热休克反应对小鼠巨噬细胞IL-18基因表达调节的研究

摘要

该文研究了热休克反应对LPS诱导的小鼠巨噬细胞中IL-18表达的调节效应.43℃热休克处理显著抑制了LPS引起的小鼠腹腔巨噬细胞和小鼠巨噬细胞株RAW264.7中IL-18 mRNA和蛋白水平的增加,这一发现为热休克反应抗炎症的机制增添了新的内容.在上述工作的基础上,我们进一步探索了热休克反应抑制IL-18基因表达的信号转导机制.我们用各种信号通路抑制剂预处理巨噬细胞后检测IL-18的表达情况,结果表明JNK MAPK的抑制剂WP600125以剂量依赖的方式抑制IL-18 mRNA的转录.为了验证热休克反应对IL-18的抑制与JNK失活的相关性,我们应用Western blot和激酶分析检查了热休克反应中JNK的活性.结果显示,热休克反应降低了LPS诱导的JNK激酶及其下游底物c-Jun的磷酸化水平.IL-18基因的表达受到许多转录因子的调节.其中,AP-1对IL-18的表达起正调节作用,它结合到IL-18启动子上游-1120到-1083之间的TGA(C/G)TCA序列上,调节-1120的表达.AP-1是Jun同二聚体或Jun/Fos异二聚体复合物,是JNK激酶信号通路的下游底物.我们推测热休克反应引起JNK活性的下降可能导致AP-1 DNA结合活性的降低,运用EMSA技术对细胞核中AP-1蛋白与IL-18启动子上DNA序列的结合能力进行了测定,结果表明热休克和JNK MAPK的抑制剂SP600125对JNK活性的抑制降低了AP-1与IL-18启动子上-1120到-1083的DNA序列的结合.这些结果提示我们,巨噬细胞中IL-18的表达与JNK/MAPK信号通路密切相关,热休克反应主要是通过JNK MAPK信号通路的阻断从而下调巨噬细胞中IL-18的表达.

目录

英文缩写索引

前 言

第一部分热休克反应负调节LPS介导的小鼠巨噬细胞IL-18基因的表达

材料与方法

实验结果

讨 论

第二部分热休克反应通过JNK/AP-1信号通路抑制了LPS介导小鼠巨噬细胞的IL-18表达

材料与方法

结果

讨 论

全文小结

致 谢

参考文献

文献综述一热休克蛋白70(HSP70)与免疫应答

一、HSP70的分子结构

二、HSP70的基因调控

三、HSP70与细胞因子

四、HSP70与细胞免疫

五、小结

参考文献

文献综述二IL-18的基因表达调节及其生物学功能

一、IL-18的结构

二、IL-18的基因及其转录调节

三、IL-18的生物学功能

四、小结

参考文献

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