制剂中的格尔伯特醇的总量可以有利地选自基于所述制剂总重量的高达25.0wt％，优选地0.5-15.0wt％的范围。

其它适合的酯是鲸蜡醇十六酸酯。

非极性油可以例如选自支链和非支链烃和蜡的组，具体地石油膏(矿脂)、石腊油、角鲨烷和角鲨烯、聚烯烃和氢化聚异丁烯。在聚烯烃中，聚癸烯是优选的物质。

其它赋形剂可以选自环和/或直链硅酮和硅酮油。

可以有利地将苯基聚三甲基硅氧烷选择作为硅酮油。可以有利地使用其它硅酮油，如聚二甲基硅氧烷、苯基聚二甲基硅氧烷，环聚甲基硅氧烷(八甲基环四硅氧烷)，例如，六甲基环三硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、聚(甲基苯基硅氧烷)、十六基聚二甲基硅氧烷、山嵛氧基聚二甲基硅氧烷。

此外，环聚甲基硅氧烷和异十三烷基异壬酸酯的混合物以及环聚甲基硅氧烷和2-乙基己基异硬脂酸酯的那些混合物是有利的。还有利地选择其有机侧链衍生化，例如，聚乙氧基化和/或聚丙氧基化的与上述化合物具有类似组成的硅酮油。为此，聚硅氧烷-聚烷基-聚醚共聚物，如十六基聚二甲基硅氧烷共聚醇包括例如(十六基聚二甲基硅氧烷共聚醇(和)聚甘油基-4异硬脂酸酯(和)己基月桂酸酯)。其它赋形剂可以选自以下的组：植物蜡、动物蜡、矿物蜡、石化蜡及其组合。如小烛树蜡、巴西棕榈蜡(camauba wax)、日本蜡、芦苇草、软木蜡、小冠椰子腊(Guarumawach)、大米胚芽油蜡、甘蔗蜡、浆果蜡、小冠巴西棕蜡(ouricury wax)、褐煤蜡、荷荷巴油(jojoba wax)、牛油树脂(shea butter)、蜂蜡、虫胶蜡、鲸蜡、羊毛脂(羊毛蜡)、尾脂油脂(uropygial grease)、矿蜡、石蜡(地蜡)、固体石蜡和微蜡、得自Croda GmbH的Syncrowax HRC(三山嵛酸甘油酯)、Syncrowax HGLC(C

油相可以有利地选自下组：2-乙基己基异硬脂酸酯、辛基十二烷醇、异十三烷基、丁二醇二辛酸酯/二癸酸酯、C12-15烷基苯甲酸酯、辛酸-癸酸甘油三酯、二辛基醚及其组合。

辛基十二烷醇、辛酸-癸酸甘油三酯、二辛基醚、辛基碳酸酯、可可甘油酯的混合物，或者C12-15-烷基苯甲酸酯和2-乙基己基异硬脂酸酯的混合物、C12-15-烷基苯甲酸酯和丁二醇二辛酸酯/二癸酸酯的混合物和C12-15-烷基苯甲酸酯、2-乙基己基异硬脂酸酯、异十三烷基的混合物及其组合可以是有利的。

在烃中，可以有利地使用石腊油、环烷烃、角鲨烷、角鲨烯、氢化聚异丁烯、聚癸烯及其组合。

其它赋形剂可以包括卵磷脂、羊毛脂、与石腊油(液体石蜡)混合的微晶蜡(微晶蜡)、石蜡、氢化蓖麻油、聚甘油基3油酸酯、羊毛蜡酸混合物、羊毛蜡醇混合物、五季戊四醇基异硬脂酸酯、聚甘油基-3-二异硬脂酸酯、蜂蜡(白蜂蜡)和硬脂酸，与异丙基羟基鲸蜡醚混合的二羟基鲸蜡基磷酸钠、甲基葡萄糖二油酸酯、与羟基硬脂酸酯蜡和蜂蜡混合的甲基葡萄糖、与石蜡油和石蜡和甘油基油酸酯和羊毛脂混合的矿物油、与石蜡和氢化蓖麻油和甘油基和聚甘油基-3油酸酯混合的石蜡油、PEG-7氢化蓖麻油、石蜡和氢化蓖麻油、聚甘油基-4异硬脂酸酯、与己基月桂酸酯和十六基聚二甲基硅氧烷共聚醇混合的聚甘油基-4异硬脂酸酯、月桂基聚甲基硅氧烷共聚醇、十六基聚二甲基硅氧烷共聚醇、丙烯酸酯/C

如果需要，水/油乳剂可以含有一个或多个共乳化剂，特别有利地选自通常作为O/W乳化剂起作用的以下物质的组：与ceteareth-20混合的甘油基硬脂酸酯、ceteareth-25、与十八烷醇混合的ceteareth-6、Triceteareth-4磷酸酯、鲸蜡基硬脂酰硫酸钠、卵磷脂Trilaureth-4磷酸酯、laureth-4磷酸酯、硬脂酸、丙二醇硬脂酸酯SE、PEG-25氢化蓖麻油、PEG-54氢化蓖麻油、PEG-6辛酸/癸酸甘油酯、与丙二醇ceteth-2混合的甘油基油酸酯、ceteth-20、聚山梨酯60、与PEG-100硬脂酸酯混合的甘油基硬脂酸酯、Laureth-4、ceteareth-3、异硬脂基甘油醚、与鲸蜡基硬脂基硫酸钠混合的鲸蜡硬脂醇、laureth-23、steareth-2、与PEG-30硬脂酸酯混合的甘油基硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、乙二醇二硬脂酸酯、PEG-22十二基甘醇共聚物、聚甘油基-2PEG-4硬脂酸酯、ceteareth-20、甲基葡萄糖、steareth-10、PEG-20硬脂酸酯、与PEG-8二硬脂酸酯混合的Steareth-2、steareth-21、steareth-20、isosteareth 20、PEG-45/十二基甘醇共聚物、甲氧基PEG-22/十二基甘醇共聚物、PEG-20甘油基硬脂酸酯、PEG-20甘油基硬脂酸酯、PEG-8蜂蜡、聚甘油基-2月桂酸酯、异硬脂基二甘油基琥珀酸酯、硬脂酰胺丙基PG-二甲基氯化铵磷酸酯、甘油基硬脂酸酯SE、ceteth-20、柠檬酸三乙酯、PEG-20甲基葡萄糖倍半硬脂酸酯、ceteareth-12、甘油基硬脂酸酯、十六基磷酸酯、triceteareth-4磷酸酯、trilaureth-4-磷酸酯、聚甘油甲基葡萄糖二硬脂酸酯、十六基磷酸钾、isosteareth-10、聚甘油基-2-倍半异硬脂酸酯、ceteth-10、oleth-20、isoceteth-20、与ceteareth-20混合的甘油基硬脂酸酯、ceteareth-12、鲸蜡硬脂醇和鲸蜡醇、与PEG-20硬脂酸酯混合的鲸蜡硬脂醇、PEG-30硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯。

硅酮乳化剂、烷基聚甲基硅氧烷和/或烷基聚二甲基硅氧烷共聚醇、

技术人员应理解，可以在所述组合物中包括任何数目的这些载体或赋形剂。

在某些实施方式中，可以将组合物配制为凝胶剂、乳膏剂、软膏剂、洗剂、滴剂、喷雾剂，包括气溶胶喷雾剂、泡沫剂或粉末剂。在某些实施方式中，组合物可以包含在面膜、衬垫、贴片、双室装置(两组分分配系统)或化妆品中。本发明的组合物通常可以预期作为“免洗型(leave on，保留型)”组合物。

本发明的组合物可以施用一次或多次。在某些实施方式中，定期施用组合物，而在其它实施方式中，以不定间隔施用它。例如，可以每天施用所述组合物四次，每天三次或每天两次，或者每天，或者每2天、3天、4天或5天一次，或者每周1次或2周、3周、4周、5周、6周、7周或8周1次，或者更频繁或更不频繁施用，包括它们之间的所有值。

所述组合物的施用持续时间可以是有限的或者可以是无限的或者是开放性的。例如，所述施用可以持续1周、2周、3周、4周、6周、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或者1、2、3、4或5年或更多年。

还在试剂盒中提供了任何本文所提及的组合物。在一些实施方式中，试剂盒包含容纳活细菌的容器或者容纳冻干活细菌的容器。试剂盒可以包括第二容器，其包含培养基，如蛋白胨。在一些实施方式中，试剂盒可以包含抗生素、消毒剂(例如，BPO)和/或水杨酸。在一些实施方式中，抗生素、消毒剂和/或水杨酸用于在应用包含活细菌的组合物之前预处理所述皮肤。试剂盒还可以包括施用所述组合物的说明。在某些实施方式中，提供了将菌株与所述组合物的其它组分混合的说明。在一些实施方式中，试剂盒还包括涂覆器以将所述细菌组合物应用于受试者。

其它方面提供了用于诊断受试者中氧化应激相关皮肤病的方法，所述方法包括确定来自所述受试者的皮肤样品中的RoxP的量或者痤疮丙酸杆菌的量。在某些实施方式中，所述氧化应激相关皮肤病可以选自包括以下的组：AK、BCC、SCC、头皮屑、皮脂溢性皮炎、痤疮、炎症、皮炎、银屑病、湿疹、红斑痤疮、荨麻疹和白癜风。

另一个方面提供了用于确定受试者是否会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的方法，所述方法包括确定来自所述受试者的皮肤样品中的RoxP的量或者痤疮丙酸杆菌的量。

术语“诊断”在医疗实践中是常规且很好理解的。通过进一步解释且无限制地，术语“诊断”或其替代形式，如“诊断”一般地表示基于症状和病征和/或根据多种诊断程序的结果(如，例如，根据已知所诊断的疾病或病况的一种或多种生物标志物特征的存在、不存在和/或量)，识别、确定或断定受试者中的疾病或病况的过程或行为。

如本文所使用的术语“诊断”还广泛地涵盖了诊断实践的方面，其可以更具体地被称为疾病的监测、预后或预测。术语“监测”一般地表示对于随时间可能发生的任何变化，受试者中的疾病或病况的跟进。术语“预后”一般地表示对于疾病或病况发展和恢复前景(例如，概率、持续时间和/或程度)的预期。疾病或病况的优良预后可以涵盖优选地，在可接受的时间段内，从疾病或病况令人满意的部分或完全恢复的预期。优良预后还可以通常涵盖优选地，在给定时间段内，疾病或病况未进一步恶化或加重的预期。疾病或病况的不良预后通常可以涵盖疾病或病况的不合标准的恢复和/或不令人满意的缓慢恢复，或者基本无恢复，或甚至进一步恶化。

术语“预测”一般地表示(尚)未患有所述疾病或病况的受试者中的疾病或病况的提前说明、指示或预言。例如，受试者中疾病或病况的预测可以指示受试者将出现所述疾病或病况的概率、机会或风险，例如，在特定时间段内或到特定年龄。尤其可以将所述概率、机会或风险表示为绝对值、范围或统计量，或者可以相对于适合的对照受试者或受试者群体(如，例如，相对于一般、正常或健康受试者或受试者群体)表示。因此，可以有利地将受试者将出现疾病或病况的概率、机会或风险表示为相对于适合的对照受试者或受试者群体的升高或降低或者升高倍数或降低倍数。

可以作为其中它们对从受试者移除的样品应用了一个或多个体外处理和/或分析步骤的体外方法充分考核本发明用于诊断疾病或病况或者用于确定受试者是否会受益于给定动作或治疗过程的方法。术语“体外”通常表示身体，例如，动物或人体以外或外部的。

本发明的方法或用途可以优选地允许至少50％，至少60％，至少70％或至少80％，例如，≥85％或≥90％或≥95％，例如，在约80％至100％之间或者在约85％至95％之间的灵敏度和/或特异性(优选地，灵敏度和特异性)。

因此，在这些方法中，RoxP或痤疮丙酸杆菌构成了要在来自受试者的皮肤样品中确定的生物标志物。因此，还公开了RoxP或痤疮丙酸杆菌作为用于诊断受试者中的氧化应激相关皮肤病或者用于确定受试者是否会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的生物标志物的用途。

