黄连须及其主要生物碱对非特异性免疫及鲤鱼抗病力的影响

摘要

目的：黄连为清热燥湿类中药，因其具有抗菌和解热等活性而被广泛应用在临床兽医学上，然而，关于其对巨噬细胞功能和鲤鱼非特异性免疫活性的影响还未见报道。黄连须为附着在黄连根茎上的不定根，大部分被农民当作废弃物丢弃在田间，本研究以黄连须及其生物碱为研究对象，对其调控非特异性免疫，增强鲤鱼抗病力的作用机制做了初步探索，旨在促进黄连的综合开发利用。
　　方法和结果：
　　（1）采用HPLC法对黄连须中生物碱类成分进行了含量测定，运用高速逆流色谱技术对黄连须中主要生物碱进行提取分离。
　　（2）通过测定黄连须提取液及其主要生物碱对嗜水气单胞菌和副溶血弧菌的最小抑菌浓度探究它们的抑菌活性。结果显示，黄连须、总碱、小檗碱和黄连碱在体外对嗜水气单胞菌和副溶血弧菌均有一定的抗菌活性，而且，黄连总生物碱的抑菌作用要优于小檗碱、黄连碱和黄连须。
　　（3）在细胞水平初步探究黄连生物碱对体外培养的小鼠巨噬细胞非特异性免疫功能的影响。结果显示，4种黄连生物碱对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能都有不同程度的提高，小檗碱效果最好；小檗碱、黄连碱和巴马汀对小鼠腹腔巨噬细胞的呼吸爆发活性具有正向调节作用。体外细胞实验结果表明，黄连生物碱具有潜在的调节非特异性免疫的药理活性。
　　（4）通过在鲤鱼基础饲料中添加一定比例的黄连须及其主要生物碱，探讨黄连须及其主要生物碱对鲤鱼血清非特异性免疫指标（溶菌酶、髓过氧化物酶和补体C3）、头肾巨噬细胞吞噬和呼吸爆发功能的影响。实验分为7组，NC、FRC-L（12.5g/kg黄连须）、FRC-M（25g/kg黄连须）、FRC-H（50g/kg黄连须）、TA（0.78g/kg总碱）、BBR（0.78g/kg小檗碱）和Cop（0.78g/kg黄连碱）组。结果显示，在饲喂饲料第14天，与对照组相比，血清溶菌酶和补体C3活性的各实验组与对照组相比均没有显著性的差异，髓过氧化物酶活性、呼吸爆发和吞噬活性只有FRC-M组显示出了显著性地提高。在饲喂饲料第21天，与对照组相比，FRC-M、FRC-H、TA、BBR和Cop对血清溶菌酶活性、髓过氧化物酶活性以及巨噬细胞的呼吸爆发活性均有显著性的提高。对于血清补体C3活性和巨噬细胞吞噬活性，与对照组相比，FRC-M组，TA组和BBR组达到了显著性的差异。
　　（5）采用实时荧光定量PCR检测了黄连须及其主要生物碱对鲤鱼头肾和脾脏免疫相关基因mRNA表达的影响。结果显示，与对照组相比，FRC-M、FRC-H、TA和BBR能显著上调鲤鱼头肾中IL-1β的表达；对于头肾中TNF-α mRNA的表达，FRC-L、FRC-M、FRC-H、TA、BBR和Cop对其有显著性地上调作用；另外，FRC-M、FRC-H、TA、BBR和Cop能显著上调鲤鱼头肾中lysozyme-c基因的表达；对于头肾中C3 mRNA，FRC-M、TA和BBR对其表现了显著性的上调作用；而且，FRC-L、FRC-M和FRC-H能够显著下调鲤鱼头肾中IL-10的表达。
　　（6）采用人工感染嗜水气单胞菌攻毒试验，研究了黄连须及其主要生物碱对鲤鱼感染嗜水气单胞菌存活率的影响。结果显示，用嗜水气单胞菌攻毒10天后，与对照组相比，FRC-M组、FRC-H组、TA组、BBR组和Cop组的存活率有显著性的提高。
　　结论：黄连须可以抑制嗜水气单胞菌的生长，增强鲤鱼非特异性免疫，提高鲤鱼对感染嗜水气单胞菌的抵抗力，生物碱可能是其药效物质基础。结果表明，黄连须是一类潜在的鲤鱼饲料添加剂，在水产养殖业有很好的发展前景。

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引言

研究背景和立题依据

研究的主要内容

第一章 黄连须中生物碱类成分的含量测定及提取分离

1.1 实验材料与仪器

1.2．实验方法

1.3. 结果

1.4 小结与讨论

第二章 黄连须及其主要生物碱对水产常见致病菌的体外抑菌实验

2.1 实验材料和仪器

2.2 实验方法

2.3 实验结果

2.4 小结与讨论

第三章 黄连生物碱对小鼠巨噬细胞非特异性免疫功能的影响

3.1 实验材料和仪器

3.2 实验方法

3.3 数据分析

3.4 实验结果

3.5 小结与讨论

第四章 黄连须及其主要生物碱调控鲤鱼非特异性免疫功能的研究

4.1 实验材料和仪器

4.2 实验方法

4.3 数据处理

4.4 实验结果

4.5 小结与讨论

第五章 黄连须及其主要生物碱调控鲤鱼免疫相关基因表达的研究

5.1 实验材料和仪器

5.2 实验方法

5.3 数据处理

5.4 实验结果

5.5 小节与讨论

第六章 黄连须及其主要生物碱增强鲤鱼抗病性的研究

6.1 实验材料和仪器

6.2 实验方法

6.3 数据处理

6.4 实验结果

6.5 小节与讨论

全文总结与展望

全文总结：

展望：

创新点及意义

创新点：

研究意义：

参考文献

文献综述

中英文缩略名词对照表

附录

致谢

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