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第1章 文献综述
1.1概述
1.2原花青素简介
1.3原花青素结构
1.4原花青素合成途径及关键酶基因
1.5原花青素的生理功能
1.5.1原花青素的抗氧化作用
1.5.2原花青素的抗癌作用
1.5.3原花青素的抗菌作用
1.5.4原花青素在植物体内的抗胁迫作用
1.5.5原花青素对植物的抗菌作用
1.6原花青素的提取以及检测方法
第2章 引言
2.1研究目的及意义
2.2主要研究内容
2.3技术路线
第3章 桑树原花青素生物合成的关键酶基因MnANR和MnLAR的鉴定、克隆及信息学分析
3.1实验材料
3.1.1植物材料
3.1.2序列信息获得
3.1.3主要使用软件
3.2主要试剂及配置方法
3.2.1主要试剂
3.2.2主要溶液配方
3.2.3主要仪器
3.3实验方法
3.3.1桑树花青素还原酶基因以及无色素还原酶基因的鉴定
3.3.2 RNA的提取及质量检测
3.3.3 cDNA合成
3.3.4原花青素生物合成基因的克隆
3.3.5花青素还原酶与无色花色素还原酶基因的多序列比对与系统发生分析
3.4结果分析
3.4.1桑树中ANR和LAR基因的克隆及生物信息学分析
3.4.2 ANR和LAR启动子序列分析
3.5小结与讨论
第4章 桑树MnANR和MnLAR基因的表达分析以及原花青素含量测定
4.1生物材料
4.2主要使用试剂及溶液配制方法
4.2.1主要试剂
4.2.2主要仪器
4.2.3主要配方
4.3 实验方法
4.3.1 RNA提取及质量检测
4.3.2 cDNA的合成
4.3.3目的基因在川桑组织以及果实成熟过程中的表达量分析
4.3.4 目的基因在不同逆境胁迫下的表达量
4.3.5 桑树原花青素的提取及UPLC 检测
4.4结果与分析
4.4.1原花青素生物合成相关基因在川桑中组织表达分析
4.4.2 珍珠白和粤椹大10中MnANR和MnLAR基因在果实成熟过程中的表达分析
4.4.3桑葚原花青素UPLC的定量检测
4.4.4 川桑MnANR基因和MnLAR基因在不同逆境胁迫下的表达
4.5小结与讨论
第5章 桑树ANR和LAR基因在烟草中功能初探
5.1生物材料
5.2主要使用试剂及溶液配方
5.2.1 主要试剂
5.2.2 主要仪器
5.2.3 主要溶液配方
5.3实验方法
5.3.1转基因过表达载体的构建
5.3.2农杆菌感受态细胞的制备和转化
5.3.3农杆菌感受态细胞转化及单克隆菌液制备步骤
5.3.4烟草叶盘转化及转基因阳性植株的筛选
5.3.5转基因阳性植物的继代和生根
5.3.6转基因植株中目的基因表达水平的检测
5.3.7 DMACA染色
5.3.8灰霉菌对烟草叶片的处理方法
5.3.9在固体培养基上培养灰霉菌的方法
5.4结果与分析
5.4.1转基因植株的检测
5.4.2川桑中的MnANR和MnLAR基因在烟草中的异源表达
5.4.3转基因植株的抗病性检测
5.4.4桑树MnANR和MnLAR基因转入烟草后对烟草花颜色的影响
5.5小结与讨论
第6章 综合与讨论
参考文献
在读期间发表文章
致谢
