低氘水抗H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤的作用及机制研究

摘要

[目的]：
　　比较不同氘体积浓度的低氘水对过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞株氧化损伤的作用及机制，为新的抗氧化药物的开发提供实验依据
　　[方法]：
　　首先，MTT法检测不同浓度的H2O2对PC12细胞损伤的影响以确定造模浓度，接着采用MTT法检测不同浓度的低氘水对PC12细胞生长增殖的影响以明确低氘水对正常PC12细胞有无毒性作用，最后采用MTT法检测不同浓度的低氘水对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的影响;采用DCF-DA荧光探针结合荧光显微镜检测不同浓度的低氘水作用后，细胞内活性氧(ROS)水平;免疫荧光技术检测不同浓度的低氘水作用后细胞内相关抗氧化酶类超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的含量变化;western-blot检测不同浓度低氘水作用后对细胞内PI3K-Akt/PKB信号通路中相关蛋白PTEN、p-PDK1、Akt、p-Akt、bcl-2和p-GSK-3β蛋白的表达变化水平。
　　[结果]：
　　1.不同浓度的过氧化氢对PC12细胞损伤的影响:MTT结果显示随着H2O2浓度的升高，PC12细胞的增殖能力逐渐下降，在H2O2浓度为100μM的时候，细胞生长率为52％。
　　2.低氘水对PC12细胞增殖的影响:MTT结果显示随着培养基中氘含量下降，PC12细胞的增殖能力不受影响(P＞0.05）。
　　3.低氘水对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的影响:MTT结果显示在100μM诱导的氧化损伤下，随着培养基中氘含量下降，PC12细胞的生长率逐渐上升。
　　4.低氘水能够降低H2O2诱导下细胞内活性氧(ROS)水平:ROS结果显示随着培养基中氘含量下降，ROS水平逐渐降低。
　　5.低氘水能提高细胞内相关抗氧化酶类超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力:CAT及SOD检测结果显随着培养基中氘含量下降，PC12细胞内CAT及SOD酶活力上升。
　　6.低氘水影响PI3K-Akt/PKB信号通路中相关蛋白PTEN、p-PDK1、Akt、p-Akt、bcl-2和p-GSK-3β蛋白的表达变化水平:western-blot检测结果显示随着培养基中氘含量下降，PC12细胞内PTEN、p-PDK1、Akt蛋白表达水平变化不明显，p-Akt、p-GSK-3β、bcl-2表达水平显著上调(P＜0.05）。
　　[结论]：
　　低氘水具有抗神经细胞氧化应激损伤的作用，其机制可能为通过影响PI3K-Akt/PKB信号通路中相关蛋白的表达。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 研究背景

1．2 研究目的

1．3 研究内容

2 实验材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

5 小结

参考文献

文献综述 阿尔茨海默病与氧化应激

致谢

附录

附录二：在读硕士期间的科研情况