溶藻弧菌附着定植因子ACFA蛋白的原核表达、抗原性鉴定及生物信息学分析

摘要

溶藻弧菌附着定植因子ACFA蛋白具有很好的免疫原性,在疫苗上有应用前景.本试验通过分子克隆获得ACFA蛋白的表达菌株,利用SDS-PAGE切胶纯化与尿素浓度梯度复性获得ACFA蛋白,免疫小鼠制备抗血清,Western-blotting检测发现ACFA蛋白具有很好的抗原性.利用在线软件预测ACFA蛋白为亲水的分泌型蛋白,存在多个酶切位点;采用TMHMM Serv erv.2.0程序预测ACFA无跨膜结构并定位于细胞膜外;SOPMA服务器预测ACFA二级结构中含无规则卷曲32.56％,a-螺旋25.58％,β-转角6.05％,β-片层35.81％.通过SignalP 4.1软件分析显示,ACFA的1～18位氨基酸为信号肽序列.通过Swiss-Model程序预测的三维结构显示,ACFA蛋白没有配体.利用ABCpred和BepiPred方案,预测ACFA存在4个B细胞表位.运用神经网络与量化矩阵法预测ACFA具有2个CTL表位.使用MHC-Ⅱ类分子结合肽在线程序预测发现ACFA存在2个Th表位.