保健食品中原花青素的分析及缓解视疲劳功效研究

摘要

原花青素是植物中广泛存在的黄烷-3-醇类化合物的总称，具有强大的清除自由基能力，是目前公认为最有效的天然抗氧化剂。原花青素广泛的药理活性和美容效果正推动其作为标志性成分占据更大的保健品市场份额。然而，由于这类物质结构的复杂性，相应的质量评价体系并未完善，这将阻碍其走向市场。因此本课题从前处理、含量检测、单体含量测定、平均聚合度四个方面分析保健食品中的原花青素，并对其进行缓解视疲劳功能研究，以期为原花青素完善的质量评价体系提供依据。课题主要包括以下两个方面: 一.保健食品中原花青素的分析 1.研究了水浴超声提取原花青素的重要影响因素。 方法:选择原花青素含量较高的产品为研究对象，通过单因素试验比较了溶剂种类、溶剂比例、提取温度、提取时间、提取液pH对提取率的影响。选取出溶剂比例、提取温度、提取液pH三个较大的影响因素，采用响应曲面优化法获得提取的最佳条件。结果:优化出提取参数为乙醇浓度70.37％，温度为62℃，pH为5.11，提取率2.578％。实际过程中，可将提取参数修正为乙醇浓度70％，温度为60℃，pH为5。 2.建立铁盐催化—高效液相色谱法测定原花青素的含量 方法:原花青素经铁盐催化降解为花青素离子后进行HPLC分析。通过单因素与正交实验优化降解条件为加入0.2 mL10 g/L的硫酸高铁铵溶液及8.8mL正丁醇与盐酸比例为97∶3的混合液，在100℃水浴中加热1h。色谱条件为Ultimate XB-C18色谱柱(4.6mm*150 mm，5μm)，流动相为甲醇∶0.1％磷酸=45∶55，流速0.5 mL/min，柱温30℃，检测波长530 nm。结果:原花青素在所考察浓度范围内线性良好(r=0.9994)，最低检出限为9.33μg/mL，不同剂型样品的重复性与回收率均满足要求。 3.建立荧光内标法同时测定原花青素类保健品中(+)-儿茶素和(-)-表儿茶素两种单体的含量。 方法:色谱柱Ultimate XB-C18柱(4.6 mm*250 mm，5μm);流动相:A为乙腈，B为0.1％甲酸水溶液，梯度洗脱:0-9 min，11％A;9-10 min，11％A→30％A;10-18 min，30％A;18-18.1 min，30％A→11％A;18.1-25 min，11％A。流速1 mL/min;柱温30±5℃;二极管阵列检测器扫描波长200-400 nm;荧光检测器条件:0-10 min，Eex/Eem=280nm/305 nm;10-25 min，Eex/Eem=300 nm/370 nm含量通过内标物白藜芦醇进行校正。结果:(+)-儿茶素和(-)-表儿茶素的平均回收率分别为100.84％、99.60％，RSD分别为1.02％，1.15％。 4.建立原花青素的摩尔浓度测定方法并计算平均聚合度。 方法:1 mL样品中加入5mL含有0.1％二甲氨基肉桂醛和25％盐酸的显色剂，10 min后测定640 nm处吸光值。此方法较目前使用的改良香草醛法在灵敏度、专属性、稳定性方面更优。原花青素的摩尔浓度在0.0276～0.2758 mmol/L范围内呈现良好线性，不同剂型保健品的回收率在85.87～90.18％内。 二.原花青素提取物缓解视疲劳功能研究 以越橘原花青素提取物为受试物，在安全毒理评价无异常的基础上，根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）缓解视疲劳功能评价中的方法，进行人体试食实验。最后眼部症状调查、明视持久度、总有效率和总改善率三个方面功效指标均达到标准要求，说明受试物具有缓解视疲劳保健功效。

目录

声明

摘要

前言

第一章 原花青素前处理方法考察

1 引言

2 实验材料

2．1 仪器

2．2 试剂

3 实验方法

3．1 试液制备

3．2 样品制备

3．3 标准曲线绘制

3．4 样品含量测定

4 单因素影响试验

4．1 溶剂种类对原花青素提取率的影响

4．2 乙醇浓度对提取率的影响

4．3 提取温度对原花青素提取率的影响

4．4 提取时间对原花青素提取率的影响

4．5 pH对原花青素提取率的影响

5 Box-behnken设计与响应面分析

5．1 Box-Behnken设计

5．2 响应曲面分析与优化

6 小结

第二章 原花青素的含量测定方法

1 引言

2 仪器与试剂

2．1 仪器

2．2 试剂

3 实验方法

3．1 实验原理

3．2 标准溶液配制

3．3 供试品制备

3．4 降解条件

3．5 色谱条件

4 铁盐催化法实验条件优化

4．1 反应时间与反应温度

4．2 硫酸高铁铵浓度

4．3 酸度与水分

4．4 最佳条件

5 方法学考察

5．1 线性与最低检出限

5．2 精密度试验

5．3 重复性试验

5．4 稳定性试验

5．5 准确度实验

5．6 干扰因素考察

5．7 与分光法的比较

6 讨论

6．1 与香草醛法的比较

6．2 香草醛法的不稳定性

7小结

第三章 荧光内标法同时测定原花青素中(+)-儿茶素和(-)-表儿茶素的含量

1 引言

2 仪器与试剂

2．1 仪器

2．2 试剂

3 实验方法

3．1 质谱分析条件

3．2 标准溶液制备

3．3 供试品制备

4 质谱定性鉴定

5 荧光法分析条件

5．1 荧光波长选择

5．2 色谱条件

6 方法学考察

6．1 标准曲线与检测限

6．2 精密度与重复性

6．3 样品稳定性

6．4 方法回收率

6．5 样品测定

7 小结

第四章 平均聚合度的研究

1 引言

2 实验材料

2．1 仪器

2．2 试剂

3 实验方法

3．1 溶液配制

3．2 供试品制备

3．3 显色方法

3．4 样品平均聚合度计算

4 显色条件选择

4．1 介质的选择

4．2 酸度的影响

4．3 显色时间与稳定性

4．4 两种显色试剂的比较

5 方法学考察

5．1 线性范围和检出限

5．2 精密度与重复性

5．3 准确度

6 样品测定

7 小结

第五章 原花青素提取物缓解视疲劳功效研究

1 实验材料

1．1 受试物

1．2 志愿者纳入标准

1．3 随机分组

2 实验方法

2．1 试食方法

2．2 安全性观察指标

2．3 功效指标

3 结果

3．1 安全性指标

3．2 功效性指标

4 结果判定

总结

参考文献

致谢

文献综述 原花青素的研究进展

作者简历