在某些实施方式中，本发明的方法或用途可以评估单一变量，如单一生物标志物。在其它实施方式中，本发明的方法或用途可以评估两个或更多个变量，如两个或更多个生物标志物。例如，所述方法或用途可以评估RoxP和痤疮丙酸杆菌。可以分开且独立地评价每个如此测量的变量，如每个生物标志物，或者可以从两个或更多个变量的值或量产生谱图(profile)。因此，技术人员还应理解如本文所提及的任何值或量还可以涵盖谱图。类似地，如本文所提及的任何参考值还可以涵盖参考谱图。

术语“生物标志物”在本领域中是普遍的并且通常广泛地表示生物实体或物质，如(例如)生物分子和/或其可检测的部分，或者细胞，如微生物(例如，细菌)细胞，相对于受试者表型和/或基因型的一个或多个方面，如(例如)相对于受试者关于给定疾病或病况，或者关于受试者的特定动作或治疗的过程的预期益处的状态，其在受试者中的定性和/或定量评价是预测性或信息性的(例如，预测性、诊断性和/或预后性)。

通常，生物标志物可以是细胞基的，或肽基的、多肽基的和/或蛋白基的，或核酸基的。例如，生物标志物可以是给定属、种、类型(例如，种系型)、亚型或株的微生物(例如，细菌)细胞，或者给定表型或基因型，或者表达给定蛋白或多肽，或者具有给定基因元件或序列的微生物(例如，细菌)细胞。例如，生物标志物可以由给定基因所编码的肽、多肽和/或蛋白组成。例如，核酸基生物标志物可以涵盖DNA、RNA和DNA/RNA杂交分子，如给定基因的DNA或者从给定基因转录的RNA-分子，或者来自于或来源于转录的RNA-分子的任何RNA或DNA(例如，拷贝DNA、cDNA)分子。

在本文中，对任何生物标志物(无论是肽基的、多肽基的、蛋白基的还是核酸基的)的提及还涵盖了其片段。具体地，作为生物标志物对RoxP的提及涵盖了全长RoxP并且还涵盖了其任何片段。因此，在本文中对确定或测量给定肽、多肽、蛋白或核酸生物标志物(的量)的提及可以涵盖测量所列举的肽、多肽、蛋白或核酸和/或测量其一个或多个片段(的量)。例如，可以一起测量任何生物标志物肽、多肽、蛋白或核酸，和/或其一个或多个片段，从而所测量的量对应于一起测量的物质的量的和。在另一个实例中，可以分别单独测量任何生物标志物肽、多肽、蛋白或核酸和/或其一个或多个片段。因此，在该背景中，“RoxP”涵盖了基于RoxP多肽或蛋白或其片段，或者RoxP核酸或其片段，尤其包括RoxP启动子或其任何部分和/或RoxP编码序列或其任何部分的生物标志物。

通常已在本说明书的其它处提出了相对于肽、多肽或蛋白的术语“片段”。在本发明的背景中，在本文中预计了携带对于本发明的诊断或益处-评价方法的性能所必需的信息的任何肽、多肽或蛋白片段。可以通过任何机制，体内和/或体外产生这些片段，如但不限于通过替代转录或翻译、蛋白外切和/或蛋白内切水解，或者肽、多肽或蛋白的蛋白水解降解，如(例如)通过物理、化学和/或酶促蛋白水解。这些片段可以优选地包含至少约30％，例如，至少约50％，或者至少约70％，优选地至少约80％，例如，至少约85％，更优选地至少约90％，并且更优选地至少约95％，或甚至约99％的全长生物标志物肽、多肽或蛋白如RoxP的邻接氨基酸序列长度。例如，这种RoxP片段可以包括相应全长RoxP肽、多肽或蛋白的≥5个连续氨基酸，或者≥10个连续氨基酸，或者≥20个连续氨基酸，或者≥30个连续氨基酸，例如，≥40个连续氨基酸，如例如≥50个连续氨基酸，例如，≥60，≥70，≥80，≥90，≥100，≥110，≥120，≥130，≥140或者≥150个连续氨基酸的序列。

对于核酸(多核苷酸)，术语“片段”通常表示核酸的5’-和/或3’-截短形式。在本发明的背景中，在本文中预计了携带对于本发明的诊断或益处-评价方法的性能所必需的信息的任何核酸片段。可以通过任何机制，体内和/或体外产生这些片段，如但不限于通过替代转录、核酸外切和/或核酸内切降解，或者核酸的核酸降解，如例如通过物理、化学和/或酶促核酸降解。这些片段可以优选地包含至少约30％，例如，至少约50％，或者至少约70％，优选地至少约80％，例如，至少约85％，更优选地至少约90％，并且更优选地至少约95％，或甚至约99％的全长生物标志物核酸，如RoxP核酸的邻接核酸序列。例如，这种RoxP核酸片段可以包括相应全长RoxP核酸，如相应全长RoxP启动子和/或RoxP编码序列的≥15个连续核苷酸，或者≥30个连续核苷酸，或者≥60个连续核苷酸，或者≥90个连续核苷酸，例如，≥120个连续核苷酸，如例如≥150个连续核苷酸，例如，≥180，≥210，≥240，≥270，≥300，≥330，≥360，≥390，≥420或≥450个连续核苷酸的序列。

术语“数量”、“量”和“水平”在本领域中是同义的并且通常是充分理解的。如本文所使用的术语可以具体地表示样品中生物标志物的绝对定量，或者样品中生物标志物的相对定量，即相对于另一个值，如相对于参考值，或者表示生物标志物基线的值的范围的相对定量。这些参考值或范围可以得自单一受试者或一组受试者。

可以将样品中生物标志物，如肽基、蛋白基、多肽基或核酸基生物标志物的绝对数量有利地表示为重量或摩尔量，或者更通常地，表示为浓度，例如，重量/体积或mol/体积，或者重量/皮肤表面积或mol/皮肤表面积，如1.0cm

当在样品(通常基本上不包括其它实体，如细胞、分子或分析物)中检测或确定了所述生物标志物的存在或不存在和/或的量时，“测量”或“确定”了样品中的生物标志物。基于可以通过技术人员评价和决定的因素，尤其如生物标志物的类型、样品的类型、样品中生物标志物的预期丰度、用于检测生物标志物的检测方法的类型、稳健性、灵敏度和/或特异性等，可以直接测量样品中的生物标志物，或者样品可以经受旨在实现生物标志物的充分测量的一个或多个处理步骤。通过实例，样品可以经受一个或多个离析或分离步骤，从而从样品中离析出生物标志物或者从而制备了对生物标志物富集的样品部分。例如，如果所述生物标志物是肽、多肽或蛋白，则可以将任何已知的蛋白纯化技术应用于样品以从中分离肽、多肽和蛋白。如果所述生物标志物是核酸，则可以将任何已知的核酸纯化技术应用于样品以从中分离核酸。纯化肽、多肽、蛋白或核酸的方法的非限制性实例可以包括色谱法、制备电泳、离心、沉淀、亲合纯化、使用分子印记晶胶基质的纯化等。如果所述生物标志物是细胞，则可以将任何已知的细胞分离技术应用于样品以从中分离细胞。分离细胞的方法的非限制性实例是通过流式细胞术的细胞分选、在固体或液体培养基中的细胞培养等。

如本文所使用的术语“样品”或“生物样品”包括得自受试者的任何生物样本。有用的样品是以可检测的量包含如本文所教导的所关心的生物标志物的那些样品。优选地，样品可以是通过允许从受试者移除/分离样品的微创方法容易地可获得的。术语“皮肤样品”在本文中广泛用于表示通过对受试者皮肤或受试者皮肤表面采样获得的任何样品。皮肤样品可以但不需要含有受试者的皮肤细胞。与本发明的方法和用途相容的对受试者皮肤表面采样的适当但非限制性的方法是用常规皮肤拭子(其可以优选地是用缓冲液预浸泡的)擦拭皮肤表面的给定区域(例如，1×1cm，或者2×2cm，或者3×3cm，或者4×4cm，或者5×5cm，或者1cm

在本说明书其它处所讨论的任何分离、检测和定量方法可以用于测量样品中生物标志物肽、多肽或蛋白，如RoxP的量。例如，这些方法可以包括生物化学测定法、免疫测定法、质谱分析法、色谱法、电容生物传感器法或其组合。术语“免疫测定”一般地表示照此已知用于检测样品中的一个或多个所关心的分子或分析物的方法，其中通过特异性结合剂，通常但不限于抗体和所关心的分子或分析物之间的特异性结合赋予免疫测定对所关心的分子或分析物的特异性。免疫测定技术无限制地包括免疫组织化学、直接ELISA(酶联免疫吸附测定)、间接ELISA，夹心ELISA、竞争性ELISA、多路ELISA、放射免疫测定(RIA)、ELISPOT技术和本领域中已知的其它类似技术。这些免疫测定方法的原理在本领域中是已知的，例如，John R.Crowther,“The ELISA Guidebook”,第1版,Humana Press 2000,ISBN0896037282。

通过进一步解释而非限制地，直接ELISA使用了标记的第一结合试剂，例如，抗体来结合至并借此定量固定在固体载体，如微孔板上的样品中的靶标抗原。间接ELISA使用了未标记的第一结合试剂，例如，抗体，其结合至靶标抗原，和第二标记的结合试剂，例如，抗体，其识别并允许定量抗原结合的第一结合试剂。在夹心ELISA中，使用固定化的“捕获”结合试剂，例如，抗体(其结合至抗原内的一个抗原性位点)从样品捕获靶标抗原，并且在除去未结合的分析物之后，使用“检测”结合试剂，例如，抗体(其结合至所述抗原内的另一抗原性位点)检测所捕获的抗原，其中如上所述检测结合试剂可以直接标记或是间接可检测的。竞争性ELISA使用标记的“竞争剂”，其可以是第一结合试剂，例如，抗体或靶标抗原。在实例中，未标记的固定化第一结合试剂，例如，抗体用样品温育，使该反应达到平衡，然后添加标记的靶标抗原。后者将在其结合位点尚未被来自样品的未标记的靶标抗原所占据的任意位置结合至第一结合试剂。因此，所结合的标记抗原的检测量与样品中未标记的抗原的量负相关。多路ELISA允许同时检测通常处于多个阵列地址的单个隔室(例如，微板孔)内的两种或更多种分析物(有关进一步的指导，参见，例如，Nielsen&Geierstanger 2004.J ImmunolMethods 290:107-20和Ling等人.2007.Expert Rev Mol Diagn 7:87-98)。如所理解的，ELISA技术中的标记通常通过酶(如，例如，辣根过氧化物酶)缀合，并且终点通常是比色、化学发光或荧光、磁性、压电、热电等。

放射免疫测定(RIA)是基于竞争的技术并且包括将已知量的放射活性标记(例如，

通常，能够获得肽质量，并且优选地所选的肽的碎片化和/或(部分)氨基酸序列的精确信息的任何质谱(MS)技术(例如，在串联质谱，MS/MS；或者在源后衰变，TOF MS中)在本文中是有用的。适合的肽MS和MS/MS技术和系统本身是熟知的(参见，例如，Methods inMolecular Biology,146卷：“Mass Spectrometry of Proteins and Peptides”，Chapman主编,Humana Press 2000,ISBN 089603609x；Biemann 1990.Methods Enzymol 193:455-79；或Methods in Enzymology,402卷：“Biological Mass Spectrometry”,Burlingame主编,Academic Press 2005,ISBN 9780121828073)并且可以在本文中使用。适合于生物标志物肽分析的MS布置、仪器和系统可以包括但不限于基质辅助激光解吸/电离飞行时间(MALDI-TOF)MS；MALDI-TOF源后衰变(PSD)；MALDI-TOF/TOF；表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱法(SELDI-TOF)MS；电喷雾电离质谱(ESI-MS)；ESI-MS/MS；ESI-MS/(MS)

色谱法也可以用于测量生物标志物。如本文所使用的，术语“色谱法”涵盖了用于分离化学物质的方法，其在本领域中照此表示并广泛可用。在优选的方法中，色谱法是指以下过程：当它们在固定液相或固相(“固定相”)周围或上流过时，由于分析物在所述流动相和所述固定相之间的差异分布而将通过移动液体或气流(“流动相”)所携带的化学物质(分析物)的混合物分离成各个组分。所述固定相通常可以是细碎的固体、过滤材料片或位于固体表面上的液体薄膜等。色谱法还广泛适用于生物来源的化合物(如，例如，氨基酸、蛋白质、蛋白质或肽片段等)的分离。

