雏鸭原代肝细胞的培养与鉴定

摘要

肝脏是一个复杂且重要的器官,它在代谢及解毒过程中发挥重要作用.由于在体研究肝脏代谢、病毒作用以及药物作用的机制比较困难,因此有必要建立原代肝细胞的模型.鸭原代肝细胞模型可以作为研究嗜肝DNA病毒如鸭乙型肝炎病毒(DHBV)以及其他禽类病毒性疾病、细菌性疾病的材料,对禽类的研究提供便利.足静脉麻醉7日龄雏鸭，首先从肠静脉灌流抗凝液，剪开右心房，释放灌流液，待肝脏呈土黄色，换含有胶原酶Ⅳ的后灌流液，待肝脏变软，取出肝脏。肝脏剪碎过滤，50×g离心，收集细胞，在DMEM/F12培养基中培养。原代细胞经胰酶消化传代，获得较纯肝细胞，细胞染色、计数确定细胞得率及活性。上述两步灌流法结合胰酶消化传代可获得稳定传3代、纯度较高的肝细胞，方法简便，成功率较高，为研究肝脏代谢、病毒作用以及药物作用建立了稳定的肝细胞模型。