敲低MSX2基因表达对胰腺癌PANC1细胞上皮-间质转化的影响及其机制研究

摘要

目的：探究MSX2与胰腺癌PANC1细胞EMT(Epithelial-Mesenchymal Transitions)发生的关系，并初步研究其机制
　　方法：
　　1.通过RNA干扰的方法敲低胰腺癌PANC1细胞中的MSX2表达，并用qRT-PCR及Western-blot检测干扰效率,选取干扰效率最高的一组用于后续试验。
　　2.观察干扰前后胰腺癌细胞发生的形态学变化。
　　3.通过qRT-PCR和western-blot试验检测干扰前后胰腺癌细胞中EMT标志分子E-钙粘蛋白和波形蛋白在基因和蛋白水平的表达变化。
　　4.通过划痕、transwell和CCK-8试验检测干扰前后胰腺癌细胞的侵袭转移能力、增殖能力的变化。
　　5.通过RT-PCR试验检测干扰前后胰腺癌细胞中EMT相关转录因子snail、slug、twist、zeb1的表达变化，进而初步探索MSX2对胰腺癌PANC-1细胞EMT发生作用的分子机制
　　结果：
　　1.干扰MSX2后，PANC1细胞由长梭形变成连接紧密的椭圆形。
　　2.干扰后E-cadherin在基因和蛋白水平的表达量均发生上调，而vimentin表达则下降(P<0.05)，细胞发生了MET（mesenchymal-epithelial transition）转变。
　　3.干扰MSX2基因后PANC1细胞侵袭转移能力降低，增殖能力受到抑制。
　　4.干扰MSX2后引起snail和twist基因表达明显低于对照组(P<0.05)，推测其可能是MSX2促进PANC1发生EMT的靶基因
　　结论：
　　1.敲低胰腺癌PANC1细胞的MSX2基因表达可抑制EMT的发生，并且细胞的侵袭转移、增殖能力降低。
　　2.MSX2在胰腺癌中高表达，并且与癌细胞的恶性表型密切相关，具有做为诊断及治疗的潜在作用。

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英文摘要

1.引言

2.材料与方法

2.1 试验细胞

2.2 主要试剂及耗材

2.3 主要实验仪器

2.4 实验方法

3.结果

3.1 胰腺癌细胞培养

3.2 质粒提取及电泳

3.3 质粒转染胰腺癌PANC-1细胞

3.4 转染各组质粒后胰腺癌细胞中MSX2基因表达的变化

3.5 Western-blot检测干扰前后MSX2在蛋白水平的表达变化

3.6 EMT相关检测

3.7 CCK-8法检测细胞增殖

3.8 transwell试验检测细胞的侵袭能力

3.9 划痕试验检测细胞迁移能力

3.10 RT-PCR 探索干扰MSX2后PANC1细胞发生MET的分子机制

4.讨论

5.结论

参考文献

致谢

附录A 中英文术语缩略语对照表

附录B个人简历

附录C 综述: MSX2基因与肿瘤关系的研究进展