如本文所使用的色谱法可以优选地是柱状的(即，其中将固定相沉积或装填到柱中)，优选地液相色谱，并且更优选地HPLC。尽管色谱法的详细资料在本领域中是熟知的时候，但是对于进一步的指导，参见，例如，Meyer M.,1998,ISBN:047198373X和“PracticalHPLC Methodology and Applications”,Bidlingmeyer,B.A.,John Wiley&Sons Inc.,1993。色谱法的示例性类型包括但不限于高效液相色谱(HPLC)、正相HPLC(NP-HPLC)、反相HPLC(RP-HPLC)、离子交换色谱(IEC)，如阳离子或阴离子交换色谱、亲水相互作用色谱(HILIC)、疏水性相互作用色谱(HIC)、尺寸排阻色谱(SEC)，包括凝胶过滤色谱或凝胶渗透色谱、色谱焦聚、亲和色谱如免疫亲和、固定化金属亲和色谱等。

可以将色谱(包括一维、二维或多维色谱)与其它肽分析方法(如，例如，如本说明书其它处描述的下游质谱分析)结合用作肽分离方法。

可以可选地与任何上述分析方法结合使用其它肽或多肽分离、鉴别或定量方法，以用于在本公开中测量生物标志物。这些方法包括但不限于化学提取分配、等电点聚焦(IEF)，包括毛细管等电点聚焦(CIEF)、毛细管等速电泳(CITP)、毛细管电色谱(CEC)等、一维聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)、毛细管凝胶电泳(CGE)、毛细管区带电泳(CZE)、胶束电动色谱(MEKC)、自由流动电泳FF(E)等。

电容性生物传感器是通过寄存传感器表面上的生物识别元件和同源生物标志物之间的直接结合而起作用的亲合生物传感器。生物识别元件可以例如是免疫学分子，如抗体，或者含有生物标志物的生物识别腔的分子印记聚合物(MIP)。生物传感器测量电解质/电极界面处的介电性质和/或介电层的厚度的变化。参见，例如，Ertürk等人(2018PLoS ONE13:e0193754)。

可以使用本领域中已知的标准定量DNA、RNA或cDNA测量工具检测核酸水平的生物标志物水平。非限制性实例包括杂交基分析、微阵列表达分析、数字基因表达(DGE)、RNA原位杂交(RISH)、Northern印迹分析等；PCR、RT-PCR、RT-qPCR、终点PCR、数字PCR、微滴式数字PCR等；支持的寡核苷酸探测、焦磷酸测序、通过合成的聚合酶克隆循环测序(polonycyclic sequencing)、同时双向测序、单分子测序、单分子实时测序、真单分子测序、杂交辅助的纳米孔测序、通过合成的测序等。

为了确定样品的微生物组学组成，可以从样品分离DNA并从中扩增和测序(通常以高测序深度)适合的遗传元件或区域(如例如核糖体RNA基因，如优选地16S rRNA，如更优选地，16S rRNA的VI-V3区)。可以使用已知的统计工具和公开可用的微生物组学序列数据库，如人类口腔微生物组学数据库(Human Oral Microbiome Database，HOMD)(http://www.homd.org/)，通过手动包括相关皮肤细菌来对所产生的读序分类(Chen等人，2010Database:the journal of biological databases and curation baq013)。

为了确定皮肤拭子样品中的痤疮丙酸杆菌群体的类型或亚型，可以使用已知的多位点序列分型方案(MLST)或单位点序列分型(SLST)方案，通常包括所选位点的扩增和测序以及等位基因的序列分析，如使用www.medbac.dk/slst/pacnes(McDowell等人,2012PLoSOne 7:e41480；Scholz等人，2014PLoS ONE 9:el04199)。

用于测量生物标志物的多种技术可以使用所述各个生物标志物的结合试剂。因此，进一步公开了能够特异性结合至如本文所教导的标志物、肽、多肽、蛋白或核酸的结合试剂。如在整个说明书中所预期的，结合试剂可以尤其包括抗体、适体、光适体、蛋白、肽、拟肽、核酸如寡核苷酸或小分子。

如在整个说明书中所使用的，术语“特异地结合”表示试剂(在本文中还表示为“特异性结合试剂”)结合至一个或多个所期望的分子或分析物，其基本上不包括随机或无关的其它分子并且可选地基本上不包括结构相关的其它分子。术语“特异地结合”不必须要求试剂仅结合至其预期靶标。例如，如果在结合条件下，其对于这些预期靶标的亲合力是其对非靶标分子的亲合力至少约2-倍大，优选地至少约5-倍大，更优选地至少约10-倍大，更优选地至少约25-倍大，更优选地至少约50-倍大并且更优选地至少约100倍大，则可以将试剂称为特异性结合至所关心的靶标。

如在整个说明书中所使用，特异结合试剂可以尤其包括抗体、适体、镜像适体(spiegelmer)(L-适体)、光适体、蛋白、肽、拟肽、核酸，如寡核苷酸或小分子。

优选地，所述试剂可以以这种结合的亲合常数(K

如本文所使用的，术语“抗体”以其最广泛的意义使用并一般地表示任何免疫学结合试剂。该术语具体地涵盖了完整的单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两个完整抗体形成的多价(例如，2-、3-或更高价)抗体和/或多重特异性抗体(例如，双重-或更多重特异性抗体)，和达到它们显示出所期望的生物活性(具体地，特异地结合所关心的抗原的能力)的程度的抗体片段以及这些片段的多价和/或多重特异性复合物。术语“抗体”不仅包括通过包含免疫的方法所产生的抗体，而且还包括任何多肽，例如，重组表达的多肽，这使其涵盖了能够特异性结合至所关心的抗原上的表位的至少一个互补决定区(CDR)。因此，该术语适用于这些分子而不考虑它们是体外产生的还是体内产生的。

抗体可以是IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类中的任一种，并且优选IgG类抗体。抗体可以是多克隆抗体，例如，抗血清或从中纯化(例如，亲合纯化)的免疫球蛋白。抗体可以是单克隆抗体或单克隆抗体的混合物。单克隆抗体可以以更高的选择性和可重复性靶向特定抗原或抗原内的特定表位。通过实例而非限制，可以通过首先由Kohler等人1975(Nature 256:495)所述的杂交瘤法制备或者可以通过重组DNA法(例如，如US 4,816,567中)制备单克隆抗体。例如，还可以使用如Clackson等人1991(Nature 352:624-628)和Marks等人1991(JMol Biol 222:581-597)所描述的技术从噬菌体抗体文库分离单克隆抗体。

抗体结合试剂可以是抗体片段。“抗体片段”包括完整抗体的部分，其包含其抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv和scFv片段；双链抗体；直链抗体；单链抗体分子；和由抗体片段形成的多价和/或多重特异性抗体，例如，双体、三体和多体。以上名称Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv等旨在具有它们在本领域中建立的意义。

术语抗体包括来源于或包含来自任何动物种，优选地脊椎动物种，包括例如鸟类和哺乳动物的一个或多个部分的抗体。无限制地，所述抗体可以是鸡抗体、火鸡抗体、鹅抗体、鸭抗体、珍珠鸡抗体、鹌鹑抗体或雉鸡抗体。还无限制地，所述抗体可以是人抗体、鼠科(例如，小鼠、大鼠等)抗体、驴抗体、兔抗体、山羊抗体、绵羊抗体、豚鼠抗体、骆驼(如双峰驼(Camelus bactrianus)和单峰驼(Camelus dromaderius))抗体、美洲驼(例如，羊驼(Lamapaccos)、大羊驼(Lama glama)或瘦驼(Lama vicugna))抗体或马抗体。

技术人员将理解，抗体可以包括一个或多个氨基酸缺失、添加和/或替换(例如，保守替换)，只要这些改变保持了其对各自抗原的结合。抗体还可以包括其组成氨基酸残基的一种或多种天然或人工修饰(例如，糖基化等)。

生产多克隆和单克隆抗体及其片段的方法在本领域中是熟知的，生产重组抗体或其片段的方法也是(参见，例如，Harlow and Lane,“Antibodies:A Laboratory Manual”,Cold Spring Harbour Laboratory,New York,1988；Harlow and Lane,“UsingAntibodies:A Laboratory Manual”,Cold Spring Harbour Laboratory,New York,1999,ISBN 0879695447；“Monoclonal Antibodies:A Manual of Techniques”,Zola主编,CRCPress 1987,ISBN 0849364760；“Monoclonal Antibodies:A Practical Approach”,Dean&Shepherd主编,Oxford University Press 2000,ISBN 0199637229；Methods inMolecular Biology,248卷:“Antibody Engineering:Methods and Protocols”,Lo主编,Humana Press 2004,ISBN 1588290921)。

术语“适体”是指特异性结合于靶标分子如肽的单链或双链寡DNA、寡RNA或寡DNA/RNA或其任何类似物。有利地，适体对它们的靶标显示出相当高的特异性和亲合力(例如，K

在一些实施方式中，如本文所教导的试剂，如结合试剂可以包含可检测标记。术语“标记”是指可以用于提供可检测并且优选地可定量的读数或性质，并且可以连接至或构成所关心的实体(如结合试剂)的一部分的任何原子、分子、部分或生物分子。标记可以是通过(例如)质谱、光谱、光学、比色、磁性、光化学、生物化学、免疫化学或化学方式适合地可检测的。标记无限制地包括染料；放射性标记，如

本发明的方法或用途可以包括将来自受试者的样品中所测量的一种或多种生物标志物的量与适合的参考值相比较，其中所述参考值代表已知的结果。

因此，在某些实施方式中，所述方法或用途可以包括：

(a)确定来自受试者的皮肤样品中的RoxP的量；

(b)将所确定的RoxP的量与参考值相比较，所述参考值代表已知的氧化应激相关皮肤病的诊断；

(c)找出所确定的RoxP的量与所述参考值的偏差或无偏差；和

(d)将所述偏差或无偏差的发现归因于受试者中氧化应激相关皮肤病的具体诊断。

在某些实施方式中，所述方法或用途可以包括：

(a)确定来自受试者的皮肤样品中的痤疮丙酸杆菌的量；

(b)将所确定的痤疮丙酸杆菌的量与参考值相比较，所述参考值代表已知的氧化应激相关皮肤病的诊断；

(c)找出所确定的痤疮丙酸杆菌的量与所述参考值的偏差或无偏差；和

(d)将所述偏差或无偏差的发现归因于受试者中氧化应激相关皮肤病的具体诊断。

在某些实施方式中，所述方法或用途可以包括：

(a)确定来自受试者的皮肤样品中的RoxP的量和痤疮丙酸杆菌的量；

(b)将所确定的RoxP的量和所确定的痤疮丙酸杆菌的量与参考值相比较，所述参考值代表已知的氧化应激相关皮肤病的诊断；

(c)找出所确定的RoxP的量和所确定的痤疮丙酸杆菌的量与所述参考值的偏差或无偏差；

(d)将所述偏差或无偏差的发现归因于受试者中氧化应激相关皮肤病的具体诊断。

在某些实施方式中，所述方法或用途可以包括：

(a)确定来自受试者的皮肤样品中的RoxP的量；

(b)将所确定的RoxP的量与参考值相比较，所述参考值代表已知的RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用益处的指示；

(c)找出所确定的RoxP的量与所述参考值的偏差或无偏差；和

(d)将所述偏差或无偏差的发现归因于受试者是否会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的具体指示。

在某些实施方式中，所述方法或用途可以包括：

(a)确定来自受试者的皮肤样品中的痤疮丙酸杆菌的量；

(b)将所确定的痤疮丙酸杆菌的量与参考值相比较，所述参考值代表已知的RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用益处的指示；

(c)找出所确定的痤疮丙酸杆菌的量与所述参考值的偏差或无偏差；和

(d)将所述偏差或无偏差的发现归因于受试者是否会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的具体指示。

在某些实施方式中，所述方法或用途可以包括：

(a)确定来自受试者的皮肤样品中的RoxP的量和痤疮丙酸杆菌的量；

(b)将所确定的RoxP的量和所确定的痤疮丙酸杆菌的量与参考值相比较，所述参考值代表已知的RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用益处的指示；

(c)找出所确定的RoxP的量和所确定的痤疮丙酸杆菌的量与所述参考值的偏差或无偏差；

(d)将所述偏差或无偏差的发现归因于受试者是否会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的具体指示。

