阿片类物质和天然多酚类化合物对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的生理作用及可能机制

摘要

众所周知，阿片类物质是镇痛剂，其中内吗啡肽1（Endomorphin1，EM1）、内吗啡肽2（Endomorphin2，EM2）和吗啡（Morphine，Mor）对μ阿片受体具有很高的亲和性和选择性，它们独特的生理活性已经成为生物学研究的热点。同样，咖啡酸苯乙酯（Caffeic acid phenethyl ester，CAPE）、咖啡酸（Caffeic acid，CA）、阿魏酸（Ferulic acid，FA）、阿魏酸乙酯（Ethyl ferulate，EF）等天然多酚类化合物都有抑制氧化应激的作用。因此，本实验利用谷氨酸（Glutamate，Glu）处理过的大鼠嗜铬细胞瘤12（Pheochromocytoma12，PC12）细胞模拟兴奋毒性损伤模型，研究EM1/2和Mor在损伤过程中对细胞活性的影响；并通过检测超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、还原性谷胱甘肽（Reduced glutathione，GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase，GPx）、谷胱甘肽还原酶（Glutathione reductase，GR）活性的变化，来分别探讨阿片类物质和天然多酚类物质对Glu引起的PC12细胞损伤的生理作用及可能的机制。研究结果表明： 1．浓度为100μmol·L-1的EM2、Mor和10μmol·L-1的EM1对Glu处理的PC12细胞的存活率有极显著影响（P<0．01），而1mmol·L-1的纳洛酮（Nalxone，Nal）则抑制EM1、EM2、Mor对Glu引起的PC12细胞损伤。这一过程可能由阿片受体介导，说明阿片类物质对预防和治疗神经退行性疾病有一定作用。 2．浓度为1μmol·L-1的CAPE、CA、FA和EF对经150 mmol·L-1的Glu处理的PC12细胞的存活率的影响具有极显著性意义（P<0．01），其作用强弱顺序为CAPE>CA>FA>EF。 3．CAPE、CA、FA和EF作用后PC12细胞的SOD和GPx的活性降低，而GSH和GR的活性升高，由此说明咖啡酸苯乙酯及其类似物对Glu引起的PC12细胞损伤的作用可能与它们的抗氧化活性有关，对神经退行性疾病的预防和治疗有重要的意义。

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论文说明：缩略词

声明

第一章文献综述

1.1细胞培养技术在生态生理研究领域中的应用

1.1.1氧化应激与细胞形态及生长状况的关系

1.1.2氧化应激与离子吸收的关系

1.1.3氧化应激与细胞代谢的关系

1.1.4氧化应激与信号传导的关系

1.2内吗啡肽的研究进展

1.2.1内吗啡肽的化学结构

1.2.2内吗啡肽的生理作用

1.3天然多酚类化合物的生理活性研究进展

1.3.1 CAPE的化学结构

1.3.2 CAPE的生理药理作用

1.3.3 CAPE的类似物CA、FA和EF的生理活性

1.4谷氨酸的兴奋性毒性

1.4.1 Glu的生化

1.4.2 XAG-与兴奋性毒性

1.4.3 GluR与兴奋性毒性

1.5自由基与生物抗氧化剂

1.5.1活性氧自由基在体内的生成及其防御体系

1.5.2氧化应激及其对生物大分子的损伤

第二章研究目的与内容

2.1选题背景

2.2研究目标

2.3主要研究内容

2.4技术路线

第三章 内吗啡肽和吗啡对谷氨酸诱导的PCI2细胞损伤的生理作用及可能机制

3.1实验材料

3.2仪器与试剂

3.2.1主要仪器设备

3.2.2主要试剂

3.3实验方法

3.3.1 PC12细胞培养

3.3.2 Glu对PC12细胞存活率的影响

3.3.3 EM 1/2、Mor、Nal对PCI2细胞存活率的影响

3.3.4 EM 1/2、Mor、Nal对Glu诱导的PC12细胞活力的影响

3.3.5 Nal对EM 1/2、Mor对Olu诱导的PC12细胞活力的影响

3.3.6 MTT法检测细胞存活率

3.3.7统计学分析

3.4结果与分析

3.4.1 Glu对PC 12细胞的损伤作用

3.4.2 EM 1/2、Mor、Nal对PC12细胞存活率的影响

3.4.3 EM 1/2、Mor、Nal对Glu诱导的PC12细胞存活率的影响

3.4.4 Nal对EM 1/2、Mor对Glu诱导的PC12细胞存活率的影响

3.5讨论

3.6小结

第四章天然多酚类化合物对谷氨酸引起PC12细胞损伤的生理作用及可能机制

4.1实验材料

4.2仪器与试剂

4.2.1主要仪器设备

4.2.2主要试剂

4.3实验方法

4.3.1 PC12细胞培养

4.3.2 Glu对PC12细胞存活率的影响

4.3.3 CAPE、CA、FA、EF对Glu损伤的PC12细胞存活率的影响

4.3.4 MTT法检测细胞存活率

4.3.5氧化应激指标的测定

4.3.6统计学分析

4.4结果与分析

4.4.1 Glu对PC12细胞的损伤作用

4.4.2 CAPE、CA、FA和EF对Glu损伤的PC12细胞存活率的影响

4.4.3 CAPE、CA、FA、EF对谷氨酸损伤的PC12细胞内活性氧水平的影响

4.5讨论

4.6小 结

第五章结论

参考文献

致谢

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