hnRNPA2B1通过STAT3和ERK1/2信号通路在乳腺癌发生、发展中作用的初步研究

摘要

本文主要从以下几个部分进行论述：
　　第一部分 hnRNPA2B1通过STAT3和ERK1/2信号通路在乳腺癌发生、发展中作用的初步研究
　　目的:越来越多的证据显示剪切因子hnRNPA2B1在癌症的发生、发展、基因表达以及信号转导中发挥着重要的作用。已有研究表明在乳腺癌细胞系中hnRNPA2B1基因的敲低可以诱导癌细胞的凋亡，但hnRNPA2B1在乳腺癌中的其他功能及相关机制的研究依然十分缺乏。因此本研究的目的在于对hnRNPA2B1在乳腺癌发生和发展过程中的生物学功能及其临床意义进行进一步的观察，并对其机制做初步探讨。
　　方法:92例乳腺癌组织及癌旁正常组织通过免疫组织化学染色法对其hnRNPA2B1的表达进行观察和评分。另外通过western blot技术对乳腺癌细胞株及正常乳腺上皮细胞株中hnRNPA2B1的表达差异进行比较。利用RNA干扰技术对乳腺癌细胞株中hnRNPA2B1基因表达进行敲低，并建立稳定转染细胞株。通过MTT和Edu手段对细胞增殖情况进行观测，通过流式细胞技术对细胞周期及凋亡情况进行检测。此外我们通过建立裸鼠移植瘤模型在活体中观察hnRNPA2B1对乳腺癌细胞株致瘤作用的影响。最后通过对hnRNPA2B1表达敲低后相关蛋白活性表达的观察，对其作用机制进行初步探讨。
　　结果:实验数据显示与正常乳腺组织及乳腺上皮细胞相比较，hnRNPA2B1在乳腺癌组织样本及乳腺癌细胞系中均呈现过表达情况。当hnRNPA2B1基因敲低时，乳腺癌细胞系的细胞增殖能力明显受到抑制，癌细胞凋亡率显著升高，癌细胞的细胞周期明显延长，并阻滞于S期。另外，hnRNPA2B1的敲低可明显抑制活体内细胞原位成瘤情况。在分子水平，hnRNPA2B1表达的下降与STAT3及ERK1/2磷酸化抑制呈正相关。
　　结论:hnRNPA2B1可以通过STAT3及ERK1/2相关信号通路在乳腺癌的发生及发展过程中产生重要作用，这也许可以为未来乳腺癌治疗方向提供一个新的方向。
　　第二部分 IL-21在曲妥珠单抗治疗乳腺癌中作用的初步研究
　　目的:曲妥珠单抗作为针对HER2阳性乳腺癌的治疗手段近年来在临床中得到广泛应用。然而，在取得较好生存率的同时亦有较严重的药物耐药问题存在，并且这一问题日趋严重，受到广泛关注。唯有明确详尽的曲妥珠单抗耐药机制方能从根本上解决这一问题，从而提高药物的治疗效果，发现新的治疗辅助手段。目前这一问题现已成为HER2阳性乳腺癌治疗相关问题的研究热点。根据这一问题，本研究旨在对IL-21在曲妥珠单抗治疗乳腺癌中作用的初步观察研究。
　　方法:通过CCK-8试验观察不同HER2阳性细胞系对曲妥珠单抗药物敏感性，以区分曲妥珠单抗耐药或敏感乳腺癌细胞系。利用ELISA及流式技术手段检测NK细胞释放IFN-gamma及颗粒酶B(granzyme B)的含量，以观察IL-21在曲妥珠单抗治疗中的作用。
　　结果:与UACC-732及JIMT-1相比，曲妥珠单抗对SKBR3与BT474细胞的生长抑制率明显较高，这说明SKBR3与BT474对曲妥珠单抗的药物敏感性更高，而UACC-732和JIMT-1为相对耐药细胞株。在JIMT-1细胞中，NK细胞经过IL-21预处理后与乳腺癌细胞共培养所分泌的IFN-gamma与对照组相比明显升高。在UACC-732、JIMT-1及SKBR3三株乳腺癌细胞中，NK细胞经过IL-21预处理后后所分泌的颗粒酶B量明显较对照组明显升高。
　　结论:在曲妥珠单抗相对耐药细胞株UACC-732和JIMT-1及敏感细胞株SKBR3中，IL-21均可有效提高NK细胞释放有效细胞因子，诱导ADCC作用。

目录

声明

缩略语表

摘要

第一部分 hnRNPA2B1通过STAT3和ERK1／2信号通路在乳腺癌发生、发展中的作用的初步研究

前言

第一章 hnRNPA2B1在人乳腺癌和正常组织及细胞中的表达差异及其临床意义

1．1 材料与方法

1．2 结果

1．3 讨论

第二章 hnRNPA2B1基因敲低对乳腺癌细胞增殖和调控的影响

2．1 材料和方法

2．2 结果

2．3 讨论

第三章 hnRNPA281基因敲低对小鼠原位成瘤性的影响

3．1 材料与方法

3．2 结果

3．3 讨论

第四章 hnRNPA2B1对人类乳腺癌细胞致瘤能力影响机制的初步探讨

4．1 材料与方法

4．2 结果

4．3 讨论

第一部分 结论

参考文献

第二部分 IL-21在曲妥珠单抗治疗乳腺癌中作用的初步研究

前言

1．1 实验材料

1．2 实验方法和步骤

第二章 结果

第三章 讨论

第二部分 结论

参考文献

文献综述一 hnRNPA281在癌症发生发展中作用的研究进展

文献综述二 曲妥珠单抗治疗乳腺癌患者的免疫机制中潜在预测因子与治疗靶点的研究进展

文献综述三 STAT3的激活效应在乳腺癌细胞中作用的研究进展

攻读学位期间发表论文

致谢