可以根据先前用于其它生物标志物的已知程序建立参考值。例如，可以在其特征在于应激关联皮肤病的具体已知诊断或者RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株施用益处的具体已知指示的个体或个体群体中建立参考值。该群体可以包括但不限于≥2，≥5，≥10，≥50，≥100或甚至更多个个体。如之前所提及的，当要评价两种或更多种生物标志物时，可以分开且独立地评价每种生物标志物，或者可以由两种或更多种生物标志物的值或量产生谱图。因此，如本文所提及的任何参考值还可以涵盖参考谱图。

通过实例，用于建立RoxP和/或痤疮丙酸杆菌的量的参考值的方法，所述参考值代表：

(a)受试者患有氧化应激相关皮肤病的诊断，或者

(b)受试者不患有氧化应激相关皮肤病的诊断，

所述方法可以包括：

(i)测量以下中的RoxP和/或痤疮丙酸杆菌的量：

a.来自诊断为患有氧化应激相关皮肤病的一个或多个受试者的一个或多个皮肤样品，或者

b.来自诊断为未患有氧化应激相关皮肤病的一个或多个受试者的一个或多个皮肤样品，和

(ii)将RoxP和/或痤疮丙酸杆菌的量存储：

a.为代表受试者患有氧化应激相关皮肤病的诊断的参考值，如“(i)a.”中所测量的，或者

b.为代表受试者未患有氧化应激相关皮肤病的诊断的参考值，如“(i)b.”中所测量的。

通过实例，用于建立RoxP和/或痤疮丙酸杆菌的量的参考值的方法，所述参考值代表：

(a)受试者会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的指示，或者

(b)受试者将不会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的指示，

所述方法可以包括：

(i)测量来自多位受试者(如优选地，未患有氧化应激相关疾病的受试者)的一个或多个皮肤样品中的RoxP和/或痤疮丙酸杆菌的量，并确定所述皮肤样品中RoxP和/或痤疮丙酸杆菌的平均或中值量，和

(ii)RoxP和/或痤疮丙酸杆菌的量：

a.小于如“(i)”中所测量的平均或中值量，则存储为指示受试者会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的参考值，或者

b.等于或高于如“(i)”中所测量的平均或中值量，则存储为指示受试者可能不受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的参考值。

值之间如样品中所获得的值和参考值之间的比较通常可以包括确定至少一种差异的存在或不存在和可选地所比较的值之间的这种差异的幅度的任何方式。比较可以包括测量的目视检查、算术或统计比较。这些统计比较包括但不限于应用规则。

在一个实施方式中，如本文所预期的参考值可以表达如本文所预期的生物标志物的绝对量。在另一个实施方式中，可以相对于参考值直接确定来自测试受试者的样品中的生物标志物的量(例如，就升高或降低或者升高倍数或降低倍数而言)。有利地，这可以允许来自受试者的样品中的生物标志物的量与参考值相比较(换言之，允许测量来自受试者的样品中的生物标志物相对于参考值的相对量)，而无需首先确定生物标志物的各个绝对量。

第一值距第二值的“偏差”通常可以涵盖任何方向(例如，提高：第一值>第二值；或者降低：第一值<第二值)和任何程度的变化。

例如，偏离可以涵盖相对于正在进行比较的第二值，第一值降低但不限于至少约10％(约0.9-倍或更少)，或者至少约20％(约0.8-倍或更少)，或者至少约30％(约0.7-倍或更少)，或者至少约40％(约0.6-倍或更少)，或者至少约50％(约0.5-倍或更少)，或者至少约60％(约0.4-倍或更少)，或者至少约70％(约0.3-倍或更少)，或者至少约80％(约0.2-倍或更少)，或者至少约90％(约0.1-倍或更少)。

例如，偏离可以涵盖相对于正在进行比较的第二值，第一值升高但不限于至少约10％(约1.1-倍或更多)，或者至少约20％(约1.2-倍或或更多)，或者至少约30％(约1.3-倍或更多)，或者至少约40％(约1.4-倍或更多)，或者至少约50％(约1.5-倍或更多)，或者至少约60％(约1.6-倍或更多)，或者至少约70％(约1.7-倍或更多)，或者至少约80％(约1.8-倍或更多)，或者至少约90％(约1.9-倍或更多)，或者至少约100％(约2-倍或更多)，或者至少约150％(约2.5-倍或更多)，或者至少约200％(约3-倍或更多)，或者至少约500％(约6-倍或更多)，或者至少约700％(约8-倍或更多)等。

优选地，偏差可以表示统计学显著的所观察到的变化。例如，偏差可以表示超出给定群体中参考值的误差容限的所观察到的变化(例如，如通过标准偏差或标准误差，或者通过其预定多倍所表示的，例如，±1×SD或者±2×SD或者±1×SE或者±2×SE)。偏差还可以表示超出给定群体中的值所定义的参考范围的值(例如，超出包括所述群体中的值的≥40％，≥50％，≥60％，≥70％，≥75％，或者≥80％，或者≥85％，或者≥90％，或者≥95％，或者甚至≥100％的范围)。

在其它实施方式中，如果所观察到的变化超过给定阈值或截止值，则可以做出偏差的结论。如本领域中通常已知的，可以选择该阈值或截止值以提供预测方法的所选灵敏度和/或特异性，例如，至少50％，或者至少60％，或者至少70％，或者至少80％，或者至少85％，或者至少90％，或者至少95％的灵敏度和/或特异性。

例如，受试者工作特性(ROC)曲线分析可以基于可接受的灵敏度和特异性，或者本身熟知的相关性能量度，如阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、阳性似然比(LR+)、阴性似然比(LR-)、Youden指数或类似量度来用于选择给定生物标志物的量的最优截止值。

这种比较可以显示在来自受试者的样品中所测量的如本文所教导的任何一个或多个生物标志物的量和给定参考值之间的偏差或无偏差的存在或不存在。

在某些优选的实施方式中，与代表不存在氧化应激相关皮肤病的诊断(即健康状态)的参考值相比，来自受试者的皮肤样品中的RoxP的量可能降低。因此所降低的量可以允许诊断受试者患有氧化应激相关皮肤病和/或会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用。

在某些优选的实施方式中，与代表不存在氧化应激相关皮肤病(即健康状态)的诊断的参考值相比，来自受试者的皮肤样品中的痤疮丙酸杆菌的量可能降低。因此所降低的量可以允许诊断受试者患有氧化应激相关皮肤病和/或会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用。

在某些优选的实施方式中，与健康受试者群体中的RoxP的平均或中值量相比，来自受试者的皮肤样品中的RoxP的量可能降低。因此所降低的量可以允许做出以下结论：受试者患有氧化应激相关皮肤病或处于患氧化应激相关皮肤病的风险和/或会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用。

在某些优选的实施方式中，与健康受试者群体中的痤疮丙酸杆菌的平均或中值量相比，来自受试者的皮肤样品中的痤疮丙酸杆菌的量可能降低。因此所降低的量可以允许做出以下结论：受试者患有氧化应激相关皮肤病或处于患氧化应激相关皮肤病的风险和/或会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用。

在某些优选的实施方式中，可以相对于该皮肤样品中的其它微生物，并且更具体地细菌、分类单元如属或种评价皮肤样品中痤疮丙酸杆菌的量(例如，丰度％，如通过16SrRNA基因的深度测序的丰度％)。例如，相对于选自考克氏菌属(Kocuria)、棒状杆菌(Corynebacterium)、细球菌属(Micrococcus)或葡萄球菌属(Staphylococcus)的一个或多个属。例如，与健康受试者群体中的痤疮丙酸杆菌的平均或中值相对丰度(％)量相比，来自受试者的皮肤样品中的痤疮丙酸杆菌的相对丰度(％)可能降低。因此所降低的相对丰度可以允许做出以下结论：受试者患有氧化应激相关皮肤病或处于患氧化应激相关皮肤病的风险和/或会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用。

在某些优选的实施方式中，可以相对于皮肤样品中的其它痤疮丙酸杆菌型或亚型评估痤疮丙酸杆菌型或亚型的量(例如，丰度％，如通过16SrRNA基因的深度测序的丰度％)。因此，在某些实施方式中，所述方法和用途还可以包括确定来自受试者的皮肤样品中两种或更多种痤疮丙酸杆菌型(例如，种系型)、MLST型、SLST型或株的相对量。例如，与健康受试者群体中的痤疮丙酸杆菌I型相对于II型的平均或中值丰度相比，来自受试者的皮肤样品中的痤疮丙酸杆菌I型相对于II型的丰度(例如，I型/II型的比值)可能降低。所降低的痤疮丙酸杆菌I型相对于II型的丰度可以允许做出以下结论：受试者患有氧化应激相关皮肤病或处于患氧化应激相关皮肤病的风险和/或会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用。

在某些优选的实施方式中，可以按绝对值或者相对于所有或者相对于一个或多个或所有其它RoxP启动子序列、RoxP-35盒序列和/或RoxP-10盒序列(例如，相对于所有或者相对于一个或多个或所有其它图8中所示的RoxP启动子序列、RoxP-35盒序列和/或RoxP-10盒序列)来评估一个或多个RoxP启动子序列、RoxP-35盒序列和/或RoxP-10盒序列(例如，图8中所示的一个或多个RoxP启动子序列、RoxP-35盒序列和/或RoxP-10盒序列)的量。例如，可以按绝对值或者相对于所有RoxP启动子序列或者相对于一个或多个或所有与低的RoxP比较低的RoxP表达有关的RoxP启动子序列(如图8中SEQ ID NO：5-6的那些)来评估与比较高的RoxP表达有关的一个或多个RoxP启动子序列(如图8中SEQ ID NO：7-12的那些)的量。这些数据为皮肤样品中存在的产生RoxP的痤疮丙酸杆菌的能力提供了信息。

在某些优选的实施方式中，可以按绝对值或相对于所有RoxP编码序列或者相对于一个或多个或所有其它RoxP编码序列(例如，相对于所有图10中所示的RoxP编码序列类型或者相对于一个或多个或所有其它所述RoxP编码序列类型)来评估一个或多个RoxP编码序列(例如，图10中所示的一个或多个RoxP编码序列类型)的量。例如，可以按绝对值或相对于图10中鉴定的所有RoxP编码序列类型或者相对于如图10中所鉴定的第一类和第三类中之一或两者来评估属于如图10中所鉴定的第二类(例如，含有KPA171202RoxP编码序列)的一个或多个RoxP编码序列类型的量。这些数据为皮肤样品中存在的产生RoxP的痤疮丙酸杆菌的能力提供了信息。

可以通过在本说明书中其它处所提及的用于生物样品中核酸测量的已知定量方法如但不限于定量PCR，如微滴式数字PCR来确定皮肤样品中一个或多个RoxP启动子类型和/或RoxP编码序列类型的绝对量。可以通过已知方法如启动子或编码序列扩增子的扩增和通常以高测序深度测序以及向所述一个或多个RoxP启动子类型和/或RoxP编码序列类型的定量分配序列读数来确定皮肤样品中一个或多个RoxP启动子类型和/或RoxP编码序列类型的相对量。

因此，还公开了用于诊断受试者中氧化应激相关皮肤病或者用于确定受试者是否会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的方法，该方法包括确定来自受试者的皮肤样品中一个或多个RoxP编码序列类型和/或RoxP启动子类型的绝对或相对量。

在某些优选的实施方式中，还可以评估皮肤样品中所测量的痤疮丙酸杆菌分泌的RoxP的量。因此，在某些实施方式中，所述方法和用途还可以包括确定来自受试者的皮肤样品中痤疮丙酸杆菌分泌的RoxP的量。

例如，与健康受试者群体中的相应测量值相比，来自受试者的皮肤样品中的由痤疮丙酸杆菌产生的RoxP的整体量或者高-RoxP表达痤疮丙酸杆菌型、亚型或株相对于平均或低RoxP表达痤疮丙酸杆菌型、亚型或株的相对丰度可能降低。因此减低的由痤疮丙酸杆菌所产生的RoxP的整体量或者高-RoxP表达痤疮丙酸杆菌型、亚型或株的相对丰度可以允许做出以下结论：受试者患有氧化应激相关皮肤病或处于患氧化应激相关皮肤病的风险和/或会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用。

