红芪多糖对糖尿病肾病db/db小鼠肾组织VEGF与PEDF表达的影响

摘要

目的:本研究通过观察红芪多糖(HPS)对糖尿病肾病(DN)db/db小鼠肾组织中血管内皮生长因子(VEGF)与色素细胞衍生因子(PEDF)mRNA及蛋白表达水平的影响,客观评价HPS对DN小鼠肾脏保护作用,进一步探讨其治疗本病的可能机制。
　　方法:SPF级11周龄BKS背景雄性小鼠60只,其中db/db小鼠50只,db/m小鼠10只。适应性喂养一周,于12周龄时将db/db小鼠用随机数字表法分为5组,每组10只:HPS高剂量组(400mg.kg-1.d-1)、中剂量组(200mg.kg-1.d-1)、低剂量组(100mg.kg-1.d-1)、依那普利组(10mg.kg-1.d-1)、模型组(等体积生理盐水)。db/m小鼠作为正常对照组给予等体积生理盐水灌胃。连续灌胃8周,于治疗前及治疗后每2周检测体重。第8周末,框后静脉取血,留取血标本用于部分血液生化检测。处死小鼠,立即剥离肾脏,右肾皮质用于肾脏病理学检测;左肾速冻于-80℃冰箱保存,用于RT-PCR、Western blotting检测肾组织VEGF及PEDF mRNA和蛋白的表达量。
　　结果:至实验结束时,模型组小鼠精神萎靡,毛色晦暗无泽,明显多饮、多尿、多食;体重、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、血清尿素氮(BUN)及肌酐(SCr)值明显高于正常对照组(P<0.01);肾组织病理切片Masson染色显示:模型组小鼠肾小球明显肥大,系膜区增宽,毛细血管基底膜增厚,大量胶原纤维呈絮团样分布;电镜下可见模型组小鼠肾组织足突大片融合、细胞外基质(ECM)沉积,肾小球基底膜(GBM)滤孔增大,厚度明显增加;模型组小鼠肾组织中VEGF mRNA及蛋白表达量增高,PEDF mRNA及蛋白的表达下降。而正常对照组无上述变化。治疗8周后,与模型组比较, HPS中、高剂量组及依那普利组小鼠体重、TG、TC、BUN及SCr明显下降(P<0.05);肾间质纤维化、GBM增厚程度均减轻(P<0.05);肾组织中VEGF mRNA及蛋白表达量明显下降(P<0.05),PEDF mRNA及蛋白表达量明显升高(P<0.05),相关性分析显示:VEGF与PEDF之间相互呈负线性相关。HPS各剂量组间呈量效关系,以HPS高剂量组各项观察指标改善最为明显,且疗效优于依那普利组(P<0.05)。
　　结论:HPS能够治疗db/db小鼠DN。其作用机理可能是通过HPS扶正祛邪的独特功效,使VEGF与PEDF在DN小鼠肾脏中的表达水平趋于平衡,从而抑制了肾脏血管增生,延缓了肾小球硬化和肾间质纤维化的进展,起到保护肾脏的作用。

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前言

立题依据

1. 红芪治疗糖尿病肾病的研究进展

2. VEGF及PEDF与糖尿病肾病

2.1血管内皮生长因子（VEGF）与糖尿病肾病

2.2色素上皮细胞衍生因子（PEDF）与糖尿病肾病

2.3 VEGF与PEDF的相互关系

3. 课题组前期研究基础

4. 研究前景

文献综述

综述一 糖尿病肾病的现代医学研究进展

综述二 糖尿病肾病的中医学研究进展

实验研究

一、技术路线图

二、材料与方法

三、实验观察项目及步骤

四、统计方法

五、实验结果

结语

1. 结论

2. 展望

参考文献

致谢

附录