下调抑癌蛋白TRIM26导致肝癌预后更差

摘要

目的： 1.检测HCC患者肿瘤组织及正常肝组织标本中TRIM26蛋白的表达情况。 2.分析TRIM26蛋白的表达水平与HCC患者预后及临床病理特征之间的关系。 3.探究 TRIM26与肝细胞癌细胞系增殖、转移、侵袭等恶性表型的关系，并探寻其机制。 方法： 1.收集中国武汉大学人民医院病理科HCC患者的组织标本，均经病理学检查证实。 2.采用免疫组化技术检测70例肝癌患者的癌组织和10例正常肝组织中TRIM26蛋白的表达，从GEO网站中的GSE14520下载HCC患者临床信息，分析癌组织中的TRIM26蛋白表达与患者预后及临床病理特征的关系。 3.采用Western Blot检测LO2及八种不同侵袭转移潜能的肝癌细胞株HepG2，SMMC7721，Huh7，Bel-7402，PLC，LM3，97L，97H中 TRIM26的表达情况，筛选出靶细胞。 4.采用siRNA干扰技术转染肝癌细胞株 HepG2和 Bel-7402干扰 TRIM26表达，收集细胞进行TRIM26蛋白Western Blot、荧光定量PCR验证敲击效果，并进行细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭实验检测。 5.用GSEA（http://www.broadinstitute.org/gsea）的JAVA程序来分析因高表达TRIM26影响的潜在基因。 6.统计学处理：应用SPSS19统计软件对数据进行统计学处理。TRIM26在癌组织和正常肝组织中蛋白阳性表达率的比较，以及在不同临床病理特征情况下TRIM26在癌组织中的阳性表达率的比较均采用卡方检验。TRIM26蛋白与患者术后无瘤生存期的关系采用生存分析(Kaplan-Meier曲线，log-rank法)。荧光定量PCR的实验数据采用2-△△Ct进行处理，每个样本重复实验进行3次实验，计算各样本平均Ct值和△Ct值(△Ct=Ct TRIM26-CtGAPDH)，计算2-△△Ct(△△Ct=△Ct目的-△Ct对照)，其数值表示目的表达值相对于对照表达值的相对倍数，计量资料以平均值±标准差（SD）计算表示。 结果： 1.免疫组化检测70例肝癌组织标本中TRIM26的表达，结果显示：TRIM26在正常肝组织中强阳性的样品百分比（60%，6/10）显著高于在癌组织中（15.7%，11/70）（P=0.0014）。较低的TRIM26表达与较高的AFP（P=0.0018）、AJCC T分期（P=0.0246）和CLIP分期（P=0.0019）密切相关。Kaplan-Meier生存分析显示，与具有高TRIM26表达的肿瘤相比，肿瘤显示低TRIM26表达水平的HCC患者有显著较低的总生存期（OS）和无复发生存率（RFS）。 2.Western Blot检测细胞株中TRIM26的表达量，结果显示：以永生化正常肝细胞株LO2为对照，HepG2和Bel-7402中TRIM26表达量明显高于其余肝癌细胞系。 3.Western Blot及荧光定量PCR检测转染了TRIM26siRNA-1的肝癌细胞系，发现HepG2和Bel-7402中TRIM26蛋白表达较转染前明显下降。 4. CCK-8实验检测细胞增殖能力，结果显示：干扰TRIM26表达后细胞增殖率增高；克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，结果显示：干扰TRIM26表达后细胞克隆形成比例增高；Transwell及基质胶Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力，结果显示抑制TRIM26的表达细胞迁移和侵袭个数增加。 5. GSEA分析结果显示：TRIM26调控基因组主要与细胞代谢有关，如线粒体呼吸链、脂质代谢过程、葡萄糖代谢过程等。 结论： 1. HCC癌组织中TRIM26蛋白的表达影响HCC的生物学特性，对肝细胞癌的预后评估有一定的临床意义。 2.敲除 TRIM26能直接增加癌细胞增殖、克隆形成和促进癌细胞转移等肿瘤恶性表现。 3. TRIM26是一种调节HCC多个新陈代谢相关通路的新型肿瘤抑制物。

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1 前言

1.1 研究背景

1.2 研究目的

1.3 研究内容

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

3 结果

3.1 TRIM26的表达水平与肝癌患者的一些临床病理特征和生存时间相关

3.2 TRIM 26在肝癌样本和HCC细胞系中下调

3.3 TRIM26增强HCC细胞增殖和克隆形成能力

3.4下调TRIM26促进HCC的迁移和侵袭

3.5 TRIM26可调节HCC细胞的代谢生物学过程

4 讨论

5 小结

参考文献

综述:TRIM蛋白家族与肿瘤关系的研究进展

致谢

附录一： 缩写词中英文对照

附录二：在读期间的科研情况