在某些实施方式中，本发明的方法和用途还可以包括相同受试者的受影响的皮肤区域相对于未受影响的皮肤区域。

因此，用于诊断受试者中氧化应激相关皮肤病的方法的某些实施方式可以包括：

a)确定来自怀疑受氧化应激相关皮肤病影响的受试者的皮肤区域的样品中的RoxP的量；

b)确定来自受试者皮肤的健康区域的样品中的RoxP的量；和

c)比较步骤a)和b)中确定的RoxP的量；

其中与步骤b)中所确定的RoxP的量相比，步骤a)中确定的较低的RoxP的量表示所述受试者患有氧化应激相关皮肤病或者处于患氧化应激相关皮肤病的风险。

用于诊断受试者中氧化应激相关皮肤病的方法的某些其它实施方式可以包括：

a)确定来自怀疑受氧化应激相关皮肤病影响的受试者的皮肤区域的样品中痤疮丙酸杆菌I型、II型和III型株的量；

b)确定来自受试者皮肤健康区域的样品中痤疮丙酸杆菌I型、II型和III型株的量；和

c)比较步骤a)和b)中确定的痤疮丙酸杆菌I型、II型和III型株的量；

其中与来自受试者皮肤的健康区域的样品中痤疮丙酸杆菌I型株的相对量相比，来自怀疑受氧化应激相关皮肤病影响的受试者皮肤区域的样品中痤疮丙酸杆菌I型株的较低相对量表明受试者患有氧化应激相关皮肤病或者处于患氧化应激相关皮肤病的风险。

还考虑了伴随诊断和个性化医学方法，其使用本发明的诊断或益处评估方法或用途来将受试者选择作为患有氧化应激相关皮肤病或处于患氧化应激相关皮肤病的风险或者作为会受益于分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用或RoxP的施用的受试者。所选择的受试者可以经历本文所公开的预防或治疗干预，包括分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用或者RoxP或其生物活性变体或片段的施用。

因此，一个方面提供了用于在预防或治疗受试者中氧化应激相关皮肤病的方法中使用的包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的组合物，其中已通过本文所公开的方法将所述受试者选择作为患有氧化应激相关皮肤病或者处于患氧化应激相关皮肤病的风险。相关方面提供了用于预防或治疗对其有需要的受试者中氧化应激相关皮肤病的方法，所述方法包括向所述受试者的皮肤施用预防或治疗有效量的包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的组合物，其中已通过本文所公开的方法将所述受试者选择作为患有氧化应激相关皮肤病或者处于患氧化应激相关皮肤病的风险。另一个相关方面提供了包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的组合物用于生产用于在预防或治疗受试者中氧化应激相关皮肤病的方法中使用的药剂的用途，其中已通过本文所公开的方法将所述受试者选择作为患有氧化应激相关皮肤病或者处于患氧化应激相关皮肤病的风险。其它相关方面提供了包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的组合物用于预防或治疗受试者中的氧化应激相关皮肤病的用途，其中已通过本文所公开的方法将所述受试者选择作为患有氧化应激相关皮肤病或者处于患氧化应激相关皮肤病的风险。

另一个方面提供了一种方法，包括向受试者施用分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株，其中已通过本文所公开的方法将所述受试者选择作为会受益于分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的受试者。

另一个方面提供了用于在预防或治疗受试者中的氧化应激相关皮肤病的方法中使用的包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物，其中已通过本文所公开的方法将所述受试者选择作为患有氧化应激相关皮肤病或者处于患氧化应激相关皮肤病的风险。相关方面提供了用于预防或治疗对其有需要的受试者中氧化应激相关皮肤病的方法，所述方法包括向所述受试者的皮肤施用预防或治疗有效量的包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物，其中已通过本文所公开的方法将所述受试者选择作为患有氧化应激相关皮肤病或者处于患氧化应激相关皮肤病的风险。另一个相关方面提供了包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物用于生产用于在预防或治疗受试者中氧化应激相关皮肤病的方法中使用的药剂的用途，其中已通过本文所公开的方法将所述受试者选择作为患有氧化应激相关皮肤病或者处于患氧化应激相关皮肤病的风险。其它相关方面提供了包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物用于预防或治疗受试者中的氧化应激相关皮肤病的用途，其中已通过本文所公开的方法将所述受试者选择作为患有氧化应激相关皮肤病或处于患氧化应激相关皮肤病的风险。

其它方面提供了一种方法，包括向受试者施用包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物，其中已通过本文所公开的方法将所述受试者选择作为会受益于RoxP的施用的受试者。

因此，本申请还提供了如以下清单中所给出的方面和实施方式：

清单1.包含分泌RoxP(痤疮丙酸杆菌的自由基氧合酶)的活痤疮丙酸杆菌株的组合物用于预防或降低受试者中皮肤衰老的美容用途。

清单2.用于在预防或治疗氧化应激相关皮肤病的方法中使用的组合物，包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株。

清单3.根据清单2的用于使用的组合物，其中氧化应激相关皮肤病选自包括以下的组：光化性角化病(AK)、基底细胞癌(BCC)、鳞状细胞癌(SCC)、头皮屑、皮脂溢性皮炎、痤疮、炎症、皮炎、银屑病、湿疹、红斑痤疮、荨麻疹和白癜风。

清单4.根据清单1的用途或者根据清单2或3的用于使用的组合物，其中痤疮丙酸杆菌株内源分泌RoxP。

清单5.根据清单1或4的用途或者根据清单2至4中任一项的用于使用的组合物，其中痤疮丙酸杆菌株不是基因工程化的。

清单6.根据清单1、4或5的用途或者根据清单2至5中任一项的用于使用的组合物，其中所述组合物包含两种或更多种分泌RoxP的痤疮丙酸杆菌株。

清单7.根据清单1或4至6中任一项的用途或者根据清单2至5中任一项的用于使用的组合物，其中当在稳定期测量时，痤疮丙酸杆菌株分泌至少1μg RoxP/mL培养基，或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株单独或一起分泌至少1μg RoxP/mL培养基。

清单8.根据清单1或4至7中任一项的用途或根据清单2至7中任一项的用于使用的组合物，其中痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种的内源RoxP启动子包含-10盒和/或-35盒，-10盒具有选自TGCTATACT或TGCTACACT，优选地TGCTATACT的序列，-35盒具有选自ACTTCGAT或ACTTCAAT的序列。

清单9.根据清单1或4至8中任一项所述的用途或者根据清单2至8中任一项的用于使用的组合物，其中痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种各自独立地为I、II或III型，优选地IA、IB或III型。

清单10.根据清单1或4至8中任一项的用途或者根据清单2至8中任一项的用于使用的组合物，其中痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株中的至少一种各自独立地为SLST A、C、G、H、L或K型。

清单11.根据清单1或4至10中任一项的用途或者根据清单2至10中任一项的用于使用的组合物，其中痤疮丙酸杆菌株或者两种或更多种痤疮丙酸杆菌株单独或一起以每克所述组合物至少100个菌落形成单位(CFU)的量存在于组合物中。

清单12.根据清单1或4至11中任一项的用途或者根据清单2至11中任一项的用于使用的组合物，其中所述组合物配置用于向皮肤局部施用，如其中所述组合物是凝胶剂、乳膏剂、软膏剂、洗剂、滴剂、喷雾剂，包括气溶胶喷雾剂、泡沫剂或粉末剂，可选地其中所述组合物包含在面膜、衬垫、贴片(patch)、双室装置或化妆品中。

清单13.包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物用于预防或降低受试者中皮肤衰老的美容用途。

清单14.用于在预防或治疗氧化应激相关皮肤病的方法中使用的组合物，包含RoxP或其生物活性变体或片段。

清单15.根据清单14的用于使用的组合物，其中氧化应激相关皮肤病选自包括以下的组：AK、BCC、SCC、头皮屑、皮脂溢性皮炎、痤疮、炎症、皮炎、银屑病、湿疹、红斑痤疮、荨麻疹和白癜风。

清单16.根据清单13的用途或者根据清单14或15的用于使用的组合物，其中组合物包含培养的分泌RoxP，优选地内源分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的上清液或上清液的RoxP富集部分。

清单17.根据清单14至16中任一项的用于使用的组合物，其中所述组合物包含至少1×10

清单18.根据清单13或16至17中任一项的用途或者根据清单14至17中任一项的用于使用的组合物，其中所述组合物配置用于向皮肤局部施用，如其中所述组合物是凝胶剂、乳膏剂、软膏剂、洗剂、滴剂、喷雾剂，包括气溶胶喷雾剂、泡沫剂或粉末剂，可选地其中所述组合物包含在面膜、衬垫、贴片、双室装置或化妆品中。

清单19.一种用于诊断受试者中氧化应激相关皮肤病或者用于确定受试者是否会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的方法，所述方法包括确定来自受试者的皮肤样品中RoxP的量或者痤疮丙酸杆菌的量。

清单20.根据清单19的方法，包括：

(A)(a)确定来自受试者的皮肤样品中RoxP的量或者痤疮丙酸杆菌的量；

(b)将所确定的RoxP的量或者所确定的痤疮丙酸杆菌的量与参考值相比较，所述参考值代表已知的氧化应激相关皮肤病的诊断；

(c)找出所确定的RoxP的量或所确定的痤疮丙酸杆菌的量与所述参考值的偏差或无偏差；

(d)将所述偏差或无偏差的发现归因于受试者中氧化应激相关皮肤病的具体诊断；

或者

(B)(a)确定来自受试者的皮肤样品中RoxP的量或者痤疮丙酸杆菌的量；

(b)将所确定的RoxP的量或者所确定的痤疮丙酸杆菌的量与参考值相比较，所述参考值代表已知的RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用益处的指示；

(c)找出所确定的RoxP的量或所确定的痤疮丙酸杆菌的量与所述参考值的偏差或无偏差；

(d)将所述偏差或无偏差的发现归因于受试者是否会受益于RoxP或分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的具体指示。

清单21.根据清单19或20的方法，还包括确定来自受试者的皮肤样品中由所述痤疮丙酸杆菌所分泌的RoxP的量。

清单22.根据清单19或20的方法，还包括确定来自受试者的皮肤样品中两种或更多种痤疮丙酸杆菌类型、MLST类型、SLST类型或株的相对量。

清单23.根据清单19或20的方法，其中所述氧化应激相关皮肤病选自包括以下的组：AK、BCC、SCC、头皮屑、皮脂溢性皮炎、痤疮、炎症、皮炎、银屑病、湿疹、红斑痤疮、荨麻疹和白癜风。

清单24.用于在预防或治疗受试者中的氧化应激相关皮肤病的方法中使用的包含分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的组合物，其中通过清单19至23中任一项的方法，将受试者选择为患有氧化应激相关皮肤病或者处于患氧化应激相关皮肤病的风险。

清单25.一种方法，包括向受试者施用分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株，其中通过清单19至23中任一项的方法将受试者选择为会受益于分泌RoxP的活痤疮丙酸杆菌株的施用的受试者。

清单26.用于在预防或治疗受试者中氧化应激相关皮肤病的方法中使用的包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物，其中通过清单20至22中任一项的方法，将受试者选择为患有氧化应激相关皮肤病或者处于患氧化应激相关皮肤病的风险。

清单27.一种方法，包括向受试者施用包含RoxP或其生物活性变体或片段的组合物，其中通过清单19至23中任一项的方法将受试者选择为会受益于RoxP的施用的受试者。

尽管已结合其具体实施方式描述了本发明，但是显然根据以上描述，多种替代方案、改变或变化将对本领域技术人员是显而易见的。因此，它旨在以所附权利要求的精神和广泛范围包含以下所有这些替代方案、改变或变化。

