金黄色葡萄球菌烈性噬菌体的分离鉴定和最佳保存方法研究

摘要

基于细菌rRNA区域序列的PCR技术，通过设计特异性引物从奶样中快速、准确地鉴定奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌。采用金黄色葡萄球菌与挤奶前从奶牛乳房上洗刷下来的污水经过3次富集的方法，通过双层琼脂平板法，分离纯化得到了强裂解性的奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌的噬菌体。试验中分离的是可收缩尾的噬菌体，其头部为二十面体，约50mm×62.5nm，尾部长约187.5nm，尾宽约37.5nm，有尾鞘、基板等结构。纯化后在双层琼脂平板上形成的噬菌斑大而整齐，边缘光滑，透明，直径约2mm，具有明显的强裂解性噬菌体特性，通过测定，噬菌体的最佳感染复数为0.01，效价大于109PFU/mL。对噬菌体的不同保存方法进行比较，结果表明，将噬菌体置于-80℃加入7%DMSO冷藏是其保存较好的方法。