缺刻缘绿藻甘油-3-磷酸酰基转移酶基因克隆及原核表达

摘要

甘油-3-磷酸酰基转移酶(G3PAT)为酰基转移酶家族成员之一，主要催化甘油-3-磷酸甘油骨架sn-1的酰基化反应，可存在于内质网、叶绿体和线粒体中，在三酰甘油(TAG)和磷脂酰甘油(PG)合成中起重要作用。基于Ostreococcus tauri(GenBank 登录号：116061306)及莱茵衣藻(GenBank登录号：159473711)的G3PAT氨基酸保守序列，根据缺刻缘绿藻密码子的偏好性设计一对简并引物，以缺刻缘绿藻cDNA为模板进行PCR扩增，获得一321 bp扩增产物，经序列分析，它与莱茵衣藻的G3PAT氨基酸序列有75％的同源性。利用SMART RACE技术扩增得到其5’-端和3’-端cDNA序列后，与所得片段序列拼接获得长度为3284 bp的缺刻缘绿藻甘油-3-磷酸酰基转移酶(MiG3PAT)基因cDNA全长序列，其中5’-非翻译区(UTR)序列长1652bp，3’-UTR序列长354 bp且有明显的ployA+尾，开读框架(ORF)序列长1305 bp，编码434个氨基酸。本研究为今后对MiG3PAT基因功能及定位分析奠定基础，并为氮限制条件下缺刻缘绿藻脂类合成代谢探讨提供理论依据。