半乳糖苷白藜芦醇脂质体的制备、肝靶向性及药效学研究

摘要

目的: 本实验合成半乳糖苷(GDE)，并制备白藜芦醇脂质体(RES-LIP)和半乳糖苷修饰的白藜芦醇脂质体(RES-GLIP)，研究两者在小鼠体内的分布，并探讨RES-GLIP对小鼠急性四氯化碳肝损伤模型的治疗作用，为白藜芦醇的临床应用奠定实验基础。 方法: ①半乳糖苷的合成和鉴定：表面活性剂聚氧乙烯十二烷基醚经硅胶柱层析分离得到了HO-(CH2CH2O)n-C12H25(n=3)，经糖苷化、脱保护两步反应制备相应的半乳糖苷GDE3，1HNMR鉴定其结构；②采用薄膜超声分散法制备RES-LIP和RES-GLIP。制备工艺：精密称取处方量物质于100mL圆底烧瓶中，加入30mL氯仿：甲醇(1：1)溶解。旋转蒸发除去溶剂，于烧瓶壁上形成一薄膜层。加入6％甘露醇水溶液10mL，冰水浴条件下超声20min，0.45μm微孔滤膜过滤，分装。通过正交设计优化处方，RP-HPLC法测定载药量和包封率；③RP-HPLC分析RES生物样品浓度方法的建立，取血清或脏器匀浆0.1mL，加入1.0mL乙醚漩涡混合1min，取有机层0.5mL，同法再萃取一次，共1.0mL有机层溶液于尖底试管中，在40℃水浴中氮气流吹干，残留物用100μL甲醇混悬溶解，6400r·min-1离心10min，上清液20μL进样。选用KromasilC18分析柱，流动相为甲醇：水(48：52)，流速1.0mL·min-1，检测波长303nm；④RES-LIP和RES-GLIP在小鼠体内的分布研究，昆明种小鼠90只，随机分为18组，每组5只。其中6组为RES-GLIP组，6组为RES-LIP组，其余为RES-sol组。将三组药物用6％甘露醇溶液配制成浓度为0.2％的混悬液，按10mL·kg-1剂量尾静脉注射给药。分别于给药后5、30min和1、2、4、8h处死一组。小鼠眼静脉丛取血，处死后取出各脏器(肝、肾、肺、脾)称重，加2倍生理盐水制成匀浆。血液离心后取血清。RP-HPLC测定各样品中RES浓度，并计算肝靶向效率；⑤建立小鼠急性四氯化碳肝损伤模型，分别按5mg·kg-1·d-1、10mg·kg-1·d-1和20mg·kg-1·d-1三种不同剂量的RES-GLIP尾静脉给药，连续6天，小鼠眼静脉丛取血后处死，血液离心取血清，测血清ALT和AST含量，取肝脏做病理组织学检查，HE染色，观察不同剂量RES-GLIP对于四氯化碳肝损伤模型的治疗作用。 结果: ①1HNMR鉴定结果证明GDE3结构式正确；②通过正交设计实验优化处方，透射电镜下可见RES-LIP和RES-GLIP呈圆形或椭圆形颗粒，两者粒径范围差异显著。RES-LIP平均粒径为100.5±40.2nm，而RES-GLIP平均粒径为80.4±42.3nm。RES-LIP载药量为19.81％，包封率为96.52％；RES-GLIP载药量为19.11％，包封率为95.87％。两者载药量和包封率比较，无显著差别；③生物样品中RES检测的各工作曲线线性范围0.25-50μg·min-1，最低检测浓度为0.1μg·mL-1(S/N=5)。各样品提取回收率均大于95％，方法回收率在90％～105％之间，日内日间精密度的RSD均小于10％。此方法经济、可靠、简单、快速，可用于动物体内分布研究；④RES-sol、RES-LIP和RES-GLIP的肝靶向效率分别为0.29、1.47和3.07。给药30min后RES-GLIP组肝脏的RES含量为RES-sol组的10倍，是RES-LIP组的2.0倍。可见，RES-LIP和RES-GLIP在体内具有较好的肝靶向性，RES-GLIP的靶向作用强于RES-LIP；⑤RES-GLIP对于四氯化碳肝损伤模型有着明显的治疗作用。 结论: 本研究首次合成GDE3，并制备了RES-LIP和RES-GLIP；通过小鼠体内分布研究证明RES-LIP和RES-GLIP均有良好的肝靶向性，尤以RES-GLIP最为明显；药效学实验证明：RES-GLIP对小鼠四氯化碳肝损伤模型具有良好的治疗效果。

目录

第三军医大学研究生学位论文独创性声明及版权使用授权书

英文缩写词一览表

摘要

前言

第一部分半乳糖苷的合成及鉴定

第二部分RES-LIP和RES-GLIP的制备及其理化性质

第三部分ERS-LIP和RES-GLIP在小鼠体内分布的研究

第四部分RES-GLIP减轻CCl4诱导小鼠急性肝损伤的药效学研究

全文结论

致谢

参考文献

文献综述

研究生期间发表的文章

附录

小鼠肝脏病理切片