黑色突变貉生产性能测定及毛色基因TYR、DCT单核苷酸多态性分析

摘要

貉作为毛皮经济动物，毛色类型和毛皮色彩决定了经济价值，近年来，在貉的品种培育过程中，发现了黑色突变个体（简称黑貉），作为一种新的突变资源，被毛纯净、色彩鲜亮，有着极高的科研和利用价值。黑貉的基础研究还较为薄弱，明确黑貉的生物学特性，了解其毛色突变机理对加快黑貉新品种的培育具有重要的理论意义。本研究对黑貉繁殖性能、生长性能、毛皮品质及血液生理生化等指标进行测定，选取影响黑貉毛色的潜在基因TYR、DCT进行SNP分析，在分子水平上揭示黑色突变的原因。主要研究结果如下:
　　1.本研究以乌苏里貉为对照，对黑貉繁殖性能、生长性能、毛皮性能、血液生理生化指标进行了测定。结果表明，在相同的饲养和管理条件下，黑貉和乌苏里貉窝产仔数都在5～6.5只，分窝成活率都在80％以上，两种毛色间差异不显著(P＞0.05);不同毛色个体在出生45-210日龄体重和体高差异不显著(P＞0.05);黑貉背部针绒毛长度显著高于乌苏里貉(P＜0.05);生理指标结果显示，PLT在黑貉中公母差异显著(P＜0.05);W-SCR在黑色公貉和乌苏里公貉的之间差异显著(P＜0.05);其他指标WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、W-SCC、RDW-SD、RDW-CV、PDW、MPV、P-LCR等在品种和性别间差异不显著。生化指标中，TG在乌苏里貉中公母差异显著(P＜0.05);Alb、TP、CHO在两种貉间有差异，但差异不显著(P＞0.05); ALT、AST、Glu、Urea、TP、D-HDL-C、LDH、CHO、ALP等指标在种间和性别上没有差异（P＞0.05）。
　　2.通过PCR、克隆测序技术获得黑貉和乌苏里貉TYR、DCT基因的完整编码区序列，通过比较基因组学对这两个基因进行鉴定和生物信息学分析。最终结果显示，貉TYR基因编码序列长1593bp，编码530个氨基酸。貉DCT基因的完整编码区序列长1650bp，编码549个氨基酸。
　　3.通过分析测序结果，对获得的TYR、DCT基因编码区开展SNPs检测，将基因突变位点形成的基因型和貉毛色表型进行关联分析。测序和比对结果表明，貉TYR基因在两种毛色间存在一个突变位点c.1497C＞G，该突变位点只在黑貉中存在且为CG基因型，乌苏里貉为CC基因型，该突变与与黑貉毛色形成有关;DCT基因编码区在黑貉和乌苏里貉两种毛色之间没有突变。

目录

声明

摘要

第一章 引言

1．1 研究背景

1．1．1 貉生物学特性

1．1．2 我国貉养殖业发展简史

1．1．3 我国貉养殖业现状

1．1．4 我国貉养殖业展望

1．2 哺乳动物毛色形成

1．2．1 黑色素的性质、形成及功能

1．2．2 哺乳动物毛色形成机制

1．3 毛色基因研究进展

1．3．1 TYR基因家族

1．3．2 MITF

1．3．3 ASIP

1．3．5 KIT

1．4 本研究的意义

2．1 材料

2．1．1 实验动物及饲养管理

2．1．2 采集样本

2．1．3 主要仪器设备与主要试剂

2．2 实验方法

2．2．1 繁殖性能

2．2．2 生长性能

2．2．3 毛皮品质

2．2．4 血液生理生化指标

2．2．5 统计方法

2．3 结果与分析

2．3．1 繁殖性能

2．3．2 生长性能

2．3．3 针、绒毛长度

2．3．4 血液生理指标的测定

2．3．5 血液生化指标测定

2．4 讨论

第三章 TYR、DCT单核苷酸多态性分析

3．1 实验材料

3．1．1 试验动物

3．1．2 样品采集

3．1．3 主要实验试剂及配制方法

3．1．4 主要仪器

3．2 实验方法

3．2．1 貉皮肤组织的RNA提取与检测

3．2．2 基因组DNA提取

3．2．3 cDNA合成

3．2．3 引物设计与合成

3．2．4 TYR、DCT基因PCR扩增

3．2．7 DNA片段的回收

3．2．8 PCR产物与载体的连接

3．2．9 质粒DNA提取

3．2．10 生物信息学分析

3．2．11 转录组数据分析

3．3 结果与分析

3．3．1 RNA提取结果

3．3．2 血液DNA提取和电泳结果

3．3．3 TYR基因PCR扩增结果

3．3．4 DCT基因PCR扩增结果

3．3．5 貉TYR、DCT基因序列鉴定

3．3．6 貉TYR基因的生物信息学分析

3．3．7 貉DCT基因的生物信息学分析

3．3．8 黑貉和乌苏里貉皮肤组织中TYR、DCT基因mRNA相对表达量比较分析

3．3．9 两种不同毛色貉TYR、DCT基因SNPs筛选

3．3．10 突变位点遗传学分析和毛色表型关联分析

3．4 讨论

3．4．1 貉TYR、DCT基因CDS区分子克隆和序列分析

3．4．2 TYR、DCT基因mRNA表达量与貉毛色的关系

3．4．3 TYR基因多态性与动物皮毛颜色的相关性

第四章 全文结论

参考文献

致谢

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