通过以下非限制性实施例进一步支持了本文所公开的本发明的方面和实施方式。

实施例

实施例1至6中使用的材料和方法

菌株和培养

将痤疮丙酸杆菌分离株(以I、II和III型株为代表)在37℃、在厌氧条件下在Wilkins-Chalgren厌氧菌肉汤(WC)中生长直至到达指数期(1-3天)或稳定期(5-7天)。有关具体的痤疮丙酸杆菌株和它们的分离株的其它信息可见于Homberg等人，2009ClinMicrobiol Infect 15:787-95，并且有关它们各自的RoxP同源物的信息可见于Allhorn等人，2016Sci Rep 6:36412。例如，分离株包括痤疮丙酸杆菌株KPA171202，其以登录号DSM-16379公开可得自Leibniz学会DSMZ-德国微生物和细胞培养物保藏中心。以登录号NC_006085.1/AE017283.1在Genbank中注释了痤疮丙酸杆菌KPA171202的完整基因组。分离株还包括痤疮丙酸杆菌defendens亚种株，其以登录号ATCC 11828公开可得自美国模式培养物保藏所(ATCC)。以登录号NC_017550.1/CP003084.1在Genbank中注释了痤疮丙酸杆菌ATCC 11828的完整基因组。分离株还包括以登录号ATCC 6919公开可得自ATCC的痤疮丙酸杆菌株。以登录号NZ_CP023676.1/CP023676.1在Genbank中注释了痤疮丙酸杆菌ATCC6919的完整基因组。分离株还包括以登录号DSM 1897公开可得自DSMZ的痤疮丙酸杆菌株。分离株还包括以下痤疮丙酸杆菌株，其完整基因组已以各自登录号在Genbank中注释：SK137(NC_014039.1/CP001977.1)、266(NC_017534.1/CP002409.1)、6609(NC_017535.1/CP002815.1)、P.acn33(NC_016516.1/CP003195.1)、P.acn17(NC_016512.1/CP003196.1)、P.acn31(NC_016511.1/CP003197.1)、C1(NC_018707.1/CP003877.1)、HL096PA1(NC_021085.1/CP003293.1)、hdn-1(NZ_CP006032.1/CP006032.1)、KCOM 1861(＝ChDC B594)(NZ_CP012647.1/CP012647.1)、PA_15_1_R1(NZ_CP012355.1/CP012355.1)、PA_21_1_L1(NZ_CP012351.1/CP012351.1)、PA_15_2_L1(NZ_CP012352.1/CP012352.1)、PA_12_1_L1(NZ_CP012354.1/CP012354.1)、KCOM 1315(NZ_CP031442.1/CP031442.1)、PA_30_2_L1(NZ_CP012350.1/CP012350.1)、PA_12_1_R1(NZ_CP012353.1/CP012353.1)、Al-14(NZ_CP013693.1/CP013693.1)。总计，已分析了155个可得自上述来源的痤疮丙酸杆菌分离株或基因组序列。

roxP基因表达的qPCR分析

按照生产商的说明，使用补充有细菌保护试剂(Qiagen)的

使用与处于无核酸酶水中的10ng RNA和100nM引物溶液以1:1(v/v)混合的Power

roxP：5’-GCATCTAGCCCTCTCACCAT-3’(SEQ ID NO：13)和

5’-CTGAGAGTCCGGTAGGTGGT-3’(SEQ ID NO：14)；

gapdh：5’-GCATCATGACTACCGTCCAC-3’(SEQ ID NO：15)和5’-CGGTGGTCTCCTTAGAGGTC-3’(SEQ ID NO：16)。

在iCycler

RoxP表达酵母载体的产生

将来自痤疮丙酸杆菌株KPA171202的roxP的截短版本(氨基酸残基24-161，省略N末端信号肽)扩增(引物：5’-GGCTGAAGCTGAATTCACACCCATCGATGAGAGCCAAC-3’(SEQ ID NO:17)加5’-GATGATGATGGTCGACTCCTGCTGCGCCGTTGAGGGCGGGATCCACC-3’(SEQ ID NO:18))以产生含有C末端GAAG接头的roxP片段并克隆至pPICZαA载体(ThermoFisher Scientific)的EcoRI和Sail位点。将序列验证的线性化质粒用于转染SuperMan5巴斯德毕赤氏酵母。

重组RoxP(rRoxP)的表达

将收获前述载体所产生的SuperMan5巴斯德毕赤氏酵母株等分并储存在-80℃补充有50％(v/v)甘油的YPD培养基中。对于重组蛋白的有效表达，将融化的冷冻培养物在缓冲的甘油-复合物培养基(BM*(70％，v/v)、0.5M钾缓冲液pH 6.0(10％，v/v)、YNB(1.4％，w/v)、>99％甘油(1％，v/v)、生物素(4×10

*BM：酵母提取物(1.4％，w/v)、蛋白胨(2.9％，w/v)、CAS氨基酸(1.4％，w/v)。

rRoxP的纯化

随后，以800×g离心10min并通过0.22μm过滤器，根据生产商的说明，将酵母上清液加载到镍柱(His Gravitrap

晶胶化

Ertürk等人(2013J Mol Recognit 26:633-642)先前已描述了用于晶胶化的方法。简要地，将官能化单体N-甲丙烯酰-1-组氨酸甲酯(1mM)和模板RoxP(1mM)溶于去离子水中以用于预复合。同时制备2-羟乙基甲基丙烯酸酯(20mM)(1:1v/v)。然后，将单体溶液与等体积的交联剂N,N’-亚甲基双丙烯酰胺(最终浓度90mM)混合，并用一氧化氮吹扫反应混合物。随后，通过添加过硫酸铵(4.4mM)和N,N,N’,N’-四亚甲基乙二胺(0.125％)开始聚合反应。将所得溶液等分至4×5ml下端出口封闭的塑料注射器(

天然RoxP的纯化

按照先前描述的硫酸铵沉淀和离子交换层析程序，从稳定期痤疮丙酸杆菌KPA171202培养基中纯化主要RoxP变体(Allhorn等人，2016Sci Rep 6:36412)。从痤疮丙酸杆菌AD24培养基的纯化不太常见的变体需要使用更灵敏的技术。使用蠕动泵(1mL/min)使稳定期痤疮丙酸杆菌AD24的硫酸铵(80％)蛋白部分通过预平衡的晶胶柱。为了使得天然RoxP能够吸收，在连续搅拌条件下使该蛋白部份反复通过凝胶1h。使用咪唑缓冲液(20mM磷酸钠，500mM NaCl，500mM咪唑，pH 7.4)洗脱结合的RoxP并且分别通过

ABTS自由基阳离子测定

使用Re等人(1999Free Radic Biol Med 26:1231-1237)先前所述的分光光度测定，分析在存在RoxP的情况下预形成的ABTS自由基阳离子的减少。开始将2,2’-联氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐(ABTS)(Sigma-Aldrich)溶于ddH

细胞培养

将人角化细胞(HaCat细胞；在Boukamp等人1988J Cell Biol 106:761-71中公开并得自Deutsches Krebsforschungszentrum，DKFZ，info@cell-lines-service.de；并且例如还可商购自Addexbio，San Diego，CA，目录号T0020001)在补充有L-谷氨酰胺、EGF(表皮生长因子)和牛垂体提取物(Gibson，Invitrogen)的SFM培养基中在96-孔板(Nunc A/S，Roskilde，丹麦)中生长直至90％融合。将人单核细胞(THP-1细胞；在Tsuchiya等人，1980Int J Cancer 26:171-6中公开；例如可商购自Sigma-Aldrich，目录号88081201；由隆德大学的Arne Egesten博士友好提供)在补充有Glutamax-1(

MTT测定

将培养至90％融合的HaCat细胞或在96-孔板中的THP-1细胞(1.2×10

皮肤拭子的采集

在2016年11月至2017年5月之间，在瑞典隆德大学医院皮肤病科采集样品。邀请面部、颈部、上胸部或肩部区域临床怀疑有光化性角化病(AK)或者浅表性/结节性基底细胞癌(BCC)的患者(n＝54，年龄在50-70岁)参与。

表1.患者特征和所选的基线值。使用单因素方差分析检验比较患者组。

AK：光化性角化病。BCC：基底细胞癌。*统计学显著。

用缓冲液预浸泡的拭子在病灶区(4cm

使用电容生物传感器分析皮肤拭子样品中的RoxP浓度

应用Ertürk等人(2018PLoS ONE 13:e0193754)先前所描述的分子印迹技术，在电容式生物传感器上分析采集自健康志愿者或AK/BCC患者的样品中的RoxP丰度。为了解释任何可能的背景，开始从在磷酸钠缓冲液(10mM，pH 7.4)中1:100(v/v)稀释的RoxP加样(0.14-0.71mM)的模拟(mock)皮肤拭子(Venturi Transystem，Copan，意大利)获得了校准曲线。随后，通过离心(15min，4000×g)除去来自患者拭子的细胞和碎片，将上清液在磷酸钠缓冲液中以1:100(v/v)稀释并最终注入电容系统，重复三次。在混合前，将校准曲线用于确定每个样品中的RoxP浓度，并且分别作为健康皮肤、AK和BCC的丰度作图。

从皮肤拭子制备DNA

将来自患者和健康个体的具有皮肤拭子的棉签在4℃储存过夜。通过离心(5000g，10min)从液体储存缓冲液收集细胞材料并使用Qiagen DNeasy提取DNA。通过

DNA测序和生物信息学分析

为了确定皮肤微生物组学，扩增16S rRNA基因的V1-V3区，并使用通过Eurofins(德国)实施的Illumina技术，对扩增子进行深度测序。为了降低读序的差错率，使用Mothursoftware vl.39.1并按照MiSeq SOP，以一些修改进行来自Illumina平台的原始读序的处理。起初，使用命令“make.contig”将末端配对读序组合(Kozich等人，2013Applied andenvironmental microbiology 79:5112-20)。然后，将组合的读序修剪掉引物序列，并且从进一步分析中排除含有模糊的碱基或者含有大于8个均聚物较长延伸的序列。然后，将读序对Silva参考比对v128进行比对，并且过滤掉产生的比对，使得所有读序仅重叠相同区域。为了进一步减少测序错误数，实施了预聚类步骤，该步骤实施了Huse等人(2010Environmental microbiology 12(7):1889-98)最初开发的假单连接算法，其中“diff”变量设置为4。使用Mothur中UCHIME算法的内置版本除去嵌合体(Edgar等人，2011Bioinformatics 27:2194-200)。最后，在最终分析之前除去所有单基因(singleton)、重复基因(duplicate)和三重基因(triplicate)以排除包括在先前步骤中未检测到的来自可能的污染或序列错误的序列。然后，使用贝叶斯法和来自人类口腔微生物组学数据库(HOMD)(http://www.homd.org/)的taxonomic outline v14.51，通过手动包括相关皮肤细菌，以classify.seqs命令对所产生的读序分类(Chen等人，2010Database:the journal ofbiological databases and curation baq013)。置信度截止值设置为80％。将线性判别分析(LDA)与效应量测量(LEfSe)结合以检测组间丰度差异的细菌分类单元(门、属、种)。将因子克鲁斯卡尔-沃利斯和配对Wilcoxon检验的α值设置为0.05，并且将判别特征的LDA得分阈值设置为3.5。使用LEfSe程序的在线版本(Segata等人，2011Genome Biology 12:R60)。

为了确定皮肤拭子样品中的痤疮丙酸杆菌群体的种系型，我们使用了先前建立的SLST法(Scholz等人，2014PLoS ONE 9:el04199)。对SLST扩增子进行了通过Eurofins(德国)实施的MiSeq测序。将所有高质量序列读序对分配至SLST等位基因；所有目前已知的SLST等位基因在www.medbac.dk/slst/pacnes上可访问。

实施例1：roxP的表达取决于痤疮丙酸杆菌种系型

在所有主要的痤疮丙酸杆菌种系型中通过实时定量PCR(qPCR)确定了roxP表达率。与大多数种系型II或III株相比，将痤疮丙酸杆菌分离株鉴别为显示出显著更高的roxP表达水平的种系型I(图1)。下表2提供了在图1中潜在显示的实验中所使用的株的群组。倍数变化代表了所获得的值，其对gapdh归一化并且与对于痤疮丙酸杆菌株266所观察到的roxP表达有关。

表2：在图1中潜在显示的实验中所使用的株的群组。

各个启动子区的测序显示了RoxP上游区的8个主要序列的存在(图9)并且进一步显示了II型株中的碱基替换，其影响所预测的roxP启动子的-35区，从而潜在地使得能够不利地影响转录速率(图8)。155个测序的痤疮丙酸杆菌基因组的比较显示大部分种系型I株共有与高表达有关的相同的roxP上游区，而大部分种系型II株的roxP上游区是独特的(图9)。-35序列ACTTCGAT或ACTTCAAT对于实现相对更高的RoxP表达似乎是优选的。-10序列TGCTATACT对于实现相对更高的RoxP表达似乎是优选的，而-10序列TGCTACACT还实现了相对好的RoxP表达。

还研究了株的好氧/厌氧生长能力。尽管大部分种系型I株显示出roxP表达升高(与在好氧和厌氧环境中同等生长的能力有关)，但是低roxP表达导致在富氧环境中生长的降低或延迟(图2)。

