抗恶性疟原虫HRP-Ⅱ单链抗体库的构建、筛选及可溶性抗体表达、纯化的研究

摘要

噬菌体抗体库技术为基因工程抗体的研究开辟了新领域,各种小分子抗体(特别是人源性小分子抗体)应运而生,并在感染性疾病的诊断与防治、自身免疫性疾病与病毒性疾病的鉴别研究、肿瘤的影像分析和导向治疗或基因治疗(细胞内免疫)等多个领域展示出巨大的潜能和广阔的应用前景.该技术与传统的杂效瘤技术制备抗体相比,具有简单易行、生产成本低、筛选容量大、可通过发酵大量的制备且可绕过细胞杂交(甚至可不经过免疫)等优点.该研究采用噬菌体抗体库这一新兴的生物学技术.结果表明,用噬菌体库技术制备单链抗体简便、高效,所获抗HRP-Ⅱ单链抗体能与靶抗原起特异性免疫反应,具有作为免疫诊断试剂的潜质,为基因工程抗体的广泛应用奠定了基础.

目录

英文缩写

前言

材料与方法

一、主要材料和试剂

二、方法

(一)抗恶性疟原虫HRP-Ⅱ噬菌体单链抗体库的构建

(二)特异性抗HRP-Ⅱ阳性克隆的筛选与鉴定

(三)抗HRP-Ⅱ可溶性单链抗体表达条件的优化

(四)可溶性单链抗体的大量制备和纯化

结果

一、抗恶性疟原虫HRP-Ⅱ噬菌体单链抗体库的构建

(一)RNA的提取及mRNA的纯化

(二)VH和VL基因片段的扩增及鉴定

(三)ScFv基因的组装及扩增

(四)ScFv基因的克隆转化

(五)噬菌体抗体库滴度的测定

(六)菌落筛选

(七)重组噬菌粒的PCR鉴定

二、特异性抗HRP-Ⅱ阳性克隆的筛选与鉴定

(一)噬菌体抗体库的富集与淘选

(二)抗HRP-Ⅱ阳性克隆的筛选

三、抗HRP-Ⅱ可溶性单链抗体表达条件的优化

(一)诱导温度的优化

(二)诱导时相的优化

(三)诱导时间的优化

(四)诱导剂浓度的优化

四、可溶性抗HRP-Ⅱ单链抗体的大量制备与纯化

讨论

小结

参考文献

致谢

综述一

综述二

附录