利用PRRSV Nsp2基因稳定表达外源基因的研究

摘要

本研究在PRRSV疫苗株HuN4-F112感性克隆平台的基础上，采用突变PCR的方法将Nsp2基因508-532位氨基酸缺失，同时在该缺失区域中插入NDV NP蛋白C末端49个氨基酸，分别构建了两个含PRRSV HuN4-F112基因组全长的cDNA克隆，即pSK-HN4vac- △25和pSK-HN4vac- △25+NP49，然后我们通过体外转录、转染BHK21细胞，并在Marc-145细胞上进行病毒拯救，经过对救获病毒的IFA检测、序列测定、以及引入gene marker的鉴定。最后结果为：在PRRSV Nsp2基因内部缺失一定区域，不会影响病毒的生长特性，同时在一定范围内引入适当大小的外源基因可以使之获得稳定遗传和表达。同时本研究为今后研制PRRSV基因工程标记疫苗奠定了基础。