布鲁氏菌膜相关蛋白的原核表达和抗原性鉴定

摘要

本试验通过对马耳他布鲁氏菌基因组的编码序列分析，初步筛选出32种该菌外膜相关蛋白，利用相关生物学软件分析并设计相应的引物，然后以灭活的菌体基因组为模板扩增目的片段。将目的片段直接经限制性内切酶BamHI、EcoRI、XhoI直接酶切后与相应酶切的表达载体pGEX-4T-2连接，构建成功28个重组表达载体；经菌株鉴定、重组载体酶切鉴定和序列分析确定转化菌株后，再经IPTG诱导、SDS-PAGE检测，结果显示9个目的蛋白在大肠杆菌中获得了表达。最后，以布鲁氏菌病临床阳性动物血清为一抗，通过Western-blotting初步检测发现6个外膜相关蛋白能够与布鲁氏菌病临床阳性动物血清发生免疫学反应。该项研究为进一步筛选布病诊断用的布鲁氏菌外膜相关的蛋白性抗原奠定了基础，同时为蛋白功能鉴定做了前期准备工作。

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文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

声明

第一章引言

1.布鲁氏菌病的危害及流行

2.布鲁氏菌病的诊断与防治

3.外膜蛋白

4.分泌蛋白

5.本研究的目的与意义

第二章材料与方法

1.材料

2.方法

第三章结果

1.分析目的蛋白结构及特性

2.PCR扩增结果

3.重组表达载体的PCR鉴定

4.重组表达载体的双酶切鉴定

5.重组表达载体的序列测定

6.目的基因在大肠杆菌中的表达

7.重组蛋白的抗原性鉴定结果

第四章讨论

第五章结论

参考文献

附录

致 谢

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