IGF2基因在卵巢癌中的表达、生物学功能及临床意义

摘要

目的:
　　卵巢癌是妇科最常见的恶性肿瘤，同时也是最难诊断、恶性程度高、进展快和预后差的妇科肿瘤之一。目前由于缺乏早期有效检测手段，大部分患者确诊时已经为中晚期。临床分期是影响肿瘤患者预后最重要的因素之一。因此，要从根本上改善卵巢患者的治疗效果，寻找早期准确筛选和预后判断分子标志物就显得极为迫切。
　　最近，我们研究发现IGF2在卵巢癌组织和正常卵巢组织以及癌旁组织中的表达存在显著差异，通过文献检索，并未发现IGF2基因在卵巢癌的发生、进展和临床意义等方面的报道。本课题主要目标是进一步评价IGF2表达在卵巢癌中是否具有重要的临床意义和生物学功能，为此我们分析了IGF2表达与患者各临床病理以及预后的关系，并构建IGF2差异表达的卵巢癌细胞模型，通过细胞增殖、凋亡、周期、侵袭等方面初步探索了IGF2在卵巢癌中的功能。本研究将为进一步深入研究该基因在肿瘤中的作用、机制和临床应用的可行性等方面提供理论基础。
　　方法:
　　1、应用RT-PCR、RT-qPCR以及Western-blot方法对卵巢癌组织和正常卵巢组织中IGF2基因的表达进行分析;然后通过制备组织芯片并采用免疫组织化学的方法对卵巢癌组织和癌旁组织中IGF2基因蛋白表达进行了分析;
　　2、通过对组织芯片中样本肿瘤细胞的阳性率和染色强度进行定量分析后，采用SPSS13.0软件统计分析IGF2表达与患者各临床资料之间的关系;使用在线数据库Kaplan-Meier plotter分析了卵巢癌患者生存期和IGF2表达的关系;
　　3、构建IGF2基因低表达细胞模型，通过MTS和流式细胞术分析了肿瘤细胞增殖和周期的变化;通过流式细胞术和Transwell实验分析了IGF2对肿瘤细胞的凋亡和侵袭能力的影响。
　　结果:
　　1、利用RT-PCR、RT-qPCR和Western-blot方法分析了IGF2基因在10例正常卵巢组织和35例卵巢癌组织中的表达情况，结果发现IGF2基因在卵巢癌组织中的表达显著高于正常卵巢组织(P=0.000)。
　　2、通过制备含72例卵巢癌组织和15例癌旁组织的组织芯片，利用免疫组织化学方法分析了IGF2基因在卵巢癌组织和癌旁组织中蛋白水平的表达情况，结果发现IGF2在卵巢癌组织的表达也明显高于在癌旁组织的表达(P=0.000)。
　　3、通过对免疫组化染色的肿瘤细胞阳性率和染色强度对表达结果进行定量分析，采用SPSS13.0软件统计分析IGF2蛋白表达与患者各临床资料之间的关系后发现，IGF2蛋白表达水平与卵巢癌患者的病理分级密切相关(p=0.047)，而与患者年龄、病理类型、肿瘤位置和肿瘤大小不相关(P＞0.05)。
　　4、通过使用Kaplan-Meier plotter在线数据库数据，采用Kaplan-Meier方法对不同IGF2表达的患者生存期分析发现，IGF2高表达的卵巢癌患者的总生存时间(OS)明显低于IGF2低表达的卵巢癌患者(HR=1.44，P=0.000);并且IGF2高表达的卵巢癌患者的无进展生存时间也明显低于IGF2低表达的卵巢癌患者(HR=1.35，P=0.000)。这些结果表明，IGF2表达与卵巢癌患者的不良预后密切相关。
　　5、通过患者不同临床资料进行亚分组后进一步分析发现，IGF2表达在不同临床分期、病理分型及化疗方式患者中的预后意义不同:IGF2高表达与临床Ⅰ+Ⅱ期(HR=2.60，P=0.014)和Ⅲ期(HR=1.30，P=0.003)卵巢癌患者的较差预后密切相关;在病理2级(HR=1.59，P=0.004)和3级(HR=1.31，P=0.002)的卵巢癌患者中，IGF2高表达患者的生存时间明显短于低表达的患者;在单一铂类药物(HR=1.48，P=0.000)和单一紫杉醇类药物(HR=1.46，P=0.00024)以及两类药物共同作用(HR=1.46，P=0.0000)的患者中，IGF2高表达患者的生存时间明显短于低表达的患者。
　　6、通过构建IGF2基因差异表达细胞模型并采用MTS和流式细胞术实验分析发现，相比较于对照组，IGF2基因低表达之后卵巢癌细胞的增殖能力明显降低，细胞周期显著阻滞在G1期;同时干扰IGF2的表达能够明显促进卵巢癌细胞的凋亡;利用Transwell实验分析发现，IGF2低表达明显抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭。
　　结论:
　　1.IGF2基因在卵巢癌组织的表达明显高于正常卵巢组织和癌旁组织，且其表达与患者的病理分级显著相关;
　　2.IGF2基因表达与卵巢癌患者生存时间密切相关，是一个重要的不良预后因素;而且其表达在不同临床分期、病理分型及化疗方式处理患者中的预后意义不同;
　　3.IGF2基因在卵巢癌中是一个重要的癌基因，干扰其表达可抑制肿瘤细胞生长和细胞迁移，并促进细胞凋亡。

目录

声明

缩略词表

摘要

第一章 前言

第二章 IGF2基因在卵巢癌组织中的表达与临床预后关系分析

2．1 实验材料

2．2 实验方法

2．3 实验结果

2．4 讨论

第三章 IGF2基因在卵巢癌中生物学功能的初步研究

3．1 实验材料

3．2 实验方法

3．3 实验结果

3．4 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 IGF2与癌症的研究进展

攻读硕士学位期间发表论文

致谢