实施例2：RoxP同源物显示出相当的抗氧化活性

尽管RoxP高度保守，其中在大多数分离株(约93％)中具有99-100％的氨基酸同一性，但是分类为痤疮丙酸杆菌种系型II和III的株亚型(约7％)表达更远的相关蛋白，其具有约83％的氨基酸同一性(图10)。比较了不同的RoxP同源物的还原活性。可以从痤疮丙酸杆菌KPA171202培养基中成功分离主要变体(IB型)并且从痤疮丙酸杆菌AD24培养基分离不常见的同源物(II型)。使用印记了重组RoxP的大孔晶胶纯化后者(图11)，然后通过免疫印迹分析验证蛋白身份(数据未显示)。如通过734nm的吸光度降低所示，两种同源物能够以相等效率还原阳离子ABTS

实施例3：在严苛条件下维持RoxP的抗氧化活性

RoxP显示出浓度依赖性还原活性(图4A)，在存在CaCl

实施例4：RoxP可以保护人细胞免遭体外氧化损伤

为了研究RoxP在生物系统中还原自由基的能力，我们将人细胞暴露于氧化(使用百草枯)并研究了RoxP从致命的氧化应激中挽救细胞的能力。即使以连续方式以1:400的比(RoxP：氧化剂)添加，RoxP完全抑制了百草枯的不利氧化效果(图5)。所述效果在单核细胞中更显著，而角化细胞对氧化和抗氧化两者的反应均不太好(图5A-B)。值得注意地，RoxP还可以提高人细胞在不存在所添加的抗氧化剂的情况下的整体存活力。

实施例5：在与氧化应激有关的皮肤病中RoxP不太丰富

研究了光化性角化病(AK)和基底细胞癌(BCC)中的RoxP蛋白丰度。从具有健康皮肤、具有癌前状况的AK和具有发展的BCC的个体，在受疾病影响和不受影响的区域两者获得皮肤拭子(n＝54)。随后，使用高灵敏度电容式生物传感器分析样品，其先前已显示检测到低至8.25ng RoxP/cm

实施例6：氧化皮肤病中失调的特征在于痤疮丙酸杆菌的出现率降低

在属、种和痤疮丙酸杆菌种系型水平研究了AK和BCC中的细菌组成。通过16S rDNA扩增子深度测序追踪的皮肤拭子显示与健康皮肤相比，患病皮肤中的丙酸杆菌属丰度显著降低而葡萄球菌属的丰度升高(图7A和图14)。在氧化疾病(AK)的急性期期间，痤疮丙酸杆菌出现率的降低似乎在疾病(BCC)晚期期间发展出了葡萄球菌种，具体地金黄色葡萄球菌的飙升(图7A)。通过单位点序列分型(SLST)对痤疮丙酸杆菌群体的进一步表征显示，具体的痤疮丙酸杆菌类型的出现率还在AK影响的皮肤中，并且在较小程度上在BCC影响的皮肤中改变(图7B)。属于痤疮丙酸杆菌II型的株可更常见地分离自患病皮肤区域，而健康皮肤区域显示出更接近于平均的I型株优势。

实施例7至11中使用的材料和方法

实施Synelvia SAS(Labege，法国)来测试含有RoxP的痤疮丙酸杆菌上清液(作为活性成分以10％v/v包括在培养基中)对重建人表皮(RHE)模型中的细胞应激物的保护效果。以下显示了相关分析结果。

活性成分

如下制备了含有RoxP的痤疮丙酸杆菌上清液。使H1株在20L发酵罐中，在37℃在适合的培养基中生长3天。然后，使用切向流过滤浓缩上清液。在第一步中，使用30kDa截留分子量，并且在第二步中，使用3kDa截留分子量。在iProminence HPLC(Shimadzu，东京，日本)上，使用TSKgel QC-PAK(Tosoh Bioscience，Griesheim，德国)，通过凝胶过滤分析最终浓缩物。浓缩物是80％纯的RoxP并且浓度为约2mM(～34mg/ml)。将5％v/v的纯甘油加入至产物中，然后在测定中使用前，将其储存在-80℃。将这种高度RoxP富集的痤疮丙酸杆菌上清液以10％v/v添加至介质中用于实验；则该介质含有约0.16mM的RoxP。

应激物和条件

臭氧分解反应诱导了几种产物，根据Criegee重排，其被称为主产物和副产物。所产生的主要臭氧化物分解成伯羰基(醛或酮)和羰基-O-氧化物(通常称为Criegee中间体)。副产物与母体分子在臭氧下反应以产生其它降解产物。臭氧分解反应还可以引起蛋白氧化或DNA损伤。

光氧化引起脂质和蛋白氧化、DNA损伤并且产生特定的氧化/降解产物如CPD或8-OHdG。

已测试了以下条件。

每种条件进行重复三次。

在细胞培养测定中使用前，无菌过滤活性成分(痤疮丙酸杆菌上清液)。

形态学评估

使用苏木精-伊红染色评估形态。

效力评价

实施例7：RoxP对UV应激的重建人表皮(RHE)的影响的形态学评估

在媒介物中以10％v/v的活性成分处理的RHE似乎更薄且具有异常基层和具有缺陷分化过程。的确，基础角化细胞未良好排列并且未显示出立方形状。此外，观察到透明角质粒数目减少和角化不全(角质层中核的保留)。最终，与未应激的RHE相比，用活性成分处理的RHE中的凋亡细胞(橙色细胞)数目升高。这种具体表型指示出媒介物中10％v/v浓度的活性成分的一定毒性。参见图15B。

实施例8：RoxP对UV应激的RHE的影响的DNA损伤/CPD评估

处理组织以使用红色荧光检测来从石蜡切片中检测环丁烷嘧啶二聚体(CPD)水平。用DAPI将核染成蓝色。短划线对应于RHE模型中的膜插入并且对应于人皮肤中的真皮表皮联结。图16中的比例尺＝50μm。

在具有活性成分(图16B)或不具有活性成分(图16A)的未应激的RHE中未观察到二聚体形成。在UV条件下，在RHE的成核层中形成了二聚化光产物(CPD)(图16C，D)。活性成分似乎减少了通过UV引起的DNA损伤(图16D，E)。

实施例9：RoxP对UV应激的RHE的影响的DNA损伤/8-OHdG评估

处理组织以使用红色荧光检测来从石蜡切片中检测8-羟基-2-脱氧鸟苷(8-OHdG)水平。用DAPI将核染成蓝色。短划线对应于RHE模型中的膜插入并且对应于人皮肤中的真皮表皮联结。图17中的比例尺＝50μm。

在无活性成分的未应激的RHE中检测到8-OHdG(图17A，E)。活性成分稍微提高了8-OHdG的产生(图17B，E)，其确认了在形态学评估中已观察到的活性成分在所选浓度下的有限毒性。

在UV下，整个成核层显示出具有强烈8-OHdG形成的DNA损伤(图17C-E)。活性成分似乎具有保护效果，伴随有8-OHdG检测降低(图17D-E)。

实施例10：系统脱毒评估(GPx分析)

使用来自BioAssay Systems(Hayward，CA)的比色试剂盒(EGPX-100)确定谷胱甘肽过氧化物酶活性。表3和图18中给出了结果。

表3.谷胱甘肽过氧化物酶活性的测量。

对于UV和臭氧应激两者，活性成分抑制了应激对GPX活性的影响。

实施例11：细胞凋亡评估(活性半胱天冬氨酸酶-3)

处理组织以使用红色荧光检测来从石蜡切片中检测活性半胱天冬氨酸酶-3水平。用DAPI将核染成蓝色。短划线对应于RHE模型中的膜插入并且对应于人皮肤中的真皮表皮联结。图19中的比例尺＝50μm。

在未应激的RHE且无活性成分的情况下，仅少数细胞显示出活性半胱天冬氨酸酶-3的免疫染色(图19A，E，柱#1)。在存在活性成分的情况下，半胱天冬氨酸酶-3轻微激活，这表明活性成分引起RHE中的细胞凋亡(图19B，E，柱#2)。在UV应激的情况下，从基层至棘层，半胱天冬氨酸酶-3强烈激活，这示出凋亡细胞(图19C，E，柱#3)。活性成分降低了基层中半胱天冬氨酸酶-3的激活(图19D，E，柱#4)。

实施例12：具有抗氧化活性的RoxP肽

在基本如上述实验中所描述的ABTS自由基阳离子测定中和在氧自由基吸收能力(ORAC)测定中测试了来源于RoxP的两种肽的抗氧化活性。

肽(在本文中表示为“RoxP-肽1”和“RoxP-肽2”)对应于SEQ ID NO：1中所示的天然RoxP蛋白的氨基酸位置66-83和128-140，并且如下复制，其中氨基酸位置对应于分别以加粗和加粗+斜体表示的RoxP-肽1和RoxP-肽2：

肽序列如下所示：

RoxP-肽1：VRADGYQESMVTRVLDDK(SEQ ID NO：20)，

RoxP-肽2：RTLSYCAYPHYVN(SEQ ID NO：21)。

图20A和B表明两种肽在ABTS测定中显示出抗氧化活性，其随肽浓度而升高。

ORAC测定测量了荧光分子如荧光素或β-藻红蛋白在与自由基产生剂如偶氮引发剂化合物如AAPH(2,2’-偶氮二(2-甲基丙脒)二盐酸盐)混合后的氧化降解。一旦热分解，偶氮引发剂通常产生过氧自由基，其引起氧化并借此使荧光分子的荧光淬灭。抗氧化剂的添加防止荧光分子的氧化降解，并且这种保护程度可以通过荧光计定量。有利地，过氧自由基通常存在于体内，其使得ORAC测定特别是为测试化合物的体内抗氧化性质提供信息。

在本发明的实施例中，如下实施了ORAC测定(Zenbio，序号AOX-2)：

在所提供的测定缓冲液中制备RoxP样品的稀释液。然后，将所有溶液和机器预热至37℃并将150μl工作荧光素溶液加入至具有透明底的黑色96孔板中。然后，将25μl样品加入至含有荧光素的孔中并将板在温育箱中在37℃避光放置10分钟。然后，添加25μl新鲜制备的AAPH溶液(2,2’-偶氮二-2-甲基丙脒二盐酸盐)并将板放入酶标仪中。以485nm激发和528至538nm之间发射的荧光模式进行读数。图21A和B表明两种肽在ORAC测定中显示出抗氧化活性，其随肽浓度而升高。

实施例13：RoxP抑制羟基自由基(·OH)的产生

脱氧核糖测定是测量生物系统中羟基产生和评价抗氧化剂减少·OH自由基产生能力的公认方法。这些测定描述于例如Gutteridge&Halliwell(Biochem J.1988,253卷(3)，932-933)以及其中的参考文献中。具体地，将用H

将在缓冲液A(20mM KH

在TBA-MDA测定中，RoxP的添加降低了532nm的吸光度，这表明其降低·OH自由基产生的能力(参见图22)。

实施例14：RoxP降低了辐照血浆中脂质氢过氧化物水平

脂质过氧化(脂质氧化降解)是由自由基对脂质的作用所产生的。细胞膜中脂质过氧化作用可以导致细胞破坏。

氢过氧化物与Fe

在EDTA管中收集血液。对含有500μl血液+150μl RoxP(300μg RoxP)，或500μl血液+150μl PBS的样品进行辐照：

UVA-辐照3×5000μJ/cm

UVB-辐照1×9000μJ/cm

在实验中包括了具有与样品相同的组成但不辐照的对照。

将血液样品以1000×g离心，收集血浆并在-80℃冷冻。使用脂质氢过氧化物测定试剂盒(Cayman Chemical，项目号705002)定量脂质氢过氧化物。

RoxP向血浆(辐照和非辐照两者)中的添加导致脂质氢过氧化物水平降低(参见图23)。

实施例15：RoxP还原Fe

邻二氮菲特异性螯合Fe

将含有0.7mM六水合硫酸亚铁(II)铵(来自1.4mM在PBS中的工作溶液)或者0.5mM十二水合硫酸铁(III)铵(来自1.0mM在PBS中的工作溶液)；并且还含有10μg或20μg RoxP(来自2mg/ml RoxP在PBS中的工作溶液)或等体积的PBS作为对照；并且还含有0.75mM邻二氮菲(来自5mM在PBS中的工作溶液)的反应混合物(总体积200μl)在室温下温育15分钟。在550nm读取吸光度。

RoxP的添加将Fe

使用菲洛嗪测定证实了这些结果，其确认了通过RoxP的Fe

实施例16：RoxP与粪卟啉III的相互作用

将1mg/ml RoxP(100μl)与50μg粪卟啉(10μl)混合，并且用PBS将总体积调节至290μl。在不同波长测量吸收度。吸收度曲线表明RoxP对粪卟啉III的结合(参见图26)。

