噬菌体抗体库的构建及抗乳腺癌细胞单链抗体的筛选

摘要

构建抗人乳腺癌细胞MCF-7的噬菌体单链抗体库,从中筛选MCF-7细胞特异性单链抗体.用MCF-7细胞免疫BALB/C小鼠,取脾脏,提取总RNA,用RT-PCR技术扩增小鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,经重叠PCR(SOE-PCR),在体外将VH和VL连接成单链抗体(scFv)基因,并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,电转化至大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体超感染,构建噬菌体单链抗体库.从该抗体库中筛选特异性识别MCF-7细胞的噬菌体单链抗体,将表面展示单链抗体的单克隆噬菌体转化大肠杆菌TOP10进行可溶性表达.成功地构建了库容为1.2× 106的抗MCF-7乳腺癌细胞的单链抗体库,初步筛选到了与MCF-7细胞特异性结合的scFv,Western blot检测表明,在大肠杆菌TOP10中实现了单链抗体可溶性表达.