转基因作物GT73油菜与59122玉米的PCR检测技术研究

摘要

本研究以尚未建立转化事件特异性检测体系的转基因作物GT73油菜和59122玉米为研究对象，主要研究内容和结论有以下三个方面： 1．利用反向PCR(I-PCR)技术，热不对称交错PCR(TAIL-PCR)技术确定转基因作物的侧翼序列。结果表明，两种方法都成功地分离GT73油菜的侧翼序列，且两种方法各有优缺点；反向PCR成功地分离59122玉米左右两边界的侧翼序列。 2．根据侧翼序列设计特异性引物，以转基因作物种属特异性基因作为PCR扩增的内源参照，经过反复实验，建立转化事件特异性定性定量检测体系。结果表明，定性体系具有较好的特异性和灵敏度，GT73和59122的检测限分别为0.05％和0.1％；定量体系具有较好的重复性，用标准分子确定的两种转基因作物的检测限都可达到10个拷贝数。 3．利用重组PCR技术构建标准分子，以标准分子作为定量PCR外部标准品并建立标准曲线，检测含有转基因成分的混合样品，根据标准曲线计算转基因成分的含量。结果表明，重组PCR技术用于构建标准分子快速可行；以标准分子作为定量标准品的检测结果具有较好重复性和再现性，标准分子可以代替法定标准物进行定量检测。 这些研究内容和结论将会为今后转基因产品检测提供技术依据。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要仪器设备、缩略词

声明

第一章文献综述

第二章转基因油菜GT73的PCR检测技术研究

2.1材料与试剂

2.2实验方法

2.3结果与讨论

第三章转基因玉米59122的PCR检测技术研究

3.1材料与试剂

3.2实验方法

3.3结果与讨论

第四章总结与展望

4.1总结

4.2对进一步工作的建议

参考文献

附录

致谢

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