实施例17：在与ABTS的反应中FMN/FDN对RoxP的影响

在ABTS测定中测量了黄素单核苷酸(FMN)/黄素腺嘌呤二核苷酸(FDN)对RoxP活性的影响。反应组分包括ABTS(根据规程氧化)，在PBS中20×，在37℃预热，加入89μl；RoxP，2mg/ml，10μl；FMN/FDN1mM，1μl或3μl(分别为图中的“1FMN”、“1FDN”或“3FMN”，“3FDN”)；用PBS将总体积调节至100μl。结果表明当添加FMN/FDN，特别是FDN时，RoxP对ABTS自由基的还原提高。(参见图27)。

实施例18：RoxP抑制通过卟啉形成的自由基的产生

正常人的皮脂含有大量卟啉，其参与皮肤上活性氧(ROS)的产生。可以通过UV光或荧光照相容易地使卟啉的量可视化。

将单线态氧传感器Green(Singlet Oxygen Sensor Green)染料溶于甲醇中并加入PBS缓冲液中以达到0.4μM的最终浓度。将该溶液分布在透明96孔板中。向孔中添加1μM粪卟啉III或1μM原卟啉IX。然后，添加不同的量的RoxP。每个条件设置4次重复。在暴露期间用铝箔覆盖两次重复，而将两个孔暴露于UV灯10分钟。暴露后，对单线态氧传感器Green染料的荧光读数，其显示了所产生的单线态氧的量。

RoxP有效抑制了通过卟啉所形成的自由基的产生(参见图32)并因此可以是减少由UV引起的单线态氧产生所造成的损伤的优选方式。

实施例19：在UVA/UVB辐照研究中，当施用于人受试者时，RoxP显示出抗氧化潜力

本研究的目标在于通过测量抗氧化效果和皮肤红斑来评估含有RoxP的3种组合物在7位健康受试者中的UV保护潜力。通过将上背皮肤暴露于UVA光和UVB光引起氧化应激。通过测量来自皮肤表面的拭子样品的皮脂脂质氧化水平(角鲨烯单氢过氧化物的浓度)来评估测试产物的抗氧化活性。与水、未处理对照和一个亲水性标准抗氧化剂(H1)相比，两次应用RoxP之后评价了光晒伤(1.25MED)诱导后的潜能。将特定采样试剂盒(Synelvia)用于获得用于分析的脂质样品。另外，通过测量所产生的红斑(色度计)评估产物的UV-保护潜能。

所测试的产物如下所示：未处理(“UT”)；去矿物质水(“Aqua”)；抗氧化剂H1，处于水中的1％天然亲水性儿茶酚(阳性对照)(“H1”)；处于水溶液中的0.3mM(“EC-AA-001”)，1.2mM(“YE-LU-001”)或者4.0mM(“CA-FT-001”)全长RoxP蛋白。作为溶液提供样品并在室温下储存。对于所有参考，当作为水溶液应用样品时，使用Aqua对照。

随机双盲设计研究以用于分析皮脂脂质，其中使用个体间比较和空白对照。

在t1＝辐照前的基线，t2＝辐照后30至50分钟和t3＝辐照后16至24小时评价红斑(色度计)。在辐照后25至45分钟定量角鲨烯单氢过氧化物(SQOOH)。

一般测试区为上背。治疗区的尺寸为4.5cm×4.5cm。辐照区的尺寸为4cm×4cm。圆形擦拭区的直径为约2.6cm。从背部左上侧开始向背部右上侧分配测试区数目以建立一排测试区(区域1至4)。在第一排下方，在左侧开始第二排(区域5和6)。两个区域始终一起辐照(例如，区域1和3，2和4，5和6)。参见图28。根据6×6正交拉丁方，以具有固定尺寸的随机排列的区块，将治疗平衡分配至测试区。

用移液器应用45μl(约2mg/cm

应用了适合的包括和排除标准。受试者包括男性和女性两者，至少18岁，在测试区具有健康皮肤，在测试区中肤色均一且无红斑或黑色素淀积且在测试区中ITA>28。在研究中排除了具有以下情况的受试者，例如，在测试区具有活跃的皮肤病，最近定期使用日晒床、在测试区具有可能影响研究的痣、纹身、疤痕、过敏皮肤、毛发等，近期使用了具有已知的光毒性和/或光致敏性潜能的药物治疗，近期在测试区使用了任何局部药物治疗和/或摄入了具有抗氧化效果的食物补充剂。指示受试者避免可能在研究持续期间影响研究的因素。

在第1天，在仪器测量前，使受试者在环境温度下在等候处俯卧至少15分钟以使皮肤在出汗情况下干燥。通过使用皮肤的比色计测量将受试者的皮肤类型(ITA°)分类。然后，辐照背部上6个约1cm×1cm的点(与治疗区分开)来检测最小红斑剂量(MED)。通过25％的增量在各个点之间提高UV-B的剂量。

然后，根据随机方案，由技术人员应用研究产物。为了避免衣服对测试产物的吸收，使受试者在室温下保持赤裸约15分钟。

在第2天，受试者在辐照后20±4小时返回研究点。在仪器测量前，使受试者在环境温度下在等候处俯卧至少15分钟以使皮肤在出汗情况下干燥。进行MED读数，并确定1MED的辐照时间。通过将1MED的辐照剂量乘以辐照因子(1.25)来计算测试区辐照的正确剂量。

对所有测试区进行色度计测量(基线)以评价红斑。根据随机方案应用研究产物。为了避免衣服对测试产物的吸收，使受试者在室温下保持赤裸约15分钟。应用后45min±5min，用1.25MED辐照每个治疗区。辐照后25至45min，根据棉拭法对所有治疗区进行擦拭并如Synelvia(附录2)所描述的进行分析。擦拭后5至10分钟，重复色度计测量。

在第3天，受试者在辐照后20±4小时返回研究点。在仪器测量前，使受试者在环境温度下在等候处俯卧至少15分钟以使皮肤在出汗情况下干燥。对所有测试区重复色度计测量。

进行以下仪器测量：

-CHROMAMETER CR 4000(Minolta，Device D-Langenhagen，德国)：可以使用三刺激色度计通过反射能力测量客观定量肤色。测量原理是基于漫射照射直径为8mm的区域上的皮肤的氙气闪光灯的反射。然后，通过提供检测光的颜色分析的高灵敏度二氧化硅光电二极管检测来自皮肤的垂直反射光。色度计定义了L*a*b*颜色坐标系中所测量的颜色。L*值定义了明度。通过参数a*(红-绿色轴；负a*值为绿色，正a*值为红色)和b*(蓝-黄色轴，负b*值为蓝色，正b*值为黄色)定义颜色。a*值与皮肤红色(红斑)的目视评价良好相关。a*是红斑的量度。a*值的升高对应于皮肤红色程度的增加。参数：a*皮肤红色。对于评价或红斑，每个测试区和评价时间进行3次测量。

实施以下研究方法：

-UV辐照(Solar Simulator UVASPOT 1000，Dr.

-使用UVA Spot 1000进行辐照。它产生了均匀的大辐照区(在距辐射源50cm的距离，约20cm×20cm)。通过特定的过滤器限定光谱。使用“H2”过滤器(UVB和UVA辐照)。使用日光模拟器以对测试区所要求的辐照强度辐照测试区。可以同时辐照多个点。日光模拟器辐照约20cm×20cm的区域。每个测试区辐照1次。

-拭子采样、储存和运输。通过受训的技术人员对每个测试区进行拭子采样。用采样缓冲液使棉拭子润湿，并且在拭子在整个测试区上的规则移动期间，通过施压45秒来采集第一拭子。用剪刀剪下拭子，因此将其放入所提供的含有缓冲液的Eppendorf管中。使用第二缓冲液润湿的拭子对相同测试区重复该程序。将第二拭子储存在与第一拭子相同的Eppendorf管中。采样后，将包含每个测试区两个拭子的Eppendorf管直接储存在冰上并在采样后2小时内置于-20℃冰箱中并在-20℃储存直至运输。在研究结束后(在下一个工作日)，通过适当的快递服务在干冰上进行样品运输。每个测试区1个拭子。

-拭子采样分析。通过液相色谱-质谱(LC/MS)分析拭子样品的皮脂脂质过氧化产物角鲨烯单氢过氧化物(SQOOH)的含量。

在分析数据前，研究人员决定将研究中发生的哪些规程偏差视为次要和主要的。将有效受试者定义为完成研究且与规程无主要偏差并且未反悔的招募受试者。未进行遗失数据的替换，并且将受影响的评价视为分析缺失。对分析群体提供人口统计变量(年龄，性别)。由于使用治疗代码进行统计分析，因此对于数据分析无需揭盲。使用唯一标识符变量，通过将数据合并至随机列表进行去随机化。按照评价时间和处理列出原始数据(角鲨烯含量(ng/mg)和色度计a*-值)。对于色度计值，按照评价时间和处理计算并列出与基线(辐照前)的差异。对原始数据和与基线的差异提供N、平均值、标准偏差、中值、最小值和最大值。按照治疗和评价时间，在直方图中利用标准偏差显示对于受试者的原始数据和与基线的差异的平均值。

在研究中招募了7位受试者并且完成了研究且无主要偏差。年龄：55±9.8岁(平均值±标准偏差)；性别：1位男性(14％)，6位女性(86％)。在本研究中，未观察到不良反应。

色度计测量结果：在辐照前(第2天，基线)和辐照后30至50分钟(第2天)以及16至24小时(第3天)，使用色度计测量肤色a*(红斑)。a*值的升高对应于皮肤红色的升高。图29显示了通过色度计的肤色a*(红斑)-具有原始数据的平均值和95％置信区间的柱状图(n＝7)。图30显示了通过色度计的肤色a*(红斑)-具有与基线的差异的平均值和95％置信区间(n＝7)的柱状图。

皮脂脂质过氧化产物角鲨烯单氢过氧化物的分析结果：在上背部采集用于皮脂脂质过氧化产物角鲨烯单氢过氧化物(SQOOH)分析的样品。图31显示了SQOOH含量(ng/mg)-具有原始数据的平均值和95％置信区间的柱状图(n＝5，由于可能由于样品混合所造成的难以置信的结果，排除了来自#4和#5受试者的数据)。

总之，SQOOH的评价在未处理的辐照区上显示出高SQOOH的量，并且在用水处理的辐照区显示出甚至更高的量。可以通过水使皮肤更透明并因此皮肤可以吸收更多的光以导致更高的氧化水平的影响来解释用水处理的辐照区上更高的SQOOH的量。如所期望的，用阳性对照“H1”处理的辐照区显示出极低的SQOOH值。3种测试产物导致SQOOH值降低：测试产物EC-AA-001显示出最低的抗氧化效力，然后是YE-LU-001，并且测试产物CA-FT-001显示出最高的抗氧化效力倾向。产物效力的这种差异与抗氧化剂浓度相匹配。CA-FT-001测试产物与水对照之间的差异是统计学显著的，其p值<0.05。

1.25MED的辐照导致在24小时期间所有受试者的肤色a*平均升高，因此导致了轻微红斑。在测试产物和对照之间未观察到统计学显著差异；然而，在所有测试的抗氧化剂中红斑减小的明显趋势是可见的并且影响程度在所有抗氧化剂中是相等的。尽管水对照提高了6个单位的中值，但RoxP处理区仅提高了3.4个单位的中值，这与H1对照的3.5个单位的中值提高相匹配。由于高标准偏差，在该样本容量不能观察到统计显著性。特别是在UV辐照后30-50min的测量中，RoxP处理区显示出比水对照更小的红斑以及与阳性对照相等或更小的红斑。

因此，本研究在美容和治疗相关背景中，即对真实人受试者的皮肤显示，RoxP在对皮肤UV辐照后显示出有意义并且甚至统计学显著的抗氧化效果，并且抗氧化效果随所施用的RoxP的浓度增加而升高。

实施例20：组合物

本发明的实施例给出了体现本发明原理的说明性组合物(例如，洗剂、凝胶剂或乳膏剂)，其可以适合地用于美容或药物背景。

序列表

<110> S-生物医药有限公司(S-Biomedic N.V.)

<120> 用于治疗氧化应激相关皮肤病和皮肤衰老的组合物和氧化应激相关皮肤病的诊断

<130> SBIO-001-PCT

<150> 18206646.4

<151> 2018-11-16

<160> 21

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 161

<212> PRT

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