苍耳组织培养、快繁体系及愈伤组织提取物的抑菌活性研究

摘要

化学农药的长期使用，产生了严重的“3R”问题(即抗药性Resistance，再猖獗Resurgence，农药残留Residence)。从植物中寻找对有害生物有生物活性的次生代谢物，经分离、提纯或作为人工合成新农药品种的模板已成为当代农药研究的经典。 苍耳在医药、农药等多方面有很高的应用价值，本文对苍耳愈伤组织的诱导、组织培养技术体系的建立、愈伤组织提取物对番茄灰霉病菌(BotrytiscinereaPers.)的抑菌活性等进行了初步的探讨研究，并用生长速率法、黄瓜子叶法对野生苍耳、栽培苍耳、组培苍耳提取物的抑菌活性进行了比较分析，得出以下结论： 1.以苍耳叶片、叶柄及茎段为外植体，在MS附加不同激素种类和浓度配比的培养基上对苍耳愈伤组织进行诱导培养，并对获得生长迅速、性状好的愈伤组织培养条件及培养基进行了系统研究。通过研究发现：对苍耳茎段进行消毒处理时，0.1﹪升汞消毒5min为较理想的消毒处理；苍耳愈伤组织在光照培养下生长快，性状好；不同组合及浓度配比的培养基对愈伤组织的诱导率存在显著差异，苍耳对2,4-D敏感，不宜用来诱导愈伤组织；MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L、MS+6-BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L的激素组合是诱导愈伤组织的最佳培养基；叶片、茎段形成的愈伤组织性状较好，出愈早，出愈率高，量多，愈伤为浅绿色，质地疏松，有生活力，是苍耳愈伤组织诱导的最适外植体。 2.以野生苍耳种子室内盆栽的植株带腋芽茎段作为外植体进行组织培养技术的初步研究和探索。通过研究发现：苍耳带腋芽茎段接种在不同激素配比的培养基中，其腋芽萌发率、萌动时间及芽体生长状态均存在明显差异，MS、MS+KT2.0mg/L为苍耳腋芽诱导萌发的最佳培养基，诱导芽的效果最好。苍耳茎段在MS+6BA1.0mg/L+GA32.0mg/L的培养基中增殖倍数较高，有利于丛生芽诱导，而且苗体生长健壮，为苍耳丛生芽诱导较好的培养基。NAA使芽先愈伤化，抑制芽的增殖，不宜用来诱导丛生芽。适宜苍耳壮苗及继代培养的培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，在此培养基上，小芽健壮，生长速度快，茎段增粗，基部产生少量愈伤组织。在附加NAA0.5mg/L、KT2.0mg/L的MS培养基中生根率可达80﹪以上，根的生长状态最好，呈浅绿色，数量多，可生长出旺盛的完整苍耳再生植株。 3.利用生长速率法、孢子萌发法，研究了苍耳愈伤组织丙酮提取物对番茄灰霉菌菌丝生长及形态、孢子形成及形态、孢子萌发的影响。结果表明：苍耳愈伤组织丙酮提取物对番茄灰霉菌具有较强的抑制作用，其抑制菌丝生长的EC50为20.27mg/mL；抑制孢子形成和萌发的EC50分别为9.58mg/mL和15.21mg/mL；显微观察可见菌丝体变细、节间拉长、分支增多，颜色变浅、胞内物质外渗、内含物减少；产孢极少，长势弱；孢子芽管短小、畸形。 4.利用黄瓜子叶法，对野生苍耳、栽培苍耳、组培苍耳提取物的抑菌活性进行了比较测定，对5种供试真菌的有效中量(EC50)和对番茄灰霉菌保护作用及治疗作用的效果进行差异显著性测验，发现三种不同来源的苍耳提取物对五种供试菌的抑菌活性差异和对番茄灰霉菌保护作用及治疗作用的效果差异均不显著。由此说明，组培苍耳对五种供试病菌的抑菌活性与野生及栽培苍耳植株等同。 因此，在甘肃省自然条件下，野生苍耳资源有限、苍耳驯化困难、可耕地面积减少，利用苍耳组织/细胞培养技术解决苍耳开发利用中的资源有限问题，保护生态环境，实现工厂化开发植物源农药等研究具有很重要的意义。

目录

文摘

英文文摘

前言

第一章文献综述

第二章苍耳愈伤组织的诱导和培养

第三章苍耳组织培养和植株再生体系的建立

第四章苍耳愈伤组织提取物对番茄灰霉菌的活性研究

第五章野生苍耳、栽培苍耳、组培苍耳提取物抑菌活性的比较研究

第六章结论与讨论

致谢

参考文献

附录一缩略词

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