抗病毒药物利巴韦林在蛋鸡体内代谢产物探究

摘要

兽药残留超标及违禁药物使用是动物源食品安全的突出问题，严重威胁人类的健康安全，故对药物违禁使用和残留状况进行有效监测和监管至关重要。目前，药物残留监测主要针对药物原型，而药物进入动物体内发生代谢，常常不以原型形式存在，因此有必要弄清药物在动物体内的残留靶标物和靶组织，为有效监测提供科学依据。
　　利巴韦林是一种人用抗病毒药物，农业部560号公告规定禁止将其作为兽药使用，而实际养殖中，违禁使用现象仍很严重，且该药在家禽体内的代谢产物尚不清楚，方法标准尚未建立。本论文以蛋鸡为研究对象，对利巴韦林在血细胞中的体外代谢和蛋鸡的体内代谢情况进行研究，推断利巴韦林在蛋鸡体内可能的代谢物，为利巴韦林在禽产品中违禁使用监测和监管提供理论依据。主要研究内容和结果如下:
　　1.鸡血细胞体外代谢模型的构建与验证。本部分首先分离了蛋鸡血细胞，通过对不同培养基(L-15、M199和RPMI1640)和添加不同浓度(0、5％、10％、15％)胎牛血清时的血细胞生长状况进行比较，用MTT法对细胞活力进行检测，同时对建立的血细胞模型进行利巴韦林给药验证。结果表明，鸡血细胞最佳培养条件为L-15培养基、添加10％胎牛血清，最佳给药时间为3h时;利巴韦林给药验证发现，已报道的代谢物在0.5 h时迅速产生，并呈现一定的变化规律，表明构建的血细胞代谢模型能够有效地对利巴韦林进行代谢转化。
　　2.利巴韦林在蛋鸡血细胞体外模型中代谢产物分析。本部分采用LightSight软件对利巴韦林在生物体内可能的代谢产物进行分析，并以已构建的蛋鸡血细胞体外代谢模型为基础，在细胞培养3h时进行利巴韦林给药孵育，在0.5 h、1h、2h、3h取培养液，用Q-TOF对软件分析出的代谢产物进行定性分析。结果发现，利巴韦林在蛋鸡血细胞模型中代谢产生5种代谢物，其中TCONH2、RTCOOH和RDP等3种代谢产物与已报道的哺乳动物体内代谢产物一致，还发现了利巴韦林的另外两种代谢物葡萄糖醛酸化产物（MRBV-3即RBV-3，5-DGlcA）和硫酸化产物（MRBV-4即RBV-5-SO3H），证明利巴韦林在蛋鸡血细胞中不仪存在去糖基化或酰胺水解及磷酸化代谢途径，还存在哺乳动物体内未报道的葡萄糖醛酸化和硫酸化代谢途径。
　　3.利巴韦林在蛋鸡体内血浆中代谢产物分析。本部分对蛋鸡进行利巴韦林给药实验，采集给药后1-4h的血浆，将未给药的空白样和给药后所得样品同时进行处理，用LC/Q-TOF/MS进行代谢产物分析。结果表明，利巴韦林在蛋鸡体内代谢产生5种代谢产物，其中TCONH2、RTCOOH和TCOOH等3种代谢产物与已报道的哺乳动物体内代谢产物一致，充分证明了利巴韦林在蛋鸡体内也存在去糖基化或酰胺水解途径;与血细胞体外代谢实验结果类似，蛋鸡体内研究也发现了利巴韦林的硫酸化代谢产物RBV-5-SO3H(MRBV-N5同MRBV-4)，说明蛋鸡体内存在利巴韦林的硫酸盐化代谢途径;此外，与血细胞代谢模型研究结果不同，还发现了利巴韦林的乙酰化代谢产物RBV-CH3CO(MRBV-N4)。

目录

声明

摘要

英文缩略表

第一章 引言

1．1 利巴韦林代谢研究进展

1．1．1 利巴韦林简介

1．1．2 利巴韦林在各种动物体内的药代动力学研究

1．1．3 利巴韦林的代谢途径及代谢产物研究

1．2 药物代谢及其研究方法概述

1．2．1 药物代谢的概念与代谢方式

1．2．2 药物代谢研究主要方法

1．3 研究内容和意义

第二章 鸡血细胞体外代谢模型建立研究

2．1 材料与方法

2．1．1 实验材料

2．1．2 仪器与设备

2．1．3 实验方法

2．2 结果与分析

2．2．1 血细胞的存活率

2．2．2 细胞培养条件筛选

2．2．3 血细胞最佳给药时间的确定

2．2．4 利巴韦林及其已知代谢产物的检测

2．3 讨论

2．4 结论

第三章 利巴韦林在蛋鸡血细胞模型中体外代谢产物探究

3．1 材料与方法

3．1．1 实验材料

3．1．2 仪器和设备

3．1．3 实验方法

3．2 结果与分析

3．2．1 利巴韦林可能代谢物理论分析

3．2．2 利巴韦林的MS／MS图谱解析

3．2．3 利巴韦林在蛋鸡血细胞模型中的代谢产物分析

3．3 讨论

3．4 结论

第四章 利巴韦林在蛋鸡体内血浆中代谢产物分析

4．1 材料与方法

4．1．1 实验材料

4．1．2 仪器和设备

4．1．3 实验方法

4．2 结果与分析

4．2．1 已知代谢途径代谢产物分析

4．2．2 未知代谢途径代谢产物分析

4．3 讨论

4．4 结论

第五章 全文结论

参考文献

致谢

作者简历