无乳链球菌微球疫苗制备及其对罗非鱼免疫效果的研究

摘要

本试验选用实验室分离保存的无乳链球菌高免疫原性菌株作为制备微球疫苗菌株，先用福尔马林灭活制备成水剂疫苗，进一步利用海藻酸钠做为口服投递载体，采用乳化复沉淀方法包裹无乳链球菌制备成微球口服疫苗。在制备的过程中对最佳菌液浓度进行了筛选，并对微球疫苗效果进行了初步研究。结果表明，制备微球疫苗的最佳菌浓度为3.0×109cfu/mL，制备的微球疫苗灌胃和投喂的免疫保护率可达70％和65％。
　　通过两种方式免疫健康的吉富罗非鱼，第一种免疫方式为口服投喂，设4个试验组，分别标记为微粒组(菌浓度3.0×109 cfu/mL)、菌体组(菌浓度3.0×109 cfu/mL)、空微粒组和对照组，免疫组分别用微球疫苗、菌体疫苗、空微球疫苗拌配合饲料连续免疫7d，间隔5d(投喂配合饲料)，加强免疫一周(投喂免疫饲料)；第二种免疫方式为浸泡+口服投喂，设4个试验组，分别标记为浸泡+口服微粒组，浸泡+口服菌体组，浸泡组和对照组，免疫组试验鱼先用水剂疫苗浸泡20min，用配合饲料喂养1个月，再用按口服投喂方式加强免疫罗非鱼。免疫后每周对试验鱼进行尾静脉采血，连续采血8周，测定罗非鱼血清中抗体效价水平、溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活力、过氧化氢酶活性；并测定56d后以相应菌株攻毒后的相对保护率。
　　结果显示：无乳链球菌疫苗对罗非鱼具有较强的免疫原性。(1)免疫组罗非鱼血清中的抗体效价水显著性提高(P<0.05)，口服投喂方式和浸泡+口服投喂方式的抗体效价最高分别达到1:64和1:128；(2)从第一次采样开始，免疫组罗非鱼血清中的LSZ活力、SOD活力、CAT活力全部显著高于同期对照组(P<0.05)；(3)口服投喂投喂免疫保护率：微粒组(68％)>菌体组(32％)>空微粒组(9％)；浸泡+口服投喂免疫保护率：浸泡+口服微粒组(73％)>浸泡+口服菌体组(60％)>浸泡组(46％)。
　　上述结果表明，有海藻酸钠包被的疫苗免疫保护率高于没有海藻酸钠包被的疫苗，浸泡结合口服免疫能够进一步提高对吉富罗非鱼的免疫保护性；本研究所制备的无乳链球菌微球口服疫苗可以有效提高吉富罗非鱼的免疫功能和抗病力。