基于NF-κB调控趋化因子研究复方茵陈脂肝颗粒治疗非酒精性脂肪肝病的作用机制

摘要

目的:研究复方茵陈脂肝颗粒(ACF)对非酒精性脂肪肝大鼠及模型细胞NF-κ B及其调控的炎症趋化因子表达的影响，探讨ACF治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的分子机制，为其在临床应用奠定理论基础。
　　方法:
　　体内实验:选择SPF级SD雄性大鼠72只，随机分成正常对照组16只、模型组56只，模型组给予高脂饲料喂养6周后，分别从对照组和模型组随机选取6只，取肝脏做病理切片，确认造模成功后将模型组大鼠随机分为5组，即模型组、阳性对照非诺贝特组、ACF低剂量组、ACF中剂量组、ACF高剂量组，每组10只，继续予以高脂饲料喂养。对照组、模型组分别给予等量生理盐水灌胃，非诺贝特按0.24g/kg.d1灌胃给药，ACF低、巾、高剂量组分别按0.462g/kg·d10.924g/kg·d1及1.848g/kg·d1灌胃给药。持续4周后取材，测量各组大鼠肝重及肾周和附睾脂肪的重量;分离血清，检测ALT、AST、TG、TC、HDL-C、LDL-C的水平;HE染色观察肝组织病理学改变，油红0染色观察肝细胞内脂质沉积状况;Real time-PCR和IHC分别检测大鼠肝组织巾NF-κB、CCL2、CCL3、CCL4、CXCL10、TNF-α、IL-6 mRNA和蛋白表达。
　　体外实验:采用油酸/棕榈酸(OA/PA)共同刺激人肝癌细胞株HepG2，制备NAFLD体外细胞模型并用不同浓度ACF进行干预。油红0染色观察细胞胞浆内脂质沉积情况;细胞免疫荧光检测NF-κB蛋白的表达，ELISA检测细胞上清液巾分泌的炎症趋化因子CCL2、CCL3、CCL4、CXCL10、TNF-α、IL-6的表达。
　　结果:
　　体内实验:
　　(1)与正常组相比，模型组大鼠内脏型肥胖，具有统计学差异（P＜0.05)，病理切片出现弥漫性肝细胞脂肪变性，主要为大泡性脂肪变性，并可见大量炎性细胞浸润，油红0染色可见肝细胞内有大量脂质沉积，血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C的含量显著增加，HDL-C含量明显下降（P＜0.05），NF-κ B和CCL2、CCL3、CCL4、CXCL10、TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白的表达显著升高（P＜0.05）;
　　(2)与模型组比较，非诺贝特组和ACF各剂量组的脂肪性炎性及脂质沉积有明显减轻和好转，血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C的含量明显降低，HDL-C含量明显上调（P＜0.05），大鼠肝组织NF-κB和CCL2、CCL3、CCL4、CXCL10、TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白的表达显著降低（P＜0.05）。此外，ACF还能减轻大鼠内脏型肥胖（P＜0.05）。
　　体外实验:
　　(1)与对照组相比，模型组HepG2细胞经油红0染色后，胞浆内有大量桔红色或红色的颗粒状脂滴堆积，经过不同浓度ACF干预24小时后，胞浆内红色颗粒状脂滴有不同程度减少;
　　(2)免疫荧光结果显示模型组中NF-κ B的荧光强度较对照组明显增加，ACF干预后NF-κ B的荧光强度减弱;
　　(3) ELISA结果显示细胞上清中CC12、CXCL10、TNF-α、IL-6的含量显著升高，与对照组相比具有统计学差异（P＜0.05);ACF干预后24h后上清中CC12、CXCL10、TNF-α、IL-6的含量降低明显，与模型组相比较均有显著差异性（P＜0.05)。
　　结论:
　　(1)复方茵陈脂肝颗粒具有肝脏保护作用，能明显改善NAFLD模型大鼠的肝脏脂肪变性、调节脂质代谢和抑制体外模型细胞脂滴聚集。
　　(2)在NAFLD动物和细胞模型巾，复方茵陈脂肝颗粒通过降低NF-κ B及其调控的炎症趋化因子的表达水平来减轻炎症反应，这可能是其治疗NAFLD的作用机制之一。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

前言

第一章 实验材料与方法

一 动物实验材料

二 动物实验方法

三 细胞实验材料

四 细胞实验方法

第二章 实验结果

一、动物实验结果

二、细胞实验结果

第三章 讨论

1 ACF的降脂保肝作用

2 ACF对炎症反应的调节作用

2．1 NF-κB在NFFLD中的作用

2．2 趋化因子在NAFLD中的作用

问题与展望

结论

参考文献

致谢

文献综述 炎症与非酒精性脂肪